乳腺癌组织中MTSS1和uPA的表达及其与转移相关性研究

王合兵，陈昌明，肖 坚，陈文新，杨炳林

福建医科大学附属三明第一医院，福建 三明 365000

乳腺癌是威胁女性健康的最重要的疾病之一，其发病率呈现逐年上升的趋势，近年来，随着乳腺癌诊疗技术的不断发展，乳腺癌发生、发展、转移的分子层面已经成为研究的重点和热点。转移抑制因子1(metastasis suppressor 1，MTSS1)基因与尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasmino-gen activator， uPA)与乳腺癌的发生、发展、浸润转移有着密切的关系［1］。目前关于 MTSS1在结肠癌、膀胱癌、前列腺癌及肝癌等肿瘤中的表达情况已有报道，但MTSS1在乳腺癌中的表达及意义如何，国内外相关报道较少［2］。uPA在几乎所有恶性肿瘤中高表达并发挥积极的肿瘤进展和转移中的重要作用［3］。本研究采用免疫组织化学法观察MTSS1、uPA在乳腺癌组织及癌旁组织的表达水平，并检测二者在同时期手术的通过随访发现转移的患者其第一次术后病理蜡块中的表达水平，并探讨其与乳腺癌转移的相关性，为乳腺癌的临床诊疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将福建医科大学附属三明第一医院乳腺科2009年8月1日- 2012年12月31日间手术切除的乳腺癌标本80例作为研究组，选取这些患者的癌旁组织标本80例作为对照组，选取30例复发转移患者的第一次术后病理标本组织作为复发转移组，患者全部为女性，年龄38～70岁，平均年龄（51.32±3.82）岁，其中3例淋巴转移。患者手术前均为进行放疗、化疗、免疫治疗治疗史。

1.2 试剂选择及标本处理

兔抗人MTSS1单克隆抗体、通用型生物素标记的二抗均购自北京博奥森生物技术有限公司;浓缩型DAB试剂盒、多聚赖氨酸购自北京中杉金桥生物技术有限公司。兔抗人uPA多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，抗体稀释浓度为1∶100。免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。乳腺癌标本及癌旁组织经10%福尔马林固定、常规石蜡包理，4μm厚连续切片，供常规苏木精-伊红染色和免疫组化染色。采用Envision二步法，参照检测试剂盒说明书进行，用已知乳腺癌阳性片作阳性对照。

1.3 方法

用常规苏木精-伊红染色和免疫组化染色，严格按照试剂盒说明操作，用已知乳腺癌阳性片作阳性对照，结果阳性；以PBS代替一抗作阴性对照，结果阴性。

1.4 效果判定评价指标

MTSS1以细胞质内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达。每张切片在高倍镜下随机选取5个视野，按染色强度及阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比综合计分［4］。染色强度：无色计为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞数:小于总数的5%时计为0分，5%～25%＜为1分，25%～50%为2分，＞50%为3分。染色强度得分与阳性细胞数得分相乘，0～1分为阴性，2分为阳性(+)性。uPA蛋白阳性表达主要分布于细胞质，以细胞浆出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达。按肿瘤细胞中阳性比例计算百分率，阳性细胞＜10%记为（-）；阳性细胞数在10%～25%记为（+）；阳性细胞数在25%～50%记为（++）；阳性细胞数＞50%记为（+++）。

1.5 统计学方法

数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料用例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，并行Spearman相关分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTSS1在乳腺癌、癌旁组织、复发转移组织中的表达

MTSS1在乳腺癌阳性染色多在细胞膜及细胞质内，为棕黄色，而在细胞核内无阳性表达。

图1 MTSS1在乳腺癌、癌旁组织、复发转移组织中的表达

MTSS1在正常组织的表达仅有少数为弱阳性，大多数为阴性。研究组乳腺癌患者中MTSS1表达阳性率高达86.25%（图1-1），在对照组癌旁组织表达的阳性率为56.25%（图1-3），在复发转移组表达的阳性率为46.47%（图1-4），乳腺癌表达阳性率明显高于对照组高于转移复发组，差异具有统计学意义（P＜0.05），对照组与复发转移组差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 MTSS1在不同乳腺组织中的表达情况

2.2 MTSS1表达与乳腺癌转移的关系比较

MTSS1在有复发转移的乳腺癌组织中的表达水平明显低于无转移的原发乳腺癌组织，差异有统计学意义(χ2=28.4091，P＜0.05)，见表2。

表2 MTSS1表达与乳腺癌转移的关系

2.3 uPA在乳腺癌、癌旁组织、复发转移组织中的表达

uPA蛋白在不同组织中的表达具有明显的规律性，其阳性率表达转移复发组高于乳腺癌研究组高于癌旁组织对照组，且各组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 uPA在乳腺癌、癌旁组织、复发转移组织中的表达

2.4 uPA表达与乳腺癌转移的关系比较

uPA在乳腺癌转移组和非转移组中的阳性率分别为93.94%和51.95%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表4 uPA表达与乳腺癌转移的关系比较

2.5 MTSS1蛋白与uPA蛋白阳性表达之间的相关性

在121例MTSS1阳性表达组织中只有22例uPA阳性表达，69例MTSS1阴性表达中有46例uPA阳性表达，进行Spearman相关性分析，R=-0.9015，P＜0.05，MTSS1蛋白与uPA蛋白在乳腺癌的浸润、转移的过程中表达呈明显的负相关性。见表5。

表5 MTSS1蛋白与uPA蛋白阳性表达之间的相关性 例

3 讨论

3.1 MTSS1蛋白表达与乳腺癌的关系

本研究发现，MTSS1在乳腺癌组织中的表达阳性率明显高于正常乳腺组织和癌旁组织高于复发转移组织，提示MTSS1可能在乳腺癌的发生发展中起重要作用，在转移的乳腺癌组织中的表达水平明显低于局限性乳腺癌组织［5-6］，提示MTSS1与乳腺癌的侵袭转移相关，这与最初发现的MTSS1作为潜在的肿瘤转移抑制基因的功能相符，说明在乳腺癌细胞中MTSS1充当着控制转移的角色，所以乳腺癌在发生发展的过程中起着重要的作用，同时对癌细胞转移起到很好地抑制作用。

3.2 uPA蛋白与乳腺癌的关系

研究表明［7］，与正常组织相比uPA基因在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌的组织中呈现较高阳性表达，尤其是在乳腺癌的转移复发病灶的组织中呈现很好的阳性表达。证实uPA基因在肿瘤浸润和转移过程中扮演重要角色［8］。本实验检测uPA蛋白在癌旁组织、乳腺癌组织和转移复发组织的阳性表达差异具有统计学意义，推断uPA参与了乳腺癌的发生发展，并且在乳腺癌的转移过程中起到了重要作用，与文献资料相符［9］。

3.3 MTSS1蛋白与uPA蛋白的相关性

迄今尚未发现文献中有关MTSS1蛋白与uPA蛋白的相关性的报道，本实验显示，在121例MTSS1阳性表达组织中只有22例uPA阳性表达，69例MTSS1阴性表达中就有46例uPA阳性表达，提示MTSS1蛋白与uPA蛋白在乳腺癌的浸润、转移的过程中表达呈明显的负相关性，MTSS1蛋白与uPA蛋白的共同作用还有待进一步研究。

综上所述，乳腺癌患者中MTSS1表达阳性率高于癌旁组织和转移复发组织，在乳腺癌的发生、发展过程中起到了重要的作用，但是对于肿瘤的浸润转移起到了重要的抑制作用。乳腺癌患者uPA表达阳性率高于癌旁组织，但是低于转移复发组织，提示在乳腺癌的发生、发展以及浸润转移的过程中均起到重要的作用。通过研究，MTSS1蛋白与uPA蛋白具有明显的负相关性。