平敏煎对慢性荨麻疹模型大鼠的影响*

★ 喻国华 施德全 李智萍

（1.江西中医药高等专科学校皮肤科 江西 抚州 344000；2.抚州市妇幼保健院 江西 抚州 344000）

荨麻疹是由多种因素引起的皮肤、粘膜小血管扩张及渗透性增强而出现的一种局限性水肿隆起，以风团和瘙痒为主要临床表现。慢性荨麻疹（CU）目前认为其发病主要与Ⅰ型变态反应有关，血清IgE 作为介导Ⅰ型变态反应的主要抗体，在变态反应疾病中起关键作用［1］。IL-4 是 Ig E 的特异性诱导剂，能促使 B 细胞产生IgM 并转变为IgE，在IgE 正反馈效应中起到重要的作用［2］。5-HT 是组织液外渗，风团形成的主要机制［3］，在临床上至少有3/4 的CU 患者找不到过敏源，致使CU 非常顽固。西医以抗组胺药物治疗为主，辅以免疫调节、脱敏等治疗，抗组胺药虽有效，但停药后复发率高，长期用药耐药性增加的等问题一直没得到解决。因此积极开展中药治疗CU 的实验研究，寻找中药抗变态反应的有效药物，并探索其可能的作用机制非常有必要。本课题采用现代免疫学技术，观察平敏煎对CU 小鼠相关因子的影响。

1 实验材料

1.1 实验动物wistar 大鼠60 只，体重200～220g，雄雌各半，饲养室温度22℃±2 ℃，相对湿度70%±5%。均购自南昌大学医学院实验动物中心，许可证号SCXK（赣）2018-0018，实验期间分笼喂养，每笼饲养大鼠5 只。

1.2 实验药物平敏煎的组成为：生地黄、何首乌、防风、荆芥、白鲜皮、刺蒺藜、五味子、乌梅、丹皮、地骨皮各10g，煅龙骨、生黄芪20g，苦参、黄柏各9g，当归6g，全蝎3g，蜈蚣2 条。生药均由江西中医药高等专科学校附属医院中药房提供。氯雷他定片，10mg/片，上海先灵葆雅制药有限公司，国药准字：H20180410。将药片研磨成粉末加入生理盐水配成10mg/mL 溶液待用。

1.3 主要试剂及仪器设备P 物质（SP）试剂盒，上海江莱生物科技有限，批号：20170824；5-羟色胺（5-HT），上海博谷生物科技有限公司，批号：80362801；人白介素4（IL-4）试剂盒（上海恒远生物科技有限公司，批号：20171036；干扰素-γ（上海沪峰生物科技有限公司，批号：20173028）。卵白蛋白，上海康朗生物科技有限公司，批号：F20170521；AI（OH）悬液，国药集团化学试剂公司， 批号：F20170417；ELX80O 型酶标仪，美国BIOTEK 公司；XYJ—2 型台式高速离心机，江苏医疗仪器设备厂；切片机，德国克林蓝公司；荧光分光光度计，上海精密仪器仪表有限公司。

2 实验方法

2.1 平敏煎制备按照生药剂量比例根据文献折算给药量，并扩大5 倍。称取上述药品，加入10倍清水中浸泡30min 后，然后将药材及浸泡液转至煎药锅中加水至水面超过药面一指，武火煮沸后改用文火煎熬，煎熬过程中用玻璃棒时时搅拌，文火煎熬40min 后将药液倒出至另一容器中，药锅中再次加水如前煎熬30min 后将药液倒出。将两次所得药液用8 层纱布过滤、混匀后于火上浓缩为每1mL 药液含1g 生药的提取物，装入洁净玻璃瓶中，封口膜封口，置于4℃冰箱保存备用。

2.2 造模除正常组外，每组小鼠腹腔内注射卵白蛋白1mL 与AI（OH）悬液1mL 的混合液进行初次免疫，第10d 重复1 次。从初次免疫后第6d开始给药，共14d。

2.3 动物分组与给药方法取大鼠 60 只，随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、平敏煎高、中、低剂量组，每组 10 只。正常组和模型组每日灌服生理盐水4mL/只；低剂量组、中剂量组、高剂组分别灌服平敏煎2.5g/kg、5g/kg、10g/kg；氯雷他定组灌服氯雷他定溶液10mg/kg。

2.4 取材与检测

2.4.1 平敏煎对大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT 水平的影响上述大鼠未处死前颈动脉取血，离心2000r/min，取血清，采用双抗夹心 ELISA 法测定血清中IgE 含量。采用放射免疫分析法测定SP、IFN-γ、IL-4 含量，采用荧光分光光度法测定5-HT含量，均严格按照说明书步骤操作。

2.4.2 平敏煎对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响 取血后，处死大鼠，立即腹腔内注射肥大细胞冲洗液，剖开腹腔，吸出全部液体，1500r/min 离心5min，弃上清制成肥大细胞悬液。进行细胞涂片，镜检。随机计数100 个细胞，计数脱颗粒细胞数，计算脱颗粒百分数和抑制率。

2.4.3 统计学分析采用SPSS18.0 软件分析，计量资料用描述，用两样本t检验对各组数据进行比较，当P＜0.05 时，差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 平敏煎对大鼠血清IgE、IL-4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影响与正常组比较，模型组大鼠血清IgE、SP、IL- 4 水平极显著升高，IFN-γ、5-HT 水平极显著降低（P＜0.01），表明病理状态下，机体免疫细胞分泌产生IgE、IL-4 异常旺盛， IFN-γ、5-HT分泌不足；与模型组比较，各治疗组均能降低IgE、SP、IL-4 水平，提高IFN-γ、5-HT 水平（P＜0.05或P＜0.01），具体见表1。

表1 平敏煎对大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影响（，n=10）

表1 平敏煎对大鼠血清 IgE、IL- 4、SP、IFN-γ、5-HT水平的影响（，n=10）

注：与正常组相比，*P＜0.01；与模型组相比，#P＜0.05，△P＜0.01。

组别 IgE/ng·mL-1 IL- 4/μg·L-1 IFN-γ/μg·L-1 SP/ng·mL-1 5-HT/μg·L正常 5.68±0.65 18.64±2.73 46.01±1.72 58.01±9.86 124.23±2.89模型 9.96±0.67* 27.47±3.42* 35.65±4.58* 109.74±8.13★ 58.78±5.34*氯雷他定 5.72±1.12 20.25±2.28 44.63±4.26 62.19±7.26 119.69±7.68平敏煎高剂量组 5.73±0.79△ 20.15±3.26△ 43.52±3.28△ 61.01±11.32△ 120.57±13.36△平敏煎中剂量组 5.98±0.77# 23.13±2.34# 39.34±2.47# 89.53±3.48# 76.63±12.45#平敏煎低剂量组 6.24±0.83# 25.52±3.15# 37.43±3.74# 92.35±9.48# 68.54±11.26#

3.2 平敏煎对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响与正常组比较，模型组脱颗粒率极显著升高（P＜0.01），表明病理状态下，肥大细胞大量脱颗粒，释放多种炎症介质。与模型组比较，均可减少肥大细胞脱颗粒，差异有显著性（P＜0.05 或P＜0.01），具体见表2。

表2 平敏煎对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响（，n=10）

表2 平敏煎对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响（，n=10）

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，△P＜0.01。

组别 脱颗粒率/% 抑制率/%正常 19.23±5.12 -模型 60.10±11.35* -氯雷他定 28.91±9.24 53.65±10.93平敏煎高剂量组 29.47±8.31△ 52.92±11.28平敏煎中剂量组 39.51±11.43# 38.36±15.17平敏煎低剂量组 42.53±9.84# 32.18±7.94

4 讨论

气血不足，营卫失和是慢性荨麻疹的病理基础。气不足则卫外失固，风邪乘虚而入；血不足则虚风内生，肌肤失养而出现风团、皮肤瘙痒不已等症，且反复发作，缠绵难愈。故治法应兼顾标本，以补益气血，调理脏腑为主，兼祛外邪，消风止痒。方中生地、何首乌、当归、丹皮、地骨皮养血润燥，养阴祛风；荆芥、防风、白鲜皮、刺蒺藜祛外风；全蝎、蜈蚣属虫类药，病久者以其搜风入络、搜剔化疲通络药；生黄芪与当归配益气养血；苦参、黄柏祛湿止痒，防湿邪缠绵；乌梅、五味子酸收药，与祛风药合用，一散一收，开合有度，祛邪而不伤正。全方共奏益气养血、润燥祛风、化疲通络的功效。

目前，荨麻疹的发病机制尚不完全清楚，其中心环节是肥大细胞活化脱颗粒，释放多种炎性介质等引起毛细血管扩张及通透性增加，导致真皮浅层急性水肿。皮肤中的P 物质能导致肥大细胞脱颗粒释放介质，引起组胺、类胰蛋白酶等生物活性物质的快速释放，可促进免疫细胞吞噬作用和细胞因子的分泌［4-5］，并增加血管通透性，促进白细胞外渗参与促炎过程［6］。SP 可直接刺激嗜酸性粒细胞释放过氧化物酶、乳酸脱氢酶和氧自由基、血栓烷B2 等［7］。

血清Ig E 作为介导Ⅰ型变态反应的主要抗体，在变态反应疾病中起关键作用。IL-4、IFN-γ 分别是Th1、Th2 细胞的自分泌因子，而且与Ig E 的生成密切相关。IL-4 可选择性导致嗜酸性粒细胞从循环血管溢出向炎症部位移行、聚集，增强肥大细胞来源的炎症介质活性，也是促肥大细胞生长因子。IFN-γ 是由Th1 细胞分泌可诱导Th 细胞向Th1 细胞分泌，抑制IL- 4 诱导Th 细胞向Th2 细胞分化；可拮抗IL- 4 诱导B 淋巴细胞增殖及产生IgE［8］。5-HT 在慢性荨麻疹发病中也取到重要作用，王侠生［9］通过测定尿5-羟吲哚乙酸、5-HT 发现均有异常，提示荨麻疹的发病可能与5-HT 有关。

实验结果显示，模型组大鼠血清SP、IL- 4、Ig E、水平极显著升高，IFN-γ、5-HT 水平极显著降低。通过平敏煎治疗后，IFN-γ、5-HT 水平显著升高，而其余的都显著下降，提示平敏煎具有调节炎症介质释放，抑制体内IgE 生成，从而抑制Ⅰ型变态反应的发生。