乳腺癌术后局部复发生存素、基质金属蛋白酶-9的表达

蒋文英 谈珂岚 吴丹 方琦

(常州市第一人民医院乳腺外科，江苏 常州 213000)

乳腺癌是临床常见恶性肿瘤，约占女性恶性肿瘤的16.51%，已成为老年女性恶性肿瘤发病的首位〔1〕。随着医学技术的发展，乳腺癌治愈率逐年增高，但手术及其他辅助治疗后,乳腺癌术后局部复发率为10%～30%,合并高危因素者可达34%～40%〔2〕，乳腺癌局部术后局部复发仍为临床面临的难题。生存素(Survivin)为近年来发现的肿瘤凋亡抑制蛋白，可通过调控细胞周期及细胞增殖诱导癌细胞凋亡〔3〕；基质金属蛋白酶(MMP)-9为细胞外基质重要的蛋白水解酶，在促进肿瘤血管新生的同时,还能通过降解细胞外基质,诱导肿瘤细胞的侵袭和转移〔4〕。研究表明，Survivin、MMP-9与乳腺癌的发生发展和转移有密切关系〔5，6〕。目前，国内关于Survivin和MMP-9的表达研究多针对原发性乳腺癌，而乳腺癌术后局部复发癌的表达研究鲜有报道，本研究拟分析乳腺癌局部复发组织中Survivin和MMP-9的表达及其相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2013年3～12月常州市第一人民医院乳腺外科收治的96例乳腺癌局部复发患者，年龄60～73岁，中位年龄65.5岁；复发距首次手术时间10～42个月，平均24个月；初诊时淋巴结转移54例，无淋巴结转移42例；复发位置：乳腺54例，胸壁25例，手术瘢痕部17例；TNM分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期39例，Ⅲ期17例、Ⅳ期6例；经病理检查肿瘤组织分类〔7〕：浸润性小叶癌64例，浸润性导管癌17例，小管癌8例，浸润性乳头状癌7例。纳入标准：(1)经病理学检查确诊为乳腺癌局部复发者；(2)初诊时均行根治术或改良根治术治疗，且术后行放化疗者；(3)于本院接受初次治疗者。排除合并其他恶性肿瘤、随访资料及临床资料不全者。本研究经本院伦理委员会批准，患者及家属对研究内容均知情。本研究所有患者在本院接受首次手术治疗时已采集乳腺癌组织进行Survivin、MMP-9免疫组化检测，复发再次治疗后，采用门诊或电话随访记录患者从初次手术治疗开始的生存时间，以患者死亡或2018年12月31日为截止时间。

1.2检验方法 收集患者原发乳腺癌组织及复发乳腺癌组织，10%中性甲醛固定，石蜡包埋后，切片，苏木素-伊红(HE)染色，Survivin、MMP-9检测采用免疫组化S-P二步法，具体实验步骤严格按试剂说明执行，0.01 mol/L pH6.0柠檬酸缓冲液高压修复，二氨基联苯胺显色，苏木精复染。用已知Survivin、MMP-9的P-gp阳性片(福州迈新生物技术开发有限公司提供)为阳性对照，磷酸盐缓冲液替代一抗为阴性对照，Survivin和MMP-9一抗均为兔单克隆抗体(美国abcam公司)。

1.3判读标准 Survivin阳性染色为棕黄色及棕褐色颗粒，主要表达于细胞膜或细胞质中；MMP-9 阳性染色为棕黄色及棕褐色颗粒，主要表达于细胞质中；由两位经验丰富的病理医师采用双盲法判读结果。每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞占比，阳性细胞计数<10%为-，10%～50%为+，>50%为。+及均为阳性表达。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件进行χ2检验、Pearson相关分析。

2 结 果

2.1复发前后癌组织Survivin、MMP-9表达比较 原发癌组织中Survivin及MMP-9表达阳性率〔73.96%(71例)、68.75%(66例)〕与复发癌组织〔64.58%(62例)、58.33%(56例)〕比较差异无统计学意义(χ2=2.332、2.544，P=0.127、0.110)；其中，29.58%(21/71)原发癌组织中Survivin表达阳性转为阴性，32.00%(8/25)Survivin表达阴性转为阳性；33.33%(22/66)原发癌组织中MMP-9表达阳性转为阴性，23.33%(7/30)MMP-9表达阴性转为阳性。

2.2复发癌组织Survivin、MMP-9表达与病理参数的相关性 局部复发患者TNM分期Ⅰ～Ⅱ期癌组织中Survivin及 MMP-9阳性表达率明显低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；而Survivin、MMP-9阳性表达与年龄、复发部位、复发时间、肿瘤直径及肿瘤组织类型均无关(P>0.05)，见表1。

2.3复发癌组织Survivin与MMP-9的表达与患者生存时间的相关性 随访5年，乳腺癌局部复发患者5年生存79例，死亡17例。5年生存组复发癌组织中Survivin阳性表达率(48例，60.76%)低于死亡组(15例，88.24%)，MMP-9阳性表达率(41例，51.90%)低于死亡组(14例，82.35%)，差异均有统计学意义(χ2=4.682、5.303，P=0.031、0.021)。

2.4复发癌组织Survivin与MMP-9的相关性 Survivin在MMP-9阳性表达复发癌组织中表达率为91.07%(51例)，在MMP-9阴性表达复发癌组织中表达率为27.50%(11例)，差异有统计学意义(χ2=41.226，P<0.01)；乳腺癌局部复发癌组织中Survivin与MMP-9表达呈正相关(r=0.725，P<0.01)。

表1 复发癌组织Survivin、MMP-9表达与临床病理参数的关系〔n(%)〕

3 讨 论

乳腺癌为女性常见恶性肿瘤，患病后对机体正常代谢、免疫功能及生活质量等各方面造成极大影响。手术治疗是乳腺癌临床治疗的最主要方式。 由于乳腺癌为全身性疾病，手术治疗无法完全清除可能存在的阴性病灶，易导致术后复发。一般认为，乳腺癌术后复发与临床分期、淋巴结转移及Survivin、MMP-9等生物分子指标密切相关〔5，6〕。但对乳腺癌术后复发的研究多局限于病程、原发灶大小、淋巴结转移等临床病理参数的分析，对Survivin、MMP-9的研究鲜有报道。乳腺癌的发病与复发均与肿瘤细胞的异常增殖有关，而Survivin、MMP-9均对肿瘤细胞有不同机制的抑制作用，推测复发乳腺癌的发生发展受Survivin、MMP-9的调控。

Survivin具有调节细胞周期及抑制细胞凋亡的双重功能。食管癌、肝癌、宫颈癌等肿瘤组织、胚胎及发育的胎儿组织均能检测到Survivin的表达，肿瘤细胞中Survivin主要表达于细胞核和细胞质中，细胞核内Survivin特异性作用细胞有丝分裂G2/M期，调控细胞分裂过程中纺锤体形成〔8〕；细胞质中Survivin通过外源性和内源性途径抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)活性进而抗凋亡〔9〕。Tanaka等〔10〕通过免疫组化检测发现，Survivin在乳腺癌组织中高表达，阳性率为70%，而在正常组织中不表达；且发现Survivin阳性表达患者较阴性表达患者5年生存率明显降低。研究表明〔11，12〕，乳腺癌组织中Survivin高表达，且为预后判断的重要因素。MMP-9为蛋白水解酶，可水解细胞外基质和基膜，破坏肿瘤细胞侵袭、转移的细胞-细胞、细胞-基质间屏障，在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用；同时，MMP-9可刺激表皮生长因子的合成与释放，促进新生血管的生成〔13〕。研究表明〔14，15〕，乳腺癌组织中MMP-9表达增高，且MMP-9高表达者侵袭、转移发生率高，病情恶性程度高，且预后较差。本研究结果与Tanaka等〔10〕、欧小波等〔14〕原发乳腺癌研究结果相近；且复发乳腺癌组织Survivin、MMP-9阳性率，与原发乳腺癌组织比较无明显差异，与艾秀清等〔16〕研究结果一致。另外，本研究结果提示，局部复发乳腺癌与原发乳腺癌发生发展机制类似，且Survivin、MMP-9在癌组织中表达可能受药物或其他影响而发生改变，Survivin、MMP-9对术后乳腺癌局部复发患者的预后具有一定的预测作用，与相关研究结果基本一致〔10,17〕。

有研究显示，Survivin的表达与肿瘤血管生成密切相关，肿瘤浸润转移过程中，Survivin在肿瘤组织中的表达率有增高趋势〔18〕；而MMP-9在促进新生血管的生成中发挥重要作用；同时，在甲状腺癌〔19〕、卵巢癌〔20〕等肿瘤研究中亦发现Survivin与MMP-9表达呈正相关，但均未对其机制作出解释。本研究结果显示，肿瘤细胞可能通过调高Survivin、MMP-9表达水平而逃避凋亡过程及增强组织侵袭能力，二者在乳腺癌的发生发展中起着协同和促进的作用，其分子作用机制有待进一步研究。

综上所述，乳腺癌术后局部复发癌组织中Survivin、MMP-9与原发乳腺癌相近，二者表达呈正相关，在乳腺癌局部复发的发生、发展中发挥重要作用，对患者预后具有一定预测价值，同时，以Survivin、MMP-9为靶点的新型特异性抑制剂将为乳腺癌的治疗提供新思路。