FSCN1、eIF-4A、hMOF在卵巢癌中的表达及意义

2020-03-11丁转南黄丽珊黄素然罗沛芬曾带娣李仲均

疑难病杂志 2020年2期

丁转南，黄丽珊，黄素然，罗沛芬，曾带娣，李仲均

卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病隐匿，恶性程度高，发生远处转移较早，相当一部分患者就诊时已经存在局部浸润或远处转移，属于中晚期[1]。因此，寻找有效的生物学诊断指标对卵巢癌作出早期诊断和预后评估非常重要。越来越多的研究证实，非编码RNA调控、组蛋白修饰、染色体重构等表观遗传学改变介导的基因沉默事件在肿瘤恶性进展的早期，通过激活或干扰关键的信号通路，从而促进肿瘤的发生、发展。Fascin-1(FSCN1)是一种细胞骨架蛋白，与细胞膜丝状伪足、片状伪足、微棘的形成有密切关系，参与肿瘤细胞的侵袭和转移[3]。hMOF是组蛋白乙酰转移酶MYST家族成员之一[4]。目前针对FSCN1、真核起始因子4A(eIF-4A)、hMOF在卵巢癌中表达情况及其作用的研究鲜有报道。本研究通过显色原位杂交和免疫组化染色方法检测卵巢癌中FSCN1、eIF-4A、hMOF的表达情况，并分析其与临床病理参数的相关性，为卵巢癌的早期诊断和预后评估提供试验依据，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选择2006年1月—2012年1月南方医科大学附属东莞人民医院妇产科手术切除的卵巢癌组85例、卵巢交界性肿瘤组25例、卵巢良性肿瘤组25例、正常卵巢组织(因其他良性疾病进行手术切除者)25例(对照组)患者作为研究对象。入选标准：(1)病理诊断明确；(2)术前未行放、化疗或免疫治疗；(3)随访资料完整。卵巢癌组年龄31～75(53.25±7.61)岁，临床分期Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期32例；卵巢交界性肿瘤组年龄28～71(52.53±6.72)岁，均为临床分期Ⅰ～Ⅱ期；卵巢良性肿瘤组年龄32～69(55.13±9.22)岁；对照组年龄30～75(54.51±7.75)岁。4组患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 观测指标与方法

1.2.1 FSCN1、eIF-4A、hMOF检测：4组受试者在外科手术过程中切除获得卵巢组织样本，采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶(SP)两步法检测。样本先经磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，再用福尔马林固定，常规石蜡包埋，酒精脱水，切片厚度4 μm，再脱蜡水化，用枸橼酸液高温高压修复抗原。每张切片滴加过氧化酶后于37℃孵育10 min，后滴加山羊血清封闭；然后滴加一抗，4℃孵育过夜，PBS冲洗后滴加二抗，37℃ 孵育30 min，PBS冲洗后加入生物素—过氧化物酶溶液37℃孵育20 min，用鲜二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木精复染，最后用中性树胶封片，荧光显微镜(日本Nikon公司，型号E800)下观察。用PBS代替一抗作为阴性对照。鼠抗人FSCN1单克隆抗体、羊抗人eIF-4A多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗人hMOF单克隆抗体购自美国OriGen公司。SP免疫组织化学试剂盒及双花扁豆凝集素(DBA)显色试剂盒均购自上海基因试剂公司。鼠抗人FSCN1抗体稀释度为1∶100，羊抗人eIF-4A抗体稀释度为1∶50，兔抗人hMOF抗体稀释度为1∶250。

1.2.2 结果判定标准：采用半定量评分方法，以阳性细胞比例(<5%=0，6%～25%=1，26%～50%=2，51%～75%=3，>75%=4)和染色强弱(无=0，弱=1，中=2，强=3)的乘积进行评分。按照乘积评分的分值分为阴性(0分)，低表达(1～4分)，中表达(5～8分)和高表达(9～12分)。

1.3 随访所有患者均进行5年随访，统计5年总体生存率、5年无瘤生存率及中位无瘤生存期(DFS)，以及FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阳性、FSCN1阴性、eIF-4A阴性、hMOF阴性表达者的中位无瘤生存期。

2 结果

2.1 各组FSCN1、eIF-4A、hMOF表达比较与对照组、卵巢良性肿瘤组、卵巢交界性肿瘤组比较，卵巢癌组FSCN1和eIF-4A 阳性表达率升高，而hMOF阳性表达率则降低(P均<0.05)，见表1、图1。

表1 4组受试者FSCN1、eIF-4A、hMOF阳性表达率比较 [例(%)]

注：与对照组比较，aP<0.05；与卵巢良性肿瘤组比较，bP<0.05；与卵巢交界性肿瘤组比较，cP<0.05

2.2 卵巢癌组患者FSCN1、eIF-4A、hMOF表达与临床病理特征的关系在卵巢癌组患者中，FSCN1和eIF-4A的表达与组织学分级、FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)；而hMOF的表达与FIGO分期有关(P<0.05)；余指标均不相关(P> 0.05)，见表2。

2.3 卵巢癌患者FSCN1与eIF-4A、hMOF表达的相关性分析 Pearson相关性分析显示，卵巢癌组织中FSCN1表达与eIF-4A与呈正相关(r=0.251，P=0.021)，与hMOF呈负相关(r=-0.277，P= 0.010)。

表2卵巢癌组患者FSCN1、eIF-4A、hMOF阳性表达与临床病理特征的关系 [例(%)]

项目例数FSCN1χ2/P值eIF-4Aχ2/P值hMOFχ2/P值年龄(岁)<605042(84.0)4.126/0.05038(76.0)0.362/0.1918(16.0)0.186/0.889≥603523(65.7)22(62.9)6(17.1)肿瘤直径(cm)<52722(81.5)0.115/0.97619(70.4)0.114/0.9734(14.8)0.275/0.779≥55843(74.1)41(70.7)10(17.2)组织学分级G1103(30.0)4.371/0.033 2(20.0)4.399/0.0312(20.0)0.126/0.309G23423(67.6)20(58.8)6(17.6)G34139(95.1)38(92.7)6(14.6)FIGO分期Ⅰ～Ⅱ5336(67.9)5.673/0.017 32(60.4)6.582/0.00812(22.6)4.302/0.038 Ⅲ～Ⅳ3229(90.6)28(87.5) 2(6.3)淋巴结转移无6546(70.8)6.377/0.025 42(64.6)6.352/0.02111(16.9)0.136/0.839有2019(95.0)18(90.0) 3(15.0)

2.4 卵巢癌患者FSCN1、eIF-4A、hMOF表达与预后的相关性所有患者均进行随访，5年总体生存率48.2%，5年无瘤生存率为45.9%，中位生存期为52.3个月(95%CI44.3～60.4)；FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性表达者中位无瘤生存时间均显著低于FSCN1阴性、eIF-4A阴性、hMOF阳性表达者(P<0.01)，见表3。

表3 卵巢癌组织中FSCN1、eIF-4A、hMOF表达的中位无瘤生存期比较

2.5 卵巢癌患者FSCN1、eIF-4A、hMOF表达与预后的Logistic回归分析经过Logistic多因素回归分析，FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性、组织学分级高、FIGO分期晚、淋巴结转移是卵巢癌患者中位无瘤生存期的危险因素，见表4。

3 讨论

卵巢癌是危害女性健康最常见的恶性肿瘤之一。根据世界卫生组织GLOBOCAN 2012项目的统计，在全球范围内卵巢癌每年新发病例约为22万，其中超过14万病例因此而死亡[5]。卵巢癌发病机制复杂，涉及遗传、免疫和环境等众多因素的相互作用。既往对卵巢癌的遗传学研究主要集中在遗传易感性方面，近年来随着分子生物学技术的快速发展，非编码RNA调控、DNA甲基化、组蛋白修饰等表观遗传学异常改变在卵巢癌中的作用受到越来越多的关注[6]。

FSCN1作为一种细胞骨架蛋白，可与F-肌动蛋白交联，调节细胞膜表面丝状伪足、片状伪足和微棘的形成，而这些都与细胞的运动、肿瘤细胞的侵袭转移密切相关[7-8]。有研究表明，FSCN1在乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、宫颈癌等多种肿瘤细胞中表达明显提高[9-10]。黄必飞等[11]研究表明，在宫颈癌中EGFR 和FSCN1均呈高表达，EGFR可能参与正性调控FSCN1表达。eIF-4A在肝癌、乳腺癌、淋巴瘤等多种肿瘤中均有过度表达[12]。已有文献报道[13]，在卵巢上皮癌组织中，eIF-4A阳性表达率显著提高，且与FIGO手术病理分期、组织学分级及淋巴结转移均有显著相关性，eIF-4A可能参与卵巢上皮癌的发生、发展过程。eIF-4A在DEAD-box家族蛋白ATP依赖的RNA解旋酶中含量最多，调控蛋白合成的起始过程。作为一种翻译起始复合因子，eIF4F表达失控导致蛋白异常合成可导致人类恶性肿瘤的发生。乙酰化酶hMOF可通过对组蛋白3、组蛋白4赖氨酸氨基端作用，参与核苷酸的复制、修复、转录及染色体重构，由此而参与肿瘤的发生过程[14]。hMOF是参与组蛋白乙酰化过程的重要成员，当hMOF表达异常时引起蛋白乙酰化失衡，进而引发肿瘤。Cai等[15]研究表明，相比于正常卵巢组织，hMOF mRNA和蛋白的表达在卵巢上皮癌组织中明显降低，且hMOF蛋白表达与卵巢癌分期有密切关系。

本研究结果表明，相比于对照组、卵巢良性肿瘤组及卵巢交界性肿瘤组，卵巢癌组FSCN1和eIF-4A阳性表达率显著增高，hMOF阳性表达率显著降低(P<0.05)。此外，卵巢癌中FSCN1和eIF-4A的表达与组织学分级高、FIGO分期晚、淋巴结转移有关(P<0.05)；hMOF的表达与FIGO分期有关(P<0.05)。Pearson相关性分析显示，卵巢癌中FSCN1表达与eIF-4A呈正相关，与hMOF呈负相关。提示在卵巢癌患者中FSCN1与eIF-4A、hMOF有一定相关性。另外，FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性表达者中位无瘤生存时间均显著低于FSCN1阴性、eIF-4A阴性、hMOF阳性表达者(P<0.05)。经过Logistic多因素回归分析，FSCN1阳性、eIF-4A阳性、hMOF阴性、组织学分级高、FIGO分期晚、淋巴结转移是卵巢癌患者DFS的危险因素。提示三者在卵巢癌患者中存在一定相关性，可能共同参与卵巢癌的发生、发展、浸润及转移过程。进一步分析其原因，由于eIF-4A翻译起始复合因子，当其表达异常时，可导致蛋白合成失控，引起卵巢上皮细胞增殖失控和恶性转化，进而引发卵巢癌。hMOF可作为催化亚基，特异性乙酰化组蛋白H4K16，使染色质的基因暴露，有利于转录因子的结合，启动基因转录过程。而在卵巢癌中hMOF表达下降，导致乙酰化H4K16水平降低，进而引起基因组不稳定、核异常、染色体畸变增加、DNA修复功能降低或某些抑癌基因表达异常等，导致癌症的发生。FSCN1可能参与EGFR相关的肿瘤发生及转移过程。FSCN1、eIF-4A可能参与卵巢组织的恶性转化过程，且与其恶性程度和生物学行为相关，因此，FSCN1、eIF-4A、hMOF可能成为卵巢癌早期筛选的生物标志物，有望用于早期诊断和指导预后。