AutoLumo A2000检测系统检测17-α-羟孕酮的性能验证及评价*

单志鸣，王文洁，李进香，孙红启

郑州大学附属儿童医院/河南省儿童医院/郑州儿童医院郑州市感染与免疫重点实验室，河南郑州 450018

17-α-羟孕酮(17-α-OHP)主要由人肾上腺皮质生成，为低孕酮活性，可以经21-羟化进一步合成皮质醇类激素[1]。育龄女性的17-α-OHP水平随月经周期发生变化，表现为黄体期高，卵泡期低。妊娠时，胎盘和肾上腺等可以大量生成17-α-OHP，妊娠32周以后17-α-OHP水平骤然升高持续至分娩期。病理状态(如先天性肾上腺皮质增生)会引起17-α-OHP水平升高。新生儿脐带血内也可检测出17-α-OHP[2-3]。磁微粒化学发光法检测17-α-OHP采用竞争法原理：用二抗包被磁微粒，17-α-OHP抗体制成抗体溶液，将辣根过氧化物酶标记的17-α-OHP抗原制备成酶标结合物。通过抗原抗体相互反应形成抗体酶标抗原复合物,复合物可催化发光底物产生光子，发光值(RLU)强度与17-α-OHP水平呈反比。该方法是一种敏感、特异的快速检测方法。根据美国临床实验室改进修正案和ISO15189等文件对实验室质量的管理要求和实验室认可的要求[4-5]，实验室检测分析系统在临床应用前须对其进行分析性能验证[6-7]。本研究通过分析AutoLumo A2000检测系统检测17-α-OHP的精密度、灵敏度、线性范围、干扰试验和参考区间，验证厂商给定的性能参数，为临床应用该项目提供准确、翔实、可靠的依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集本院2019年1-5月就诊患者的新鲜血清标本，根据17-α-OHP水平的高低分开保存，置于-20 ℃冻存备用。

1.2仪器与试剂 AutoLumo A2000化学发光测定仪及检测试剂盒(豫械注准20142400077)。

1.3方法

1.3.1精密度分析 按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2文件要求[8]，选用高、低两个水平的安图生物室内质控品(QCI和QC2，批号：20171023)进行检测，评价仪器精密度。每天9：00测定QC1和QC2两次，15:00测定QC1和QC2两次，连续测定10 d，共测得40组数据，根据测定结果分析批内和批间精密度。

1.3.3线性范围评价 按照CLSI EP6-A文件要求[9]，取17-α-OHP高水平(H)和低水平(L)血清各1份，按4H、3H+1L、2H+2L、1H+3L和4L的比例配制成5个水平的标本，形成系列水平血清进行测定。以稀释后的理论值为X，实测值为Y，将所有结果标注在坐标图上，计算回归方程Y=αX+β，验证线性范围，判断标准：α为0.97～1.03，线性相关系数R2≥0.990 0。

1.3.5参考区间 选择在线性范围内的17-α-OHP高水平标本1份，用系统稀释液按照说明书最大稀释倍数的10倍进行稀释，检测稀释前高水平标本和稀释后标本各2次，得出靶值(原值的均值)和检测值(稀释后标本均值×10)，计算检测值与靶值的相对偏倚，偏倚=(检测值-靶值)/靶值×100%。

2 结 果

2.1精密度验证结果 QC1批内精密度为2.85%，批间精密度为1.25%，总精密度为2.37%；QC2批内精密度为3.25%，批间精密度为2.65%，总精密度为3.51%，均符合CLSI指南要求的标准。

2.3线性范围验证结果 选取17-α-OHP高水平(28.59 ng/mL)和低水平(0.38 ng/mL)血清，稀释后的理论值X和实测值Y见表1。线性回归方程结果显示，Y=0.971 6X+0.138，R2=0.999 8。根据α为0.97～1.03，线性相关系数R2≥0.990 0，判断线性范围良好。故17-α-OHP水平在厂家给出的线性范围内(0.05～30.00 ng/mL)线性良好。见图1。

表1 17-α-OHP理论值X和实测值Y比较(ng/mL)

图1 17-α-孕酮线性回归分析

2.5参考区间验证结果 原值两次测定结果均值为26.98 ng/mL，稀释标本两次测定结果均值为25.81 ng/mL，偏倚为-4.34%，符合标准要求，试剂盒参考范围满足0.05～30.00 ng/mL的要求。

表2 干扰试验结果(ng/mL)

注：-表示无数据。

3 讨 论

17-α-OHP是诊断多种临床疾病的重要指标，主要包括婴幼儿期的女婴男性化、厌食、腹泻、呕吐、体质量下降、代谢性酸中毒、皮肤黏膜色素沉着等。青少年期体格发育过快、骨龄大于年龄、阴毛早出及性早熟，女童月经初潮延迟，多毛症，原发性闭经，以及成年男女痤疮、秃顶及不明原因的不孕不育等也需要检测17-α-OHP[11]。先天性肾上腺皮质增生症最常见的病因是酶的缺陷，尤其是21-羟化酶缺陷，占90%左右。患者由于21-羟化酶缺乏或活性降低，孕酮和17-α-OHP产物不能催化、转化为去氧皮质酮和脱氧皮质醇，导致促肾上腺皮质激素反馈性分泌增多，刺激肾上腺皮质束状带增生，使孕酮和17-α-OHP等中间代谢产物水平增高[12-13]。因此，检测17-α-OHP水平对疾病的诊断和治疗效果监测具有重大意义。

目前，17-α-OHP实验室常用检测方法有放射免疫法、化学发光法以及高效液相色谱串联质谱法[14]。放射免疫法的灵敏度和特异度较低，同时会对受检人员的身体造成伤害，故逐渐被淘汰。2000年左右，高效液相色谱串联质谱法开始用于类固醇激素检测，该方法避免了许多干扰因素，是一种新的检测手段。该方法不仅可作为参考方法，还能被用于许多临床指标的检测[15]，但是由于操作困难和成本较高等因素，目前国内临床实验室应用较少。化学发光法凭借其高通量和较高的灵敏度、特异度，仍然是实验室检测17-α-OHP等激素类指标的常用方法。

实验室检测方法都存在误差，为保证实验室为临床提供高质量服务，在检测方法经过试验后、应用于临床实验室检测前和在对原检测系统进行调整后，都应对该方法进行严格、系统、专业的分析性能评价，对仪器厂家提供的技术指标进行性能验证[16-17]。为此，CLSI出台了一系列EP文件，本研究依据部分EP文件对AutoLumo A2000检测系统进行性能评价，EP15-A2文件作为精密度性能评价方案指南，是目前评价仪器精密度最全面和最有统计学效能的方法；EP7-A2文件为干扰试验方案指南；根据EP6-A2文件制订的线性评价方案是多项式回归评价方法中具有代表性的方法[18]。本试验中化学发光法对黄疸和血脂标本抗干扰能力较强，而在高Hb状态下抗干扰能力较弱，建议在临床报告结果中注明标本可能存在的干扰因素，提醒临床注意。精密度是评价检测系统的主要指标之一，是仪器性能评价的基础。本研究结果显示，AutoLumo A2000检测系统测定17-α-OHP的QC1批内精密度为2.85%，批间精密度为1.25%；QC2批内精密度为3.25%，批间精密度为2.65%，均符合CLSI指南要求[19]。线性范围验证是验证方法的最高检测限和最低检测限之间是否呈线性关系，有助于发现仪器、校准品、试剂和操作规程等方面的误差来源。本研究通过系列比例稀释，检测标本的17-α-OHP水平，对数据结果进行回归分析，结果可看出其与多项式的拟合曲线接近重合，所有数据几乎都落在一条直线上，初步判断最佳的拟合形式为直线，且数据精密度较高，证明在该范围内稀释的几个点构成直线方程。结果表明，实测值与理论值之间相关性良好，R2为0.999 8。与之前的研究[19]相比，本研究对AutoLumo A2000检测系统的17-α-OHP项目进行了系统、全面的性能指标分析，更好地评价了仪器的性能，为临床应用提供支持。

综上所述，通过对17-α-OHP测定仪器的精密度、灵敏度、线性范围、干扰试验和参考范围的评价和分析，证实AutoLumo A2000检测系统应用化学发光法测定17-α-OHP的灵敏度高、精密度好、结果准确可靠，性能可达到临床检测的要求。