ApoE基因多态性与血脂、缺血性脑卒中的相关性分析

夏皓，吴赛珠

(南方医科大学南方医院，广东 广州 510515)

缺血性脑卒中，又称脑梗死，是最常见的卒中类型，具有高发病率、高致残率、高致死率和高复发率等特点。目前，缺血性脑卒中的治疗虽然取得一定进展，但其发病风险由20世纪90年代的22.8%上升到目前的24.9%，同比增长8.9%[1]。随着脑血管疾病分子学、遗传生物学等研究逐渐深入，缺血性脑卒中相关致病基因成为近年来医学研究的重点。

载脂蛋白E(ApoE)由299个氨基酸组成，是极低密度脂蛋白、乳糜微粒和高密度脂蛋白的组成成分，也是外周组织中低密度脂蛋白受体的主要配体，ApoE在将血液中的胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)转运到外周组织的过程中起着重要的作用。相关研究结果显示，ApoE基因多态性对血脂代谢、缺血性脑卒中、动脉粥样硬化及冠状动脉粥样硬化性心脏病等都具有影响，但具体作用机制仍不清楚[2]。本研究旨在阐明ApoE基因多态性与缺血性脑卒中的关系，为研究缺血性脑卒中相关致病基因奠定基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2017年11月至2019年11月在南方医院老年病科住院期间确诊为缺血性脑血管疾病的150例患者作为卒中组，均经头部CT或MRI检查满足缺血性脑卒中诊断标准；排除出血性脑卒中、短暂性脑缺血等患者及严重肝肾功能损害、恶病质等患者。将同期在我院健康体检中心接受检查的140例体检者作为对照组。两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1ApoE基因多态性检测 采集EDTA-K2抗凝的受检者肘静脉血2 mL，按照血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行提取和纯化DNA。以四乙酸二氨基乙烷抗凝，提取红细胞中DNA，利用PC R 扩增和Hha工酶切消化，进行载脂蛋白基因分型。通过ApoE在112和158位上密码子的多态性，区分出三种等位基因(ε2、ε3、ε4)。按照ApoE基因的不同表型，各分为3种基因表型：ε2型(ε2/ε2，ε2/ε3)、ε3型(ε3/ε3，ε2/ε4)、ε4型(ε3/ε4，ε4/ε4)。

1.2.2 血脂测定：所有检测对象早晨空腹采集静脉血3 mL，3 000 r/min离心10 min后取上清于全自动生化分析仪，检测样本甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度。对比两组间不同基因表型的血脂水平。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组生化指标分析

卒中组TG、LDL-C、TC均高于对照组(P均<0.05)，HDL-C则较对照组显著降低(P<0.01)，见表1。

表1 两组一般资料及生化指标比较分析

2.2 两组ApoE基因型分布率比较

两组ε2/ε2均为罕见基因型，ε3/ε3均为常见基因型。与对照组相比，卒中组等位基因ε4分布频率较高(P<0.05)，见表2。

表2 卒中组与对照组ApoE基因型分布率比较[例(%)]

2.3 卒中组不同基因表型患者血脂水平比较

卒中组中ε4基因型患者血脂水平TC和LDL-C显著高于ε2和ε3基因型(P<0.01)，见表3。

表3 卒中组不同基因表型患者血脂水平比较

2.4 ApoE基因型多态性与缺血性脑卒中发病关联分析

与ε3基因携带者相比，ε4基因携带者患病风险升高，等位基因ε4与缺血性脑卒中风险呈正相关(P<0.05)。见表4。

表4 ApoE基因型多态性与缺血性脑卒中发病的相关性分析[n(%)]

3 讨论

ApoE对脂质存储、转运、利用及排泄均有影响，对血脂浓度会产生直接作用，与动脉粥样硬化性疾病的发生密切相关。ApoE是一种多态性糖蛋白，能编码形成含不同氨基酸成分的ApoE异构体，正是这些基因层面的差异导致个体血脂代谢速度不同，从而导致个体间动脉粥样硬化程度的不同。ε4等位基因编码的异构体分解代谢速率更快，也更容易与受体结合，使肝脏中ApoE受体吸收更多的ε4脂蛋白，增加TC含量，同时降低肝细胞表面的LDL受体，减缓LDL分解代谢，提高LDL水平，增加动脉粥样硬化斑块形成[3]，因此，ε4等位基因是缺血性脑卒中的危险因素，ε3等位基因对缺血性脑卒中的保护作用可能与LDL-C水平的降低和HDL-C的升高有关[4,5]。

ApoE基因多态性特征可以指导患者在临床实践中正确选择降脂药物，从而实现个体化精准医疗，降低冠心病的发病率和心血管事件风险。例如，Schneider等[6]的研究结果显示，在控制性别和年龄因素后，ApoE ε4可使脑梗死风险增加2.3倍，使皮质梗死发生率增加3.2倍，加重腔隙性梗死患者脑白变化[7]。ApoE ε4等位基因携带者的脑组织在低灌注期至梗死期的存活阈值高于非ε4等位基因携带者[8]。ApoE ε2则与短暂性脑缺血发作和脑卒中患者脑白质营养不良的进行性加重有关[9]。

本研究中卒中组和对照组ε2/ε2均为罕见基因型，ε3/ε3均为常见基因型。与对照组相比，卒中组等位基因ε4分布频率较高；卒中组ε4基因型患者血脂水平TC和LDL-C显著高于ε2和ε3基因型；与ε3基因携带者相比，ε4基因携带者患病风险升高，等位基因ε4与缺血性脑卒中风险呈正相关。但由于本研究样本量相对较小，未进行性别、年龄等亚组分析，也未进行高血压、糖尿病、吸烟等卒中危险因素分析，研究具有一定的局限性。ApoE基因多态性与缺血性脑卒中之间关联的确切结论，仍需后续开展多中心合作、大样本深入研究。