牙周牙髓联合病变牙周袋内厌氧菌的培养检测和药敏试验
2020-02-21林璐张春春沈肖明
林璐,张春春,沈肖明
龙岩人民医院 (福建龙岩 364000)
牙周牙髓联合病变指患牙同时出现牙髓炎症、牙周破坏的一种细菌感染性疾病[1]。目前,牙周牙髓联合病变是导致失牙的主要原因,备受人们重视,而彻底消除感染源是该病的主要治疗原则。相关研究发现,厌氧菌感染是导致牙周牙髓联合病变牙周袋发生的主要原因,临床多采取抗生素治疗[2]。基于此,对牙周牙髓联合病变牙周袋内厌氧菌进行培养检测,并开展药敏试验,可以提高抗生素的治疗效果,对改善患者症状,提高患者生命质量具有重要意义。本研究对74例牙周牙髓联合病变患者厌氧菌进行培养检测,并开展药敏试验,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2016年4月至2017年4月我院收治的牙周牙髓联合病变患者74例,其中男38例,女36例;年龄24~68岁,平均(46.86±3.14)岁。本研究获得我院医学伦理委员会审核批准。
诊断标准:存在牙髓炎、根尖周炎病史;X线检查显示根尖周区、牙根侧存在齿槽骨破坏的X线透影区,可探到牙周袋、电活力测验敏感、温度测验疼痛(或者无反应)[3]。
纳入标准:确诊为牙周牙髓联合病变;患者自愿签署同意书[4]。
排除标准:3个月内应用过抗生素治疗的患者;存在全身性疾病的患者;精神障碍患者[5]。
1.2 细菌培养及检测
(1)试剂:10%羊血Oxoid布氏血琼脂培养基,10%脱纤维羊血的Oxoid 厌氧菌基础琼脂培养基,青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林(所有药物试剂均由中国药品生物制品检定所提供)。(2)采样及接种:对患者进行采样前,先用浓度为3%的过氧化氢(广东恒健制药有限公司,国药准字H44023919,100 ml/瓶)漱口,用纱条隔湿,用碘酊、乙醇棉球对患牙、牙龈进行消毒3次,达到无菌;去除菌斑后,将纸尖放置在深牙周袋中20 s,在1 h内将其置于羊血琼脂培养基平板上,放入厌氧袋内,进行厌氧培养。(3)培养及鉴定:设置培养温度为35~38 ℃,时间为48~72 h,CO2、H2、N2浓度分别为5%、10%、85%;应用的培养基为10%脱纤维羊血的Oxoid厌氧菌基础琼脂培养基、选择性培养基(加入卡那霉素100 mg/L),培养后得到的细菌进行耐氧试验2次,保证所有细菌均为专性厌氧菌;对各致病菌进行分离、革兰染色,在电子显微镜下进行观察,并应用API20a试剂(厌氧菌鉴定试剂条,江苏泽源生物科技有限公司)进行生化鉴定;加入甘油、脱纤维羊血(20%、80%)在温度为-70 ℃下进行保存,留备药敏试验。
1.3 药敏试验
采用琼脂稀释法进行药敏试验,将菌落悬浮在厌氧琼脂Wikins-Chalgren液体培养基(上海信裕生物科技有限公司)中,调整菌落浓度至1×106cfu/ml,借助多点接种器点种于10%脱纤维羊血布氏培养基中(含抗生素),培养时间为45 h,最低抑菌浓度(MIC)为无菌落形成或者形成菌落数量低于5个,用2个10%羊血布氏平板(不含抗生素)分别作为有氧对照、厌氧对照,质控菌株为 ATCC25285(脆弱拟杆菌)。以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准为依据,对各抗生素的耐药浓度判断如下:青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林最低抑菌浓度分别为不低于2 mg/L、32 mg/L、8 mg/L、16 mg/L[6]。
2 结果
2.1 厌氧菌分布结果
74例牙周牙髓联合病变患者经耐氧试验,结果显示,厌氧菌检出率为100%,分离厌氧菌株77株,其中牙周源性牙周牙髓联合病变培养的厌氧菌37株(48.05%),牙髓源性牙周牙髓联合病变培养的厌氧菌40株(51.95%),经生化鉴定,以链球菌属最多,其次为普雷沃属,见表1。
表1 厌氧菌分布结果[株(%)]
2.2 药敏试验结果
药敏试验结果显示,克林霉素耐药最高,其次为青霉素,见表2。
表2 药敏试验结果
3 讨论
牙髓组织和牙周组织在解剖学方面是相互沟通的,因此两者的感染和病变可以互相影响和扩散,导致联合病变的发生。牙周牙髓联合病变的发生包括3种:(1)牙周发生细菌感染进而导致牙髓病变;(2)牙髓病变感染导致牙周病变;(3)牙周、牙髓独立存在,并出现交叉感染[7]。牙周牙髓联合病变的发生对人们的牙齿健康具有极大的危害,且影响人们的生活与工作,因此,采取积极的治疗至关重要[8]。在对患者进行治疗时,选取有效的抗生素将直接影响整体疗效,因此,治疗前需要掌握致病菌分布情况,并进行药敏试验,找出最敏感的抗生素,从而合理应用,达到治疗的目的。
本研究结果显示,分离出的77株厌氧菌株,经生化鉴定,以链球菌属最多,其次为普雷沃属;耐药试验方面,克林霉素耐药最高,分析原因在于,克林霉素可以渗透牙骨质,对生物膜形成具有抑制作用[9-10]。
综上所述,牙周牙髓联合病变与厌氧菌关系密切,药敏试验可以找出敏感的治疗药物,为临床治疗提供借鉴依据。