妊娠高血压患者免疫反应的表现及其机制

(河北港口集团有限公司港口医院检验科，河北 秦皇岛 066000)

目前，尚无单一检测指标以预测妊娠高血压(Gestational hypertension，GH)得到发生和发展，而高血压是诊断GH的主要标志[1]。GH患者主要表现为水肿、体重突增、视力模糊和血压升高等，但有些GH患者表现为无症状，因此难以发现和诊治，危及患者及其胎儿健康[2-3]。研究表明，肥胖、年龄及糖尿病病史均为GH的危险因素[4]。因此，本文将对GH患者体内白细胞抗原和T淋巴细胞的变化及其对免疫反应进行分析，旨在为临床诊断和治疗GH提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至次年7月于本院分娩的42例GH患者作为观察组，纳入标准：符合GH诊断标准[5]，择期进行分娩者，入院前2周无服用任何药物者，同意参与本研究；排除标准：患其他妊娠合并症，免疫功能和/或血液系统障碍(疾病)者，严重其他脏器疾病者，肿瘤患者。参照观察组方式，选取同期分娩的50例正常患者作为对照组，两组年龄、孕周、体重等一般资料差异不显著(P>0.05)具有可比性，见表2。

1.2 样品收集

血样：于清晨(8∶30前)收取全部患者空腹静脉血，移入抗凝管后静置30 min，低温离心分离血浆，获取待测液。

组织样：分娩后，在无菌状态下取长宽高均为0.5 cm的胎盘绒毛组织块5～10块，用生理盐水洗净后摘取血管和膜组织，得到待测样。

1.3 指标检测

1.3.1 RT-PCR检测HLA mRNA 使用RT-PCR检测滋养细胞中人类白细胞抗原基因座G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)和人类白细胞抗原基因座C(human leukocyte antigen-C，HLA-C) mRNA表达。按照试剂盒(Trizol RNA抽提试剂盒，R&D Systems，美国)步骤抽提组织样总RNA，以NCBI的GenBank中HLA-G、HLA-C和β-肌动蛋白(内参)基因序列为参照合成引物(见表1)，cDNA以RNA链为模板逆转录获得。用20 μL体系进行RT-PCR，其中cDNA模板2 μL、EX Taq酶0.2 μL、上下游引物各0.5 μL、dNTP 0.4 μL、10×buffer 2 μL，加无菌水补齐至20 μL。以40个循环进行PCR，反应完成后，应用软件计算相应荧光反应曲线，结果以循环数阈值(Ct值)表示[6]。

表1 HLA-G、HLA-C和β-肌动蛋白引物

1.3.2 酶联免疫检测 使用ELISA(吸附)试剂盒(R&D Systems，美国)检测患者血清中白细胞抗原水平。

1.3.3 流式细胞仪术检测 使用流式细胞仪(CytoFLEX FCM，Beckman，美国)检测T淋巴细胞CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比。

1.4 数据处理

用SPSS17.0软件进行统计分析，计量数据使用(±s)表示，组间两两比较采用SNK法或t检验；计数资料使用百分数(%)表示，用χ2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者临床资料

两组患者年龄、孕周和体重无显著差异(P>0.05)，舒张压和尿蛋白差异明显(P<0.05)，GH组存在血压增高，尿蛋白体征。见表2。

表2 两组患者一般资料

2.2 两组白细胞抗原mRNA表达对比

与对照组相比，观察组HLA-G和HLA-C mRNA表达量明显降低(P<0.05)，说明GH患者免疫耐受降低(见表3)。

表3 两组白细胞抗原mRNA表达对比

2.3 两组血清白细胞抗原浓度对比

与对照组相比，观察组血清组织白细胞抗原sHLA-G和sHLA-C浓度明显降低,浓度具体，说明观察组免疫耐受降低(P<0.05)(见表4)。

表4 两组血清白细胞抗原浓度对比

2.4 两组T淋巴细胞水平对比

与对照组比较，观察组T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+水平均明显增高，说明 GH患者机体内产生了不必要的免疫应答，见表4。

表5 两组T淋巴细胞水平比较

3 讨 论

GH主要表现为母体和胎儿综合症，包括母体高血压、蛋白尿并伴体内脏器损伤；胎儿会因此生长受限，严重者会因宫内窘迫而引发早产，甚至死亡。目前认为，这种疾病是遗传与免疫相互关联和作用的结果，且互为因果[7-8]。在妊娠期间，胚胎作为母体的异己，理应引起母体免疫反应；但母体免疫反应又易导致流产，因此在妊娠期间母体存在一定程度的免疫耐受[9]。本研究对比正常妊娠患者和GH妊娠患者间白细胞抗原水平发现，GH患者白细胞抗原HLA-G和HLA-C不论是mRNA表达水平还是血清水平都明显低于正常妊娠组。HLA是一种基因复合物，主要编码人类组织相溶复合物蛋白以负责细胞表面蛋白对体内免疫系统的调节[10]。其中HLA-A和HLA-C都是MHC I类分子，它们绑定来自病原体的抗原，将其暴露于细胞表面呈递给T细胞识别[11]。HLAs还能绑定自然杀伤(NK)细胞使其失效，故当体内HLAs水平下降时，在病毒感染或异常细胞介导下，促发NK细胞进行程序化细胞死亡[12]。此外，妊娠其前列腺素分泌也能影响淋巴细胞白细胞介素-2产生，达到抑制自然杀伤(NK)细胞的目的[13]。故HLAs水平降低可能导致免疫耐受降低，从而产生不必要的免疫应答。

另一方面，本研究发现观察组患者T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+水平明显更高。这一结果验证了我们上述推测，机体内产生了不必要的免疫应答。在功能正常的免疫系统中，只允许不结合自身肽的T细胞离开胸腺，因此，T细胞与外源或异常肽结合并启动细胞凋亡或程序性细胞死亡，完成对病原体的防御[14]。而GH患者HLAs水平下降，T淋巴细胞上受体无法与HLAs及其呈递的肽结合并相互作用，致使T淋巴细胞异常活跃，因此高T淋巴细胞水平表征了机体内高免疫反应[15]。换而言之，高T淋巴细胞水平反应了GH患者机体内产生了不必要的免疫应答。

总之，妊娠高血压患者体内白细胞抗原降低，T淋巴细胞增高，可能是导致妊娠高血压患者免疫耐受降低的原因。