新疆毛菊苣不同部位中山莴苣素和山莴苣苦素的含量测定

杨 建, 何 倩, 马晓丽, 刘照胜, 阿吉艾克拜尔·艾萨

(1新疆医科大学药学院；2中国科学院大学新疆理化技术研究所，乌鲁木齐 830011)

毛菊苣(CichoriumglandulosumBoissetHout)为菊科(Compositae)菊苣属(Cichorium)植物,主要生长于我国新疆[1-2]。研究表明毛菊苣主要化学成分为倍半萜类[3]、黄酮类[4]、香豆素类[5]、三萜类[6]、生物碱[7]、甾醇[8]等，具有较强的生物活性和药用价值[9-10]。毛菊苣的根、茎、种子均可入药[11]，具有利尿消肿、清肝利胆、健胃消食等功效[12-15]。研究发现毛菊苣中的山莴苣素、山莴苣苦素等倍半萜内酯类成分具有良好的保肝和抗肿瘤活性[16-18]。本研究采用高效液相色谱(HPLC)法测定毛菊苣不同药用部位中山莴苣素和山莴苣苦素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器Waters-e2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司)，R1001-VN型旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司)，SHB-A型真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，KQ3200DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Model AB-135s型分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)。

1.2 试药毛菊苣药材2017年3月购买于新疆和田地区墨玉县，经新疆医科大学药学院天药教研室胡君萍教授鉴别为菊科(Compositae)菊苣属(Cichorium)植物毛菊苣(CichoriumglandulosumBoissetHout)的全草，标本保存于中国科学院新疆理化技术研究所。山莴苣素对照品、山莴苣苦素对照品(中国科学院新疆理化技术研究所提供，纯度>95%,)，甲醇(美国Sigma公司，色谱纯), 甲酸为分析纯试剂, 蒸馏水(屈臣氏), 超纯水(艾柯超纯水)。

2 方法与结果

2.1 样品溶液的制备分别称取过40目筛的毛菊苣根茎和种子粉末4.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇40 mL，超声提取 30 min(功率100 W，频率50 KHz)，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，残渣按上述方法重复提取1 次，合并2次提取液，减压浓缩，用甲醇溶解定容至100 mL，即得样品溶液。

2.2 对照品溶液的制备称取山莴苣素、山莴苣苦素标准品适量，分别置于5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到浓度为31.8 μg/mL山莴苣素和浓度为29.4 μg/mL山莴苣苦素对照品溶液，置于4℃冰箱冷藏，备用。

2.3 色谱条件采用Inertial ODS-SP色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇(A)-0.2%甲酸(B)，洗脱梯度：0～10 min，30% A～40% A; 10～20 min，40%～50% A;20～40 min，50%～70% A，流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长254 nm，进样量10 μL。

2.4 系统适应性实验按“2.3”项下色谱条件，山莴苣素和山莴苣苦素的保留时间分别为7.25 min 和24.15 min，两个峰的理论塔板数均>3 000，供试品中两个色谱峰与其他相邻峰分离度>1.5，无干扰，表明本色谱条件系统适应性良好，见图1～3。

图1 山莴苣素对照品HPLC色谱图

图2 山莴苣苦素对照品HPLC色谱图

图3 样品HPLC色谱图

2.5 回归方程建立分别吸取“2.2”项下山莴苣素、山莴苣苦素对照品溶液适量，置于 10 mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到3.18、6.36、15.91、31.81、47.70 μg/ mL系列浓度的山莴苣素溶液和2.94、5.88、7.35、14.70、44.11、73.52 μg/mL系列浓度的山莴苣苦素溶液。按“2.3”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积(X)对对照品浓度(Y)进行线性回归，得到山莴苣素的回归方程为：Y=18 472X-8 443.9，r=0.999 8，山莴苣素的浓度范围在3.18～47.70 μg/mL线性关系良好；山莴苣苦素的线性回归方程为：Y=10 753X-11 112，r=0.999 9, 山莴苣苦素的浓度范围在2.94～73.50 μg/mL,线性关系良好。

2.6 精密度试验吸取“2.2”项下山莴苣素、山莴苣苦素对照品溶液各10 μL，按照“2.3”项色谱条件连续进样6次，以山莴苣素和山莴苣苦素峰面积进行计算，山莴苣素的RSD为1.2%，山莴苣苦素的 RSD为1.6%，表明本方法精密度良好。

2.7 重复性试验取同一样品按“ 2.1” 项方法平行制备6份样品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，经计算样品中山莴苣素含量变化的RSD为1.2%，山莴苣苦素含量变化的RSD为1.6%，表明本法重复性良好。

2.8 稳定性试验分别吸取“2.1”项下样品溶液10 μL，按“2.3”项下色谱条件分别在0、2、4、6、12 h时测定样品中山莴苣素、山莴苣苦素的含量，以峰面积计，经计算样品中山莴苣素RSD为3.1%，山莴苣苦素RSD为2.6%，表明样品在12 h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验称取同一批已知含量的毛菊苣药材9份，分别加入高、中、低剂量的对照品溶液，按“2.1”项下方法制备样品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定山莴苣素、山莴苣苦素含量，经计算山莴苣素和山莴苣苦素的平均回收率分别为100.8%和97.3%，RSD分别为2.5%和3.1%，表明方法准确度良好，见表1、2。

表1 山莴苣素加样回收率实验结果

2.10 含量测定分别称取毛菊苣样品按“2.1”项下方法制备样品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，毛菊苣根茎部位中山莴苣素、山莴苣苦素含量分别为0.378 0、0.172 0 mg/g，种子部位中山莴苣素、山莴苣苦素含量0.381 5、0.331 8 mg/g。

表2 山莴苣苦素加样回收率实验结果

3 讨论

本研究建立了一种HPLC法测定新疆毛菊苣中山莴苣素、山莴苣苦素含量的方法，系统适应性和方法学考察表明，该方法准确、灵敏、重现性好。对新疆毛菊苣根茎及种子部位中山莴苣素、山莴苣苦素进行提取及含量测定，结果表明 2种成分在毛菊苣不同部位中的含量存在差异，山莴苣苦素多存在于毛菊苣的种子中，山莴苣素多存在于毛菊苣的根茎部位，说明毛菊苣不同部位中山莴苣素、山莴苣苦素会随着生长差异发生变化，应根据这两种成分的药理活性加以区别,为毛菊苣合理利用及质量评价提供科学依据。