KCNE1、KCNE2基因多态性与家族性房颤的相关性

刘俊 应璇 董扬 王文标

(金华市人民医院心血管内科,浙江 金华 321000)

房颤是最常见的心律失常类型之一，其发病率为1%～2%〔1〕。房颤最严重的并发症之一是体循环血栓栓塞，特别是脑卒中。房颤可引起运动耐力降低、室性心律失常、心动过速心肌病和心衰等并发症〔2〕。目前房颤的药物转复并维持窦律疗效差，射频消融术对于持续性房颤患者单次成功率也仅有37.5%～55.0%〔3〕。目前国内外持续性房颤药物治疗及非药物治疗疗效差，而房颤的基因治疗可能尚需较长时日方能成为现实，建议还是强调房颤的一级预防，早期发现，个体化治疗及预后判定等〔3～5〕。随着分子生物学技术的发展和人类基因组研究的深入，引起房颤的分子机制仍未明确，虽家族性房颤相关的遗传学研究已取得一定进展，但并未确定哪种基因突变是最常见的致病基因〔6，7〕。 本研究探讨KCNE1、KCNE2基因多态性与家族性房颤的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 纳入的62例房颤患者选择于金华市人民医院2017年1～12月。纳入标准：①根据24 h动态心电图或体表心电图诊断；②年龄65～85岁；③获得知情同意。排除标准：①合并瓣膜型心脏病、肺心病、先天性心脏病、心包炎及甲状腺功能亢进等；②精神疾病者。62例房颤患者中，男38例，女24例；年龄65～78〔平均(71.54±3.97)〕岁；其中家族性房颤39例，非家族性房颤23例。另选择同期健康体检者30例作为对照组，男18例，女12例；年龄67～79〔平均(72.18±5.46)〕岁。各组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法 采集各组受试者外周静脉血3 ml，进行DNA测序，以天根生化磁珠提取DNA试剂盒自动化提取外周白细胞基因组DNA，且以PCR重测序法测定KCNE1基因rs1805127位点A/G和KCNE2基因rs1805120位点C/T基因多态性。引物序列由上海生工生物工程技术有限服务有限公司提供，引物序列为：KCNE1基因rs1805127位点上游引物5′-AGGAGACAGTTCAGCAGG-3′，下游引物5′-TTCAACGACATAGCACGAC-3′；KCNE2基因rs1805120位点上游引物5′-CAGAGATGTCATCGCTCCTG-3′，下游引物5′-TCCACCCCACTACCTCCCACC-3′。PCR扩增条件：采用95℃条件下预变性5 min；反应循环：采用95℃条件下变性30 s、58℃条件下退火30 s、72℃条件下延伸30 min，循环35次；最后采用72℃条件下末端延伸5 min后，冷却PCR产物至4℃。PCR产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析仪中拍照检测；回收PCR产物，测序上机。

1.3观察指标 ①观察各组KCNE1基因rs1805127位点A、G等位基因分布情况；②观察各组KCNE1基因rs1805127位点AA、AG、GG基因型频率分布情况；③观察各组KCNE2基因rs1805120位点C、T等位基因分布情况；④观察各组KCNE2基因rs1805120位点CC、CT、TT基因型频率分布情况。

1.4统计学方法 运用统计学软件SPSS19.0进行t、χ2检验。

2 结 果

2.1各组KCNE1基因rs1805127位点A/G等位基因分布比较 家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点A等位基因分布率明显低于对照组，而G等位基因分布率明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；而家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点A和G等位基因分布率比较无明显差异(P>0.05)，见表1。

2.2各组KCNE1基因rs1805127位点AA、AG、GG基因型频率分布比较 家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点GG基因型分布率明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；而家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点GG基因型分布率比较无明显差异(P>0.05)，各组AA、AG基因型分布率无明显差异(P>0.05)，见表2。

2.3各组KCNE2基因rs1805120位点C/T等位基因分布比较 各组KCNE2基因rs1805120位点C和T等位基因分布率比较无明显差异(P>0.05)，见表3。

2.4各组KCNE2基因rs1805120位点C/T基因型频率分布比较 各组KCNE2基因rs1805120位点CC、CT和TT基因型频率比较无明显差异(P>0.05)，见表4。

表1 各组KCNE1基因rs1805127位点A/G等位基因分布率比较〔n(%)〕

与对照组比较：1)P<0.05，下表同

表2 各组KCNE1基因rs1805127位点AA、AG、GG基因型频率分布比较〔n(%)〕

表3 各组KCNE2基因rs1805120位点C/T等位基因分布比较〔n(%)〕

表4 各组KCNE2基因rs1805120位点C/T基因型频率分布比较〔n(%)〕

3 讨 论

家族性房颤患者发病年龄相对较轻，无明确基础心脏疾病，占房颤患者的2%～16%〔8～10〕。家族性房颤相关基因通常主要是编码某个离子通道，并且基因表达异常会造成组成某一种离子通道的蛋白缺失及结构异常，从而导致离子通道功能受到影响〔11～13〕。因此，针对家族性房颤基因定位不仅是明确了突变的位点，同时还需明确房颤时离子通道异常的原因所在〔14～16〕。

心肌细胞上分布众多离子通道，而其中这些离子通道上相关基因多态改变，从而导致出现离子通道重构，进一步导致心房肌细胞动作电位受影响，而增加房颤的易患性〔17〕。其中认为在众多离子通道中，钾离子通道相关基因多肽改变与房颤发生关系紧密。KCNE1基因不仅能够编码β亚单位，同时还能够与α亚单位基因共同构成缓慢激活延迟整流钾通道〔18～20〕。本研究表明，房颤发生与rs1805127多态性具有相关性，并且认为等位基因G可能为家族性房颤易感基因。KCNE2基因为一种瞬时外向钾离子通道编码基因。研究报道显示，短QT综合征患者家族中心室及心房的有效不应期明显缩短，且经程控电刺激诱导出室颤和房颤，且经基因分析显示KCNE2基因第1 764位胞嘧啶核苷酸被鸟嘌呤核苷酸替代，并且相应的其所编码的第588位天冬氨酸变为赖氨酸，故而认为KCNE2基因N588K突变与房颤发生具有一定的相关性〔21〕。本研究表明，KCNE2基因位点rs1805120多态性与家族性房颤无明显相关性。