HPV阳性子宫颈病变细胞中HMGA2蛋白的表达及意义

阳梅英，姜云惠，陈素冰，徐 华，袁小星，唐雄志

子宫颈癌是全球女性常见的癌症之一，相应的筛查方法已发展了近半个世纪。目前，HPV和细胞学联合检测仍是大多数发展中国家主要的筛查方法[1]。2015年以来，发达国家已逐步将HPV检测作为一种具有灵活细胞学检测功能的初级筛查工具，以提供更强的基于风险的分层效应。大多数发展中国家的细胞学筛查结果质量不高[2]，但是可重复的HPV检测可减少细胞学专家主观判断导致的诊断失败。有文献报道，细胞学检查存在不足，从而降低了筛查的特异性[3]。因此，寻找子宫颈病变发生、发展的分子标志物，应用于子宫颈脱落细胞学检测，是提高子宫颈病变早期诊断能力的关键。高迁移率组A2基因HMGA2是一种非组蛋白和结构转录因子，作为癌胎蛋白，HMGA2在发育过程中起重要作用。有研究显示，HMGA2是HPV整合热点之一[4]，在子宫颈癌的发生中起一定作用。本文检测子宫颈脱落细胞中HMGA2蛋白表达，分析其在子宫颈病变中的筛查意义。

1 材料与方法

1.1 材料选取2016年4～7月中山大学附属第七医院妇科门诊及住院收治的可追踪的HPV阳性子宫颈标本143例，患者均行子宫颈脱落细胞学检查，年龄22～68岁，中位数(41.5±4.8)岁。其中无子宫颈上皮内病变41例(阴性组)，意义不明确的非典型性鳞状细胞(atypical squamous cells of undetermined significance, ASC-US)28例，低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)27例，高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)33例，鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)14例。

1.2 方法采用刷取患者的标本完成液基薄层细胞学检测后，残余标本涂片至多聚赖氨酸包被的载玻片上，干片后采用免疫细胞化学法检测HMGA2蛋白在子宫颈各级病变脱落细胞中的表达。鼠抗人HMGA2单克隆抗体购于上海瑞齐公司，免疫组化试剂盒(EnVision两步法)及DAB显色试剂盒购于福州迈新公司，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。以子宫颈脱落细胞学及组织病理学均阴性的细胞标本为阴性对照，组织病理学阳性的组织标本为阳性对照。所有患者均随访24个月。

1.3 结果判断HMGA2蛋白定位于细胞核和细胞质，免疫细胞化学染色的阳性信号呈棕黄色或棕褐色弥漫颗粒状。每例随机观察5个高倍镜视野(400×)，判断是否有HMGA2蛋白显色。

1.4 统计学方法所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，应用受试者操作(ROC)曲线统计，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HMGA2蛋白的表达不同级别细胞学诊断的镜下表现详见图1。HMGA2蛋白在阴性组中的阳性率为19.5%，在ASC-US组中阳性率为45.8%，从LSIL组中的70.4%上升到HSIL组中的87.9%，在SCC组中则高达92.9%(表1，图2)。HMGA2蛋白表达与子宫颈病变恶性程度相关，阳性率随着子宫颈病变程度的增加而增加。

2.2 HMGA2蛋白的表达效能本组患者随访24个月，至少行1次组织学检查≥子宫颈上皮内病变1级定义为随访组织学阳性。结果显示：HMGA2蛋白表达对随访组织学阳性的预测能力优于单纯的细胞学涂片(表2)。预测随访组织学结果时，细胞学的敏感性为80.4%，HMGA2蛋白的敏感性为90.5%，而细胞学的特异性为83.5%，低于HMGA2蛋白的特异性(91.2%)。HMGA2蛋白检测的ROC曲线下面积0.938高于细胞学检测的ROC曲线下面积0.804(P<0.001)，提示HMGA2蛋白检测预测随访组织学阳性的检验效能高于细胞学检测(表3)。

表1 HMGA2蛋白在不同子宫颈病变组织中的表达[n(%)]

ASC-US.不能明确意义的非典型鳞状细胞；LSIL.低级别上皮内病变；HSIL.高级别上皮内病变；SCC.鳞状细胞癌

表2 不同子宫颈病变HPV阳性患者子宫颈脱落细胞HMGA2蛋白表达及随访

ASC-US.不能明确意义的非典型鳞状细胞；LSIL.低级别上皮内病变；HSIL.高级别上皮内病变；SCC.鳞状细胞癌；*在随访的24个月中，至少进行1次组织学检查≥子宫颈上皮内病变1级

表3 HMGA2表达和细胞学检测在预测随访组织学结果时的检验效能

3 讨论

子宫颈细胞是一种方便可靠的材料来源，这促使临床研究改进子宫颈癌的筛查策略。HPV筛查是必要的，但不是子宫颈癌发展的唯一决定性因素，因此越来越多的筛查方法开始关注肿瘤发生过程中的分子改变。如p16/Ki-67和microRNAs在提高HPV阳性分型效应的敏感性和特异性有广阔的应用前景。对于这些分子生物学标志物，在形态转化前可能发生相对变化，是比PAP试验更好的指标来区分HPV阳性患者。本实验选择热整合基因HMGA2，通过免疫细胞化学评估它的分类效果。ROC分析表明，HMGA2的半定量免疫染色值比TCT检测值更高，能够区分HPV阳性患者的肿瘤变乃至癌变的风险[5]。

HPV整合是相关癌变的一个功能步骤，在人类基因组的早期阶段可能会随机分散[6]。然而，整合热点为病毒的长期生存和选择提供优势，使其成为侵袭性子宫颈癌的主要事件。这些病毒利益整合热点的致癌机制，是由于肿瘤抑制因子的下调或癌基因的上调所致。因此，HMGA2基因检测可用于HPV转化感染的预测，本实验结果支持将免疫细胞化学染色作为分类的方法。越来越多的分子检测HPV整合的热点值得进一步研究[7]。

图1HPV阳性患者不同子宫颈病变的细胞学诊断：A.阴性组；B.不能明确意义的非典型鳞状细胞；C.低级别上皮内病变；D.高级别上皮内病变；E.鳞状细胞癌图2HMGA2蛋白在HPV阳性患者不同子宫颈脱落细胞的表达：A.阴性组；B.不能明确意义的非典型鳞状细胞；C.低级别上皮内病变；D.高级别上皮内病变；E.鳞状细胞癌，EnVision两步法

HMGA2在胚胎发生过程中对DNA活性的调控起重要作用，但在成体细胞中却未能检测到。HMG家族通过调节DNA的转录、复制、重组和修复进而参与细胞的增殖、生长、分化、衰老和死亡[8]。根据本组前期报道[4]，HMGA2的频率为7.8%，是新的HPV整合热点之一，同时在子宫颈癌组织中也有明显的上调。最近有文献报道发现HMGA2在子宫颈上皮内病变和子宫颈癌细胞中的表达显著增加，与HPV16拷贝数相比，其更有诊断价值，具体机制与抑制细胞凋亡有关。此外，HMGA2高表达与胃肠道肿瘤、乳腺癌、口腔癌、肺癌和卵巢癌等多种癌症的转移和预后不良有关[9]。

本实验采用免疫细胞化学法检测143例HPV阳性患者子宫颈脱落细胞的HMGA2蛋白表达，并随访24个月，结果显示HMGA2蛋白表达与子宫颈病变有关，其阳性率及其强度随着子宫颈病变程度的增加而增加，敏感性为90.5%，特异性为91.2%，其对组织学阳性的检验效能明显高于单纯的细胞学涂片。HMGA2蛋白过表达在子宫颈病变的发生、发展中发挥非常重要作用，有利于子宫颈病变的早期诊断，可作为子宫颈癌筛查的新分子标志物。