超高效液相色谱法测定参杞通脉胶囊中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量

2020-04-11郭社民马向东韦灵杰

中国药业 2020年7期

郭社民，马向东，韦灵杰

（1.河南省濮阳市食品药品检验检测中心，河南濮阳457000；2.河南省濮阳市中医医院，河南濮阳457000）

参杞通脉胶囊[豫药制字Z20120343（濮）]是濮阳市中医医院在临床实践基础上总结研制的纯中药制剂，由人参、黄芪、枸杞子、当归、川芎、丹参、地龙、茯苓、桑白皮、香加皮等中药组方，具有益气养阴、活血利水功效，可用于气虚血瘀所致心悸、胸痹、喘证、水肿、虚劳等症。原质量标准中只有黄芪的薄层鉴别及显微鉴别，为更好地控制产品质量，本研究中参考文献[1-9]，建立了对方中主药人参中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量测定的超高效液相色谱（UPLC）法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters Acquity H Class型超高效液相色谱仪（美国沃特世公司），配Empower数据工作站；Sartorius CPA 225D型分析天平（德国赛多利斯公司，精度为0.01mg）。

1.2 试药

人参皂苷Rg1、Re和Rb1对照品（批号分别为110703-201832，110754-201827，110704-201827，纯度分别为92.4%，93.4%，91.2%），均购自中国食品药品检定研究院；参杞通脉胶囊（批号分别为20180923，20181015，20181105，规格为每粒0.35 g）及阴性对照品均由濮阳市中医医院制剂室提供；乙腈为色谱纯（美国Tedia公司）；水为一级水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Acquity UPLC HSS T3色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～6.5 min时19%A，6.5～10.8 min时19%～29%A，10.8～13.8 min时29%A，13.8～20 min时29%～40%A）；流速：0.4 mL/min；柱温：28℃；检测波长：203 nm；进样量：5 μL。在此色谱条件下，各待测成分峰形良好，分离度均大于1.5，理论板数按人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰计均大于3 000。

图1 超高效液相色谱图

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：分别取人参皂苷Rg1对照品16.32 mg、Re对照品11.20 mg和Rb1对照品16.68 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备液。精密量取混合对照品贮备液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取样品内容物，研细，取约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷-乙醚（1∶1，V/V）适量，加热回流2 h，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入80%甲醇25 mL，回流提取2 h，过滤，滤液蒸干，残渣加水15 mL，溶解，用水饱和的正丁醇20，20，15 mL萃取3次，合并正丁醇萃取液，分别用氨试液、水饱和的正丁醇各40 mL洗涤，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

阴性对照品溶液：取不含人参药材的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各5 μL，注入超高效液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定。结果显示，阴性对照无干扰。详见图1。

线性关系考察：分别精密量取混合对照品贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系列混合对照品溶液。按拟订色谱条件进样测定，以进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得人参皂苷Rg1、Re和Rb1回归方程分别为YRg1=942 081X+726.1（r=0.999 5），YRe=893 530X-1 259.1（r=0.999 3），YRb1=728 564X-1 072.5（r=0.999 1）。结果表明，人参皂苷Rg1、Re、Rb1进样量分别在0.075 4～0.603 2 μg，0.052 3～0.418 4 μg，0.076 0～0.608 4 μg范围内与峰面积线性关系良好。

表1 加样回收试验结果（n=6）

精密度试验：精密吸取2.2项下混合对照品溶液5 μL，按拟订色谱条件重复进样6次，记录色谱图。结果人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰面积的RSD分别为0.76%，0.95%，0.89%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一批（批号为20180923）样品，依法制备供试品溶液，室温下分别于0，1，2，4，8，12 h时进样5 μL测定。结果人参皂苷Rg1、Re和Rb1峰面积的RSD分别为1.41%，1.57%，1.60%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批（批号为20180923）样品，依法制备6份供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果人参皂苷Rg1、Re和Rb1平均含量分别为0.613 7 mg/g，0.358 3 mg/g，0.628 6 mg/g，RSD分别为0.85%，1.25%，1.05%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入混合对照品贮备液1.0 mL，依法制备供试品溶液，并按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取样品（批号分别为20180923，20181015，20181105）适量，依法制备供试品溶液，分别取供试品溶液和对照品溶液按拟订色谱条件进样测定，以外标法计算含量。结果每粒参杞通脉胶囊中含人参皂苷Rg10.214 8，0.203 5，0.247 1 mg，人参皂苷Re 0.125 4，0.133 5，0.128 5 mg，人参皂苷Rb10.220 0，0.215 8，0.228 5 mg。