临床体液常规检验的技术现状与规范

胡晓波

（上海中医药大学附属龙华医院检验科，上海 200032）

近十多年来，国际上先后出版了一系列体液（脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液、粪便、精液和阴道分泌物等）检验的标准和指南文件，从标本采集、转运和储存，理学检验，化学检验，免疫学检验，细胞学检验等方面提出了相关要求。本专题特别邀请了相关领域的专家和学者对体液检验所涉及的相关问题进行研究，并分享了各自的研究成果。

1 标本采集、转运和储存

1.1 标本采集

1.1.1 由临床医护人员负责采集 脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液、阴道分泌物等标本多由临床医护人员采集，但临床实验室须告知影响检验结果的相关因素，例如标本是来自腰椎还是脑室的脑脊液，是胸腔、腹腔还是心包腔的积液，是阴道侧壁的分泌物（有助于判断细菌性阴道病）还是阴道后穹隆的分泌物（有助于判断滴虫性阴道炎），并制订相关文件等。

1.1.2 由患者自行采集 粪便、精液等标本由患者自行采集，临床实验室须向患者提供标本采集口头或书面说明，并提供符合要求的采集容器。如采集粪便标本时，要告知患者尽量选取附着黏液、脓液、血液等的蚕豆大小的新鲜粪便，并避免污染。在精液标本采集后还需记录采集方法、时间、标本完整性、禁欲时间等内容。

1.1.3 提供正确的标本采集器材 不同标本应该使用不同标本采集器材进行采集，如脑脊液标本采集于无菌试管，玻璃试管因可影响细胞学检查尽量避免使用，无需添加抗凝剂，标本量为3～5 mL。而浆膜腔积液标本采集时，行细胞计数和分类计数应使用紫盖的乙二胺四乙酸抗凝管，标本量为5～8 mL；行化学和免疫学检验可不抗凝（也可用于凝固性检查）或使用绿盖的肝素抗凝管，标本量为8～10 mL；行微生物检查可不抗凝或用黄盖的含多聚茴香脑磺酸钠试管，标本量为8～10 mL，而抗酸杆菌培养标本量为15～50 mL；行细胞病理学检查可不抗凝或使用绿盖的肝素或紫盖的乙二胺四乙酸抗凝管，标本量为5～50 mL[1]。

1.1.4 采集多管标本的顺序 目前脑脊液检验多管标本采集的顺序国际上比较统一的观点是：第1管用于化学和免疫学检查，第2管用于微生物学检查（涂片、培养、核酸分子检查），第3管用于细胞计数和分类计数，第4管用于其他检查（细胞病理学检查等）。因第1管易受皮肤细菌污染而不再用于微生物学检查[2]。

1.2 标本转运和处理

1.2.1 标本转运要求 标本应在室温（18～25 ℃）条件下尽快（尽量在1 h内）送检。如粪便标本采集后宜1 h内送检，温度较低的冬季可延长至2 h；但查原虫滋养体时须排便后立即送检，冬季还需采取保温措施，检查阴道毛滴虫标本也需采取类似措施。

1.2.2 标本储存要求 脑脊液、浆膜腔积液和关节腔积液若行细胞计数和分类计数宜1 h内完成，若无法及时检测，细胞分类计数需在采集后4 h内完成涂片和染色，并在2～8 ℃条件下保存，48 h内完成检测，若4 h内不能完成涂片和染色，按国际血液学标准化委员会要求，在报告中应注明“细胞分类计数结果可能不可靠”[3]。用于蛋白质和核酸分析的标本可冷冻储存。精液检验要求在标本采集后1 h内评估精液液化状况和外观，测量精液体积，检查精子活力、精子存活率，制备精液涂片用于精子形态评估，进行精子计数和精液离心处理用于化学检查；采集后3 h内进行微生物学检查；采集后4 h内完成精子形态和精液化学检查；精子存活率检查建议在30 min内完成，尽量不超过1 h[4]。微生物学检查标本不可冷藏，如冷藏的阴道分泌物标本不利于淋病奈瑟菌复苏，但冷藏可用于沙眼衣原体或病毒（单纯疱疹病毒）检查。

2 理学检查

2.1 基本规范

在同一个临床实验室内，须规范脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液、粪便等理学检查指标的描述，统一报告的格式。

2.2 观察指标

脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液主要观察颜色、透明度、凝固性等，关节腔积液还需检测黏稠度。粪便除观察颜色外，还需观察硬度/形状、黏液等。精液除观察颜色、透明度外，还需检测体积、液化时间和黏稠度等。

3 化学和免疫学检查

3.1 基本规范

当用体液标本做化学和免疫学检查时，需同时检测血清标本中相应物质含量，并进行比值计算，如脑脊液/血清白蛋白比值增大支持细菌性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎、结核性脑膜炎、软脑膜转移性肿瘤的诊断[5]。在开展体液检验项目检测时要注意不同检测方法的灵敏度和特异性，尤其是当体液中大多数物质含量较血清浓度低或可报告范围要求更宽广时，应选择适宜的检测方法。如粪便隐血试验有化学法、免疫法，2类方法灵敏度和特异性存在差异，在选用方法前应明确其分析性能，当一种方法检测结果与临床表现不符时，应采用另一种方法进行验证。

3.2 常规检验项目

除常规检测葡萄糖、总蛋白、乳酸外，脑脊液检验还包括氯化物、酶、蛋白电泳、免疫球蛋白和髓鞘碱性蛋白等；浆膜腔积液检验还包括酶、免疫球蛋白和肿瘤标志物等；关节腔积液检验还包括尿酸、脂类、自身抗体和类风湿因子等。上述项目大多采用定量方法进行检测，但脑脊液蛋白定性的潘氏试验、浆膜腔积液蛋白定性的李凡他试验等操作过程繁琐、主观因素较多，且检测性能较差，国际上均已不再使用[2]。

精液可选择酸性磷酸酶、果糖、锌测定来反映前列腺、精囊腺、尿道球腺等附属性腺的功能；选择中性α-葡糖苷酶测定来反映附睾的功能；选择乳酸脱氢酶同工酶Ⅹ和精子顶体精氨酸酰胺酶测定来反映精子的功能[4]。

4 细胞学检查

4.1 手工法

4.1.1 细胞计数 脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液的细胞总数、红细胞计数、有核细胞计数宜用血细胞定量计数板法计数。外观正常的标本无需稀释；而浑浊和血性标本需稀释，如细胞总数、红细胞计数可用等渗0.9%氯化钠溶液稀释。建议有核细胞计数、红细胞计数在同一计数池内完成，否则需取2个计数池计数结果均值，以×106/L为单位报告[1]。

4.1.2 有核细胞分类计数 脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液有核细胞分类计数宜采用细胞离心法制片，待干后采用Romanovsky类染液（Wright、Wright-Giemsa、Diff-Quik等）染色并镜检[1]。分类计数结果以百分比形式报告。当细胞类型无法确定时，可将其归入“非典型细胞”，并在报告中加以描述。若发现可疑形态细胞，应及时告知临床进行细胞病理学检查。

对精子进行形态学分析时，需制备精液涂片，并做巴氏染色、Shorr染色或Diff-Quik染色，低倍镜下至少计数200个精子，计算并报告正常和异常形态精子百分比。在评估生精功能时，需在油镜下观察精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞及精子的比例。

4.1.3 湿片检查粪便标本 制作厚薄适宜的涂片，按一定方式（“城垛”式）查找标本中细胞、真菌、细菌、寄生虫、虫卵和原虫等成分。如遇可疑寄生虫虫卵或罕见虫卵时应请上级检验人员复核或技术水平更高的实验室进行确认。结果以“（最低数～最高数）/高倍镜”形式报告，寄生虫及虫卵、原虫和真菌等以“有/无、找到/未找到或出现/未出现”形式报告[6]。

精液标本中精子活力检查可在光学显微镜高倍镜下对湿片进行检查，至少计数200个精子，计算前向运动、非前向运动和不活动精子百分比；精子存活率检查可用染色法（伊红、伊红-苯胺黑染色）或低渗膨胀试验计算活精子百分比[4]。

4.2 仪器法

4.2.1 脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液等自动化检验 目前，大多血液分析仪已具备体液细胞检测功能，能对体液细胞进行自动化分析，包括细胞计数和初步分类。在仪器用于临床标本检测前，首先应对仪器进行性能验证，包括本底计数、精密度、灵敏度、分析特异性、正确度和可报告范围等，尤其需关注体液中有核细胞、红细胞计数检测下限；其次是建立复检规则，分类结果异常、细胞分类散点图异常、计数结果低于检测下限和与大细胞相关参数升高等，应采用镜检法和涂片染色法复检[5]；最后是开展室内质控，参加室间质评，并定期对多个检测系统结果进行比对。

4.2.2 其他标本自动化检验 粪便的自动分析仪在用于标本检测临床前，应对精密度、可比性和有形成分检出率等性能进行验证。精液的自动分析仪在用于临床标本检测前，应核查重复性和可靠性等性能指标，尤其是检测高浓度（＞50×109/L）精子时，应对标本进行适当稀释[4]。

5 总结

综上所述，在脑脊液、浆膜腔积液、关节腔积液、粪便、精液和阴道分泌物标本检查中，临床医师和检验人员应更新观念，了解先进检测技术；注意规范从标本采集到结果报告过程中的各类操作；检测人员应与临床充分沟通、密切合作，保证体液实验室检测结果能更好地服务于临床。