维磷葡钙片质量标准提升研究

王 静，郭社民

（河南省濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳457000）

维磷葡钙片是由葡萄糖酸钙、磷酸氢钙、甘油磷酸钠、维生素B2、维生素D2组成的复方制剂，用于防治钙铁缺乏症，如佝偻病及妊娠期和哺乳期钙的补充。其现行质量标准为《国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准（第五册）》，但未对维生素B2的含量进行控制。本研究中参考文献[1-6]，采用高效液相色谱（HPLC）法测定该制剂中维生素B2的含量，并考察了其含量均匀度，为该制剂的质量标准提升提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），包括四元泵，在线脱气机，紫外检测器等；Sartorius CPA225D型电子分析天平（德国赛多利斯，精度为0.01 mg）。

1.2 试药

维生素B2对照品（批号为100369-201214，含量98.7%，中国食品药品检定研究院）；维磷葡钙片（市售品，批号分别为20180103，20180709，20180114，20181011，20181108，20181206）；甲醇、乙腈均为色谱纯（美国Tedia公司），水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇-（80∶13∶7，V/V/V）；流速：1.0mL/min；检测波长：444 nm；柱温：30℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

避光操作。取105℃干燥2 h的维生素B2对照品11.42 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加盐酸溶液（1→2）2 mL，振摇，使维生素B2溶解，加水20 mL继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 mL，置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品50片，研细，精密称取适量（约相当于维生素B22mg），置200 mL容量瓶中，加盐酸溶液（1→2）2 mL，振摇使溶解，加水40 mL继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按处方比例制备不含维生素B2的阴性对照样品，并按供试品溶液项下方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2项下供试品溶液、对照品溶液各20 μL，按拟订色谱条件测定，色谱图见图1。结果理论板数按维生素B2峰计应不低于3 500，分离度大于1.5，基线分离良好。

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，按拟订色谱条件测定，色谱图见图1。结果阴性对照品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处无干扰峰，表明方法专属性良好。

线性关系考察：精密量取对照品贮备液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分别置10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按拟订色谱条件分别进样20 μL，记录色谱图，以质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1.589 3+74.812 1X，r=0.999 9（n=7）。结果表明，维生素B2质量浓度在4.508～18.032 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取2.2项下对照品溶液20 μL，连续进样6次，记录峰面积。结果的RSD为0.36%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液（样品批号为20181206），于室温下放置0，2，4，6，7，8 h，精密吸取20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。结果的RSD为0.65%（n=6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为20180114）样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，重复测定6次。结果维生素B2的平均含量为99.89%，RSD为0.81%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的同一批（批号为20180114，每片含量0.095 9 mg，平均片重0.592 5 g）样品细粉约12.53 g，共9份，精密称定，分别置200 mL容量瓶中，分为3组，每组3份。分别精密加入维生素B2对照品溶液（0.399 4 mg/mL）4，5，6 mL，依法制备供试品溶液，分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 维生素B2加样回收试验结果（n=9）

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量及含量均匀度测定

含量测定：取6批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，按外标法以峰面积计算各样品中维生素B2的含量。结果见表2。

表2 样品含量及含量均匀度测定结果

含量均匀度测定：取6批样品各10片，分别置10 mL容量瓶中，加盐酸溶液（1→2）0.2 mL振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，按拟订色谱条件进样测定，按外标法以峰面积计算每片的标示量，按2015年版《中国药典（四部）》（通则0941）含量均匀度检查法[7]，计算A+2.2 S和A+S。结果见表2。

3 讨论

在流动相组分考察时，分别试用水-甲醇、水-乙腈-甲醇、0.5%冰醋酸溶液-甲醇及0.01 mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇流动相系统，结果表明，加入离子对试剂庚烷磺酸钠可有效改善主峰的峰形、保留时间；通过调整各组分的比例，使流动相呈酸性，被测组分维生素B2在测定过程中处于酸性环境中，性质更稳定。故选用0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（80∶13∶7，V/V/V）为流动相。

维生素B2性质不稳定，遇光变质更快，试验需在避光条件下进行，采用棕色容量瓶配制对照品溶液和供试品溶液，且尽快测定，尽量缩短放置时间。

6批样品中，维生素B2的含量测定结果中有5批低于标示量的90%；含量均匀度A+2.2 S和A+S均大于15.0，按2015年版《中国药典（四部）》（通则0941）含量均匀度检查法[7]判断含量结果偏低，不符合规定。其原因一是由于该产品现行标准中无维生素B2的含量控制方法，厂家无法准确测定制剂中间品与成品的含量；二是维生素B2对光极不稳定，在生产过程中，含量会降低。建议在产品的标准中增加维生素B2的含量测定及含量均匀度项目，以更好地进行质量控制。