全血γ干扰素释放试验在菌阴肺结核及结核性胸膜炎中的诊断价值

阳 芳 蒋 璇 覃超群 高 枫 黄 斌

作者单位：广西壮族自治区桂林市人民医院 541002

根据2011～2016年出版的全球结核病报告，2010～2015年我国涂阳结核病患病率逐年下降，而菌阴结核患者比率显著增加，已是我国结核病疫情的一个重要特点[1]。由于缺乏细菌学诊断依据，加之临床表现常常不典型或无症状，菌阴肺结核的诊断一直是困扰广大临床医生的难题，常常造成误诊、漏诊[1，2]。TST试验常常呈现假阴性或无反应的结果，使得其尽管价廉，但临床诊断意义一直备受质疑，往往需要结合影像学及多种血清学检查及治疗反应来综合判定[3]。所以，需要选择有效地诊断菌阴肺结核和结核性胸膜炎的方式，为菌阴肺结核和结核性胸膜炎提供合理的诊断方式，详细报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年4月至2018年4月来我院诊治40例疑似肺结核患者以及40例健康对照者作为此次研究对象。纳入标准：①患有咳痰、咳嗽等呼吸道症状；②CT检查或X片显示肺部有阴影；③自愿加入本研究，并签署知情同意书。排除标准：①妊娠；②SLE、风湿等自身免疫性疾病；③患有艾滋病；④器官移植、使用免疫抑制剂等患者。肺结核诊断主要依据痰涂片检查、影像学和临床症状并参照肺结核的诊断标准排除其他疾病后确诊。患者分为菌阳肺结核组、菌阴肺结核组、肺部其他疾病对照组以及健康对照组。其中，菌阳肺结核组21例，年龄18～71岁，平均年龄(45.7±16.3)岁；菌阴肺结核组22例，年龄19～69岁，平均年龄(41.29±15.4)岁；肺部其他疾病对照组27例，年龄21～68岁，平均年龄(47.59±12.36)岁；健康对照组10例，年龄20～67岁，平均年龄(44.58±8.59)岁。此次研究经我院伦理委员会批准，得到患者知情同意并签署知情同意书，四组患者在年龄、性别等一般资料上比较均无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 标本收集和检测方法 所有研究对象于入院次日清晨抽取空腹静脉血5ml，置于真空肝素抗凝管中。采血后6小时内将静脉血1ml加入24孔培养板内，共5孔，每孔依次加入聚羟基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoates PHA)(阳性对照)、PPD、ESAT-6、ESAT-6/CFP-10和生理盐水(阴性对照)，并于5%CO2、37℃细胞培养箱孵育过夜，次日收集血浆至少300μl，于-20℃保存并严格按照试剂盒要求进行操作。根据预实验的结果，为达到最大刺激浓度，最后1孔加入等体积生理盐水[4]。

1.3 评价标准 ①阳性：PPD孔阳性定义为≥20pg/ml；②阴性：PPD孔阴性定义为<20pg/ml。

1.4 统计学方法 通过使用SPSS 18.5统计学软件对所搜集的资料以及数据进行统计学分析，各组样本间抗原刺激后分泌的IFN-γ浓度的比较采用非参数检验，两组间的比较应用Mann-WhitneyU检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 两组抗原刺激后IFN-γ含量增高的阳性率比较 观察后可发现，结核组3种抗原刺激的γ干扰素释放实验的阳性率(81.81%)显著高于健康组的阳性率(20.0%)，两组间比较具有统计学差异(P<0.05)。详细情况见表1。

表1 两组抗原刺激后IFN-γ含量增高的阳性率比较[例(%)]

2.2 两组结核患者IFN-γ含量增高的阳性率比较 菌阳肺结核组患者3种抗原刺激的γ干扰素释放实验与菌阴肺结核组比较无明显差异(P>0.05)，详细情况见表2。

表2 两组IFN-γ含量增高的阳性率比较[例(%)]

2.3 两组IFN-γ含量增高的阳性率比较 观察后可发现，菌阴肺结核组3种抗原刺激的γ干扰素释放实验的阳性率(86.36%)显著高于疾病对照组的阳性率(35.29%)，两组间比较具有统计学差异(P<0.05)，详细情况见表3。

表3 两组结核患者IFN-γ含量增高的阳性率比较[例(%)]

3.讨论

近年来，由于广谱抗菌药物的广泛应用，加上人口流动性的增强，菌阴结核发病率逐步上升。结核杆菌感染的初期检测相对比较困难，TST试验常常呈现假阴性或无反应的结果，使得其尽管价廉，但临床诊断意义一直备受质疑，往往需要结合影像学及多种血清学检查及治疗反应来综合判定[5～7]。虽然细菌学被誉为结核病临床诊断的金标准[8]，但其具有自身的局限性，如敏感性不高且耗时长、阳性率诊断偏低等，临床检出率不高。探索新的方法用于诊治结核病，已迫在眉睫[9]。γ干扰素释放试验最早用于结核潜伏感染的研究[10]，是检测结核分枝杆菌(MBT)特异性抗原刺激T细胞产生的γ干扰素，以判断是否存在MTB的感染。本次研究表明，结核组3种抗原刺激的γ干扰素释放实验的阳性率(81.81%)显著高于健康组的阳性率(20.0%)，两组间比较具有统计学差异(P<0.05)；菌阳肺结核组患者3种抗原刺激的γ干扰素释放实验与菌阴肺结核组比较无明显差异(P>0.05)；菌阴肺结核组3种抗原刺激的γ干扰素释放实验的阳性率(86.36%)显著高于疾病对照组的阳性率(35.29%)，两组间比较具有统计学差异(P<0.05)。3种抗原在菌阳肺结核组和菌阴组中的阳性率无统计学差异。

国外已有研究证实【11，12】，多种因素如肥胖、高龄、HIV感染患者、结核治疗免疫抑制状态和HLA基因型等均会影响IFN-γ释放试验的结果。由于本研究并未纳入上述人群，故也未能对假阴性病例分析，因此这些因素是否为菌阳结核病组中试验阴性的原因，还需要进一步证实。

综上所述，全血IFN-γ释放试验阳性可用于活动性肺结核患者的筛查、菌阴肺结核的辅助诊断手段；其阴性结果对排除MTB感染也有一定帮助，值得临床推广应用。