血站实验室全自动生化分析仪ALT项目的检测性能分析

王全慧

天津市血液中心，天津 300110

丙氨酸氨基转移酶(ALT)是血液筛查的一个非特异性指标，通过对2016-2018年不合格血液标本分析发现，本站全血ALT的不合格率高达0.25%，甚至高于输血相关感染标志物的检出率。ALT检测结果的准确性直接关系到实验室血液检测的合格率。通常血液检测涉及完成检测必需的仪器、试剂、校准品、实验程序[1]。实验室需选择国家批准的且符合国家要求的仪器、试剂盒、检测方法。仪器及设备的分析性能对血液质量和临床输血安全起到至关重要的作用。《血站技术操作规程(2015版)》[2]中规定，定量试验性能验证通常包括正确度、精密度、可报告范围和参考区间的验证[3]，本实验室对以上参数进行分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 随机选取本站2018年1-7月已检测的无偿献血者标本。

1.2仪器与试剂 仪器:日本东芝全自动生化分析仪(型号TBA-120FR)。试剂购自上海科华生物工程股份有限公司(试剂批号20180611)。其他试剂包括英国RANDOX低值质控血清(批号1145UN)、英国RANDOX高值质控血清(批号815UE)、英国RANDOX校准品(批号914UE)。

1.3方法与判定标准

1.3.2正确度 通过对2018年本实验室参加原国家卫生和计划生育委员会临床检验中心室间质评3个批次15份标本结果进行分析，成绩合格即为验证通过。

1.3.3线性范围 采用其他实验室常规检测标本获得的高值(H)血清及低值(L)血清。取H、L血清标本各1份，进行配比:标本1为4L；标本2为3L+1H；标本3为2L+2H；标本4为1L+3H；标本5为4H。检测时,按标本1、2、3、4、5、5、4、3、2、1排列，每份标本测量2次,记录结果。以理论水平为横坐标(X)，实测水平为纵坐标(Y)。计算出R2和回归方程式Y=bX+a。若R2≥0.995,b为0.97～1.03，则判定线性范围验证通过。

1.3.4可报告范围 根据线性回归方程，若b不接近1，a较大，应具体分析是高水平还是低水平标本的预测值和实测值存在较大偏倚。可以通过用t检验(α=0.05)判断截距a和0差异以及斜率b和1差异有无统计学意义。若差异无统计学意义则在线性范围内检测结果可靠。

1.3.5生物参考区间 随机选取健康献血者血清标本78份进行检测，对参考区间进行验证。参考区间：健康体检者血清标本ALT≤50 U/L。判断标准：R=(测定结果在参考范围内的例数/总测定例数)×100%，R≥90%即验证通过。

2 结 果

2.1精密度验证 低、高值质控血清批内不精密度分别为2.90%、1.10%，符合<5.0%的要求，验证通过。低、高值质控血清批间不精密度分别为3.81%、2.03%，符合<6.7%的要求,验证通过。见表1。

表1 ALT精密度验证结果

2.2正确度验证 对2018年3个批次15份室间质评标本结果进行对比分析，结果均在规定范围内，验证通过。见表2。

2.3线性范围验证 实测值与预测值对应的结果见表3。得到线性回归方程Y=0.997X-0.418 1。R2≥0.995,b为0.97～1.03，线性范围验证通过。见表3及图1。

表2 2018年ALT室间质评反馈结果分析

2.4可报告范围验证 通过t检验判断b与1的差异：Sb=0.002，tb=1.365,t(0.05,18)=1.734，tb0.05)。Sa=0.830，ta=0.503，t(0.05,18)=1.734，ta0.05)。TBA-120FR可报告范围在20～690 U/L的检测结果可靠。

表3 ALT线性范围验证(U/L)

图1 ALT的线性回归

2.5生物参考区间验证 本实验室所检测的78份标本检测结果均在生物参考区间内，R=100%(成绩合格率为100%)，≥90%，故参考区间验证通过。

3 讨 论

ALT检测一直作为献血者血液筛查的一个必检指标，其检测结果不合格造成的血液浪费也成为试验室关注的焦点。2007年本站对献血员献血前的血液检测项目中增加了ALT，因ALT检测不合格造成的血液报废明显减少，但不合格率仍处于较高水平。ALT检测试剂盒均为具备相关资质的厂家根据国家药典生产，采用速率法的自动化检测设备进行检测。但是不同实验室采用的检测流程、仪器及试剂有所差异，检测方法所体现的性能有所不同[4]。为了解检测方法的性能，检测方法产生误差的大小，有必要每年进行1次检测方法、程序的性能验证。美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2方案要求每半年进行1次比对[5]，国内相关标准则规定每年至少进行1次比对[6]。

鉴于血站实验室检测对象为健康献血人群，对精密度验证采用低值和高值两个水平的RANDOX质控血清。质控血清有更好的稳定性，在溶解冻干血清标本时严格控制操作手法、溶解时间、加液量、混匀的力度，使标本稳定、均一，这样可以使CV值更低[7]。也有报道称，选择接近本实验室“医学决定水平”的标本，可以更好地反映仪器的真实性能[8]。本实验室低、高值质控血清的批内和批间变异均在验证范围内。在判断标准上，批内不精密度采用<1/4TEa，而批间不精密度采用<1/3TEa[9]，通常情况下，批间变异度总是大于批内变异度，设定两个判定标准更具实际意义。

正确度估计最常用的方法:(1)方法比较试验。将实验室采用的检测方法和公认的检测方法[10]同时检测一批不同ALT水平的标本。通过结果的差异计算检测方法偏倚是否在允许误差范围内。(2)能力验证活动。直接参加权威机构组织的能力验证活动，能力验证的成绩可以证明新检测方法检测结果的准确性。本研究将本站2018年参加原国家卫生和计划生育委员会临床检验中心室间质评的15份标本的检测结果与反馈结果进行对比分析。实验室的检测结果全部在参考范围内，合格率为100%，验证通过。但通过计算偏倚可以发现有5份标本相对偏倚大于10%(1/2TEa)，进一步分析发现偏倚有正有负，而且每份标本同时检测4次精密度良好，可排除系统误差。分析原因可能为偶然误差，室间质评标本为冻干粉，需要加定量蒸馏水进行溶解，可能操作人员加入的蒸馏水量不准确，或者溶解时间不够，混匀不充分，这些细小误差都会造成低靶值标本的较高偏倚[11]。

线性范围验证通常采用配制包含不同分析物水平的系列标本进行检测，将按稀释比例计算的预测值X和实测值Y设置为2个变量进行线性回归[11]，得到回归方程。理论上，回归直线应当为过原点、斜率为1的直线，直线所达的限值即为可报告范围。TBA-120FR厂家提供的线性范围为8～1 000 U/L。本室选取的ALT低值血清为20 U/L，高值血清为690 U/L。血液筛查实验室主要针对的是健康的无偿献血者，而且采血前已经过初筛检测，大部分检测结果小于50 U/L。线性验证范围超过500 U/L的意义不大。

经回归分析得回归方程Y=0.997X-0.418 1，b=0.997，a=0.418 1。实际工作中很难达到b=1，a=0。b在1.00±0.03范围内R2=0.995。一般认为该回归线性良好，检测范围内的结果可靠。但是b和1，a和0有无差别，可以通过t检验进行判断[12]。本研究发现，a与0差异无统计意义(P>0.05)，b和1差异无统计意义(P>0.05)。TBA-120FR在20～690 U/L的检测结果可靠。

CLSI的C28-A3文件指出[13]，对于大多数实验室没有必要建立自己的参考区间，只需进行验证即可。本次验证随机选取常规健康献血者血清标本78份进行检测，全部结果均在生物参考区间内，验证通过。

对全自动生化分析仪进行性能验证是血站实验室加强质控、获得准确结果的重要途径和方法[14]。实验室在进行性能验证时要结合ISO15189和国家卫生行业标准及相关文件，本着科学、专业的态度尽量做到简便、适用，使性能验证真正为血液检测过程中的监控与改进发挥应有的作用[15]。