母婴ABO血型不合的新生儿HDN检测*

李丽群

泉州市第一医院输血科，福建 泉州 362000

新生儿溶血病(HDN)为新生儿时期的特有疾病，属于溶血性疾病，发病原因是母婴血型不合，之后母体对应血型抗体经过胎盘传输给胎儿，会发生红细胞被严重破坏的情况，导致新生儿患有溶血病，其中ABO血型不合发生率高；临床症状主要为黄疸、手足部徐动、贫血、水肿、腹水等，部分患儿若病情严重，易出现智力与运动障碍，严重的情况下会致使新生儿死亡，该疾病的临床治愈难度较大，预后效果不佳，所以需要孕产妇与其配偶在孕期及时进行血型系统(ABO与Rh等)检查，预防该疾病，如果新生儿已经检出溶血病，则需要积极配合医生进行退黄、并发症预防的治疗，以期取得理想的预后结果[1]。研究现阶段新生儿HDN的临床检查情况，发现血清学检查效果，通过多项试验检测阳性反应，可提示新生儿是否患有HDN，以此为后续医生制定行之有效的治疗方案提供依据，有效减轻该疾病给患儿与家长带来的诸多痛苦与压力。基于此本研究选取120例疑似母婴ABO血型不合新生儿HDN患者，进行了实验室血清学检测，依据三项试验阳性结果探究了检测新生儿HDN时血液标本采样的最佳时机与疾病阳性确诊的重要标准。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院在2018年1月—2019年1月接收的新生儿HDN患儿120例作为研究对象来研究，这些患儿均于我院娩出，出生时间不超过10天，经过临床医生初步症状(黄疸)检查确定为母婴ABO血型不合的新生儿HDN疑似患儿，为了进一步明确病情，我院对120例疑似新生儿HDN患儿进行了实验室血清试验检测；患儿中男多于女，人数分别为70例、50例。

1.2方法 采集120例患儿抗凝血各2ml，母婴血型分别通过产妇问病史记录、微柱凝胶卡检测获得，其中患儿直接抗人球蛋白试验也通过黛安娜新生儿HDN微柱凝胶卡检测得出，游离试验、抗体释放试验通过酸放散试剂得出检测结果。准备ABO各型血液标准红细胞、抗A或B标准血清、抗人球蛋白卡(戴安娜公司生产，DGGel Coombs卡)、离心机、酸放散试剂(包括放散液A、放散液B和中和液)、生理盐水、孵育箱(恒温37℃)等。①直接抗人球蛋白试验：通过黛安娜新生儿HDN微柱凝胶卡上机检测可得出。 ②游离抗体试验：取ABO各型血液标准红细胞各50μl依次加入抗人球蛋白卡片，将患儿血液标本离心，取上清液，分别取50μl加入放有ABO各型血液标准红细胞的卡片中，放置孵育箱孵育15 min，离心，观察结果。 ③抗体释放试验：将患儿血液标本用生理盐水洗涤，次数为3次，取500μl红细胞压积于试管中，同时加入500μl放散混合液(A400μl+B100μl)，混匀，并离心，取离心后的上清液400μl、放入试管中，于试管中加入中和液3滴，再次离心后取上清液待用，取ABO各型血液标准红细胞各50μl，依次加入抗人球蛋白卡片，依次加入再次离心后的上清液50μl，放孵育箱孵育15分钟，离心，观察结果。

1.3观察指标 ①试验的阳性判断标准,阳性：红细胞出现凝聚且位于凝胶柱的中上层，与相应的抗体发生凝集；阴性：红细胞出现凝聚且位于柱的底层，未与相应的抗体发生凝集。②与③试验检测阳性标准为检出了能够与患儿红细胞发生反应的抗体。患儿血液血清经过实验室溶血三项试验检测后，均显示为阳性，提示患儿患有HDN(阳性)，单一进行抗体释放试验，结果呈阳性判断患儿HDN阳性，其他两项试验单一检测阳性提示患儿疑似HDN阳性，这两项试验检测阳性结果分别联合③试验检出阳性结果与临床症状后可判断患儿疾病阳性。

1.4统计学方法 使用SPSS.15软件统计学分析数据，计数资料[n(%)]表示、χ2检验，P≤0.05为数据差异有统计学意义。

2 结 果

采样时机：120例疑似新生儿HDN的患儿检查后，可知103例疑似患儿最终确诊，检出率为85.83%，患儿血液标本采集时间设计为2个时间段，即刚出生至出生2 d、3～6 d，各个时间段标本采集例数各为60例，通过血清三项试验阳性检测后，这2个时间段检出新生儿HDN患儿例数合计103例，分别为97例(94.17%)、6例(5.83%)，检出患儿例数进行不同时间段的数据比较后P<0.05，有统计学意义，其中新生儿出生2天内采集样本检出疾病率高，6 d左右时检出疾病人数少，说明新生儿HDN检出率与疑似患儿出生后血液标本采集时间呈正相关关系，标本采集时间愈早，血清三项试验检测后的阳性率愈高；血清检测结果：103例ABO血型不合新生儿HDN患儿可分为母O、O、A、B、B与婴A、B、AB、AB、A的情况，患儿例数分别有75例、25例、1例、1例、1例，①、②、③项试验单一检出阳性患儿例数分别为37例(35.92%)、62例(60.19%)、101例(98.06%)，其中在①试验中仅检出母婴O-A、O-B血型不合的新生儿HDN病例，②试验中未检出B-A血型不合疾病患儿，③试验中5类ABO血型不合疾病患儿均检出，以上检出患儿例数比较后存在统计学意义的差异P<0.05；血清阳性检测结果(数据见表一)：出生后～2 d采集血样检测新生儿HDN疾病的阳性率高，随着时间的增加，阳性率下降， 总体来看②+③试验检测阳性率高于其他试验项单一检测或组合方式检出率，如果条件允许尽量选择三项或两项试验联合方式检测阳性率，其中③为判断患儿患病的主要依据，为重点测试项目。

表1 患儿新生儿HDN疾病检测阳性率分析

3 讨 论

母婴ABO血型不合的新生儿HDN疾病的常见类型为ABO血型系统，一般在新生儿早期或者在胎儿阶段发生，患病患儿大多数情况下与身体健康的新生儿没有什么区别，但是娩出后～48 h左右时，会出现黄疸症状，之后随着新生儿日龄的增加，机体皮肤黄染情况会愈加严重，此时患儿会出现贫血、核黄疸等症状，甚至死亡，所以新生儿该疾病的早发现与早治疗非常重要，本研究便对新生儿HDN的临床诊断情况进行了详细探究，重点分析了血清学检验对于疾病诊断确诊的价值[2-3]。血清学三项检验为目前检查诊断新生儿HDN的有效方法，通过直接抗球蛋白、游离抗体、抗体释放试验可以将新生儿的患病情况较为精确的检查出，而且检测安全性高，在新生儿的该种免疫疾病确诊中可以多进行应用与推广[4]。本研究期间选择的120例疑似新生儿HDN均接受了血清三项试验检测，其中在血样采集方面，分为了2个时间进行采样，结合研究结果发现血液标本采集时间与试验检测结果存在关联，尤其是在新生儿刚娩出时，不超过48 h检测，可以第一时间检出疾病，超过该时间采血检测，虽然也能检出新生儿的疾病，但是检出率会逐渐降低，严重影响新生儿疾病的有效治疗与康复，提示新生儿HDN疾病诊断时应在出生后尽快进行血清学检测，以便医生可以抓住疾病治疗的最佳时机控制疾病；同时在检测期间，要注意三项试验尽量都要检测，其中抗体释放试验的检测结果具有较高的疾病确诊参考价值，需要医生对该阳性结果进行准确分析，如果为其他两项试验单一进行，则需要结合第三项试验结果及疑似患儿临床病症表现，综合多方资料数据，得出疾病的最终确诊结果，研究期间的部分数据进行比较后，存在着较大差异与统计学意义P<0.05。

综上所述，临床开展母婴ABO血型不合新生儿HDN疾病检测期间，需要对血清三项试验涉及的内容加强研究，之后参考新生儿娩出后的情况，及早采集血样进行试验检测，促使疾病疑似患儿能够尽快确诊治疗，早日康复出院[5-6]。