老年乳腺癌组织IL-15与IL-5Ra表达的相关性及CD8+细胞浸润程度

刘庆玲

(淄博市妇幼保健院检验中心，山东 淄博 255000)

白细胞介素(IL)-15是1994年被发现的一种由多种细胞产生的细胞因子，研究显示，IL-15与IL-2生物学作用极为相似〔〕。IL-15靶细胞分布和细胞来源分布较IL-2广，但IL-2已被证实在临床肿瘤免疫上具有良好的治疗效果〔1,2〕。据推测，IL-15也应在免疫肿瘤中具有良好的治疗效果。目前关于IL-15与乳腺癌、肺癌的研究多选用体外及裸鼠试验，IL-15在人体乳腺癌和肺癌中的治疗作用结果尚不得知〔3〕。本研究拟分析老年乳腺癌与肺癌组织中IL-15的表达及与临床病理因素的相关性。

1 材料与方法

1.1临床资料 选取2015年3月至2018年3月经淄博市妇幼保健院确诊为肺癌与乳腺癌的患者80例。乳腺癌患者51例，男28例，女23例，年龄61～87岁，平均(64.8±5.6)岁；临床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期22例，Ⅲ15例，Ⅳ7例；病理类型：腺癌6例，浸润性导管癌23例，浸润性小叶癌18例，髓样癌4例。肺癌患者29例，年龄62～85岁，平均(65.3±5.2)岁；男18例，女11例；临床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期10例，Ⅲ8例；病理类型：腺癌11例，鳞癌15例，小细胞肺癌2例，大细胞肺癌1例。80例患者经病理证实术前均未接受放疗或化疗。

1.2研究试剂与切片制作 兔抗人IL-15Ra多克隆抗体与小鼠抗人IL-15单克隆抗体均购自美国Molecular Innovations公司。小鼠抗人单抗克隆体CD8、小鼠抗人〔自然杀伤(NK)细胞表面标志〕CD57及二氨基联苯胺(DAB)与SP试剂盒均购自上海佑隆生物科技有限公司。肿瘤组织标本采用40 g/L多聚甲醛进行固定，然后进行梯度酒精兑水、浸蜡、透明、包埋制成蜡块4 cm，连续切片。

1.3免疫组化染色 选取5张切片，4张切片分别用于IL-15、IL-15Ra、CD8、CD57的免疫组化学染色，抗人IL-15、IL-15Ra抗体稀释为1∶20，CD8与CD57抗体稀释为1∶40，另一张切片采用磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗孵育进行阴性对照。常规免疫组化染色，DAB显色采用光镜观察。

1.4观察结果 阳性着色显示棕黄色，IL-15、IL-15Ra阳性着色采用NikunE800光学显微镜图像分析系统测定阳性染色密度(PSD)；CD8与CD57通过计满每张切片7 mm×7 mm面积内所有阳性细胞个数，并同时计算出每平方毫米阳性细胞个数，并作为阳性细胞密度(PCD)。

1.5统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件进行t检验、单因素方差分析和Pearson相关分析。

2 结 果

2.1乳腺癌与肺癌组织中IL-15及IL-15Ra免疫组化染色 少量浸润淋巴细胞与肿瘤细胞的胞质、胞膜有着色，余下无着色。乳腺癌组织中IL-15及IL-15Ra PSD分别为779.1±305.1和982.8±375.9；肺癌组织分别为1 179.9±658.8和1 248.7±603.1。见图1。

图1 乳腺癌与肺癌组织中IL-15及IL-15Ra免疫组化染色(DAB，×400)

2.2乳腺癌与肺癌组织中CD8与CD57的染色 胞膜阳性着色细胞仅在浸润淋巴细胞中显示，呈片状聚集分布。乳腺癌与肺癌在临床分期早期中无淋巴结转移，CD8+与NK细胞浸润较多；临床分期晚期显示，或有患者发生淋巴结转移，CD8+与NK细胞浸润较少。乳腺癌组织中NK细胞及CD8+PCD为(12.3±3.8)和(13.7±3.5)个/mm2；肺癌组织分别为(12.7±7.0)和(25.2±4.7)个/mm2。见图2。

图2 乳腺癌与肺癌组织中CD8与CD57染色(DAB,×400)

2.3IL-15与肿瘤临床病理类型、临床分期的关系 IL-15在不同病理类型乳腺癌与肺癌组织中表达差异无统计学意义(F=4.387、5.270，P=0.210、0.106)。乳腺癌与肺癌伴随着临床分期的增加，肿瘤组织中IL-15表达显著降低(肺癌：Ⅰ期PSD 1 425.9±660.9，Ⅱ期1 148.1±593.1，Ⅲ期518.7±324.0；乳腺癌：Ⅰ期PSD 1 314.3±152.8，Ⅱ期863.6±146.2，Ⅲ期532.4±139.3，Ⅳ期507.2±183.4)。

2.4IL-15与肺癌、乳腺癌肿瘤直径的关系 乳腺癌与肺癌病例中，肿瘤直径<3 cm组IL-15表达(PSD：1 938.6±285.4、1 899.2±722.7)显著高于肿瘤直径≥3 cm组(1 276.9±264.7、1 193.6±519.7，P<0.05)。

2.5IL-15与肺癌、乳腺癌肿瘤淋巴结转移的关系 乳腺癌及肺癌患者无淋巴结转移组IL-15表达(PSD：1 898.8±6 265.7、1 855.1±717.1)显著高于有淋巴结转移组(1 316.7±290.7、1 237.7±512.2，P<0.05)。

2.6IL-15与浸润在肿瘤组织中CD8+、NK细胞的关系 乳腺癌与肺癌组织中IL-15的表达与CD8+(r=0.61、0.39，P<0.05)、NK细胞(r=0.59、0.76，P<0.05)呈正相关。IL-15Ra的表达与肿瘤直径大小、临床分期及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。

3 讨 论

本实验结果显示，乳腺癌与肺癌组织中IL-5表达高的患者均处于肿瘤分期早期，肿瘤体积较小，伴有少量的淋巴结转移；IL-15表达较低的患者均处于肿瘤分期晚期，肿瘤体积明显较大，伴有淋巴结转移，研究表明，IL-15的表达显示有某种抑制乳腺癌与肺癌的作用〔4〕。人体免疫抗肿瘤细胞中NK、CD8+属于主体细胞，临床研究显示，IL-15可有效促进CD8+、NK细胞的繁殖，IL-15还可对CD8+细胞进行趋化，还包括CD8+CTL细胞特异的趋化〔5〕。相关资料显示，IL-15在肿瘤微环境下可有效调节Th1与Th2细胞因子的分泌〔6,7〕。有学者指出，在表皮T淋巴细胞瘤与急性T淋巴细胞白血病中，IL-15的表达与肿瘤细胞中的IL-Ra有效结合，从而促进肿瘤细胞的繁殖〔8,9〕。

研究显示，乳腺癌与肺癌切片中，肿瘤细胞组织中IL-15存在受体表达，但综合表现显示，IL-15对肺癌与乳腺癌具有遏制作用，据分析发生遏制作用可能是在IL-15的作用下，造成NK、CD8+细胞繁殖影响肿瘤组织，从而造成大量浸润和激活，并起到了杀伤肿瘤细胞的作用，超过了IL-15抗肿瘤抗体的繁殖，从而造成肿瘤细胞分裂〔10,11〕。研究显示，对没有IL-15受体的表达不分泌IL-15的肿瘤组织来说，如给予IL-15会促进NK、CD8+细胞繁殖分裂的作用，增加IL-15在肿瘤组织中浸润的数量和激活，并有效促进NK、CD8+细胞对肿瘤细胞的杀伤〔12,13〕。对无受体表达的IL-15肿瘤组织通过外界因素给予IL-15，也可达到抗肿瘤的效果，通过外部因素给予IL-15，可与肿瘤组织中IL-15受体表达相结合，从而促进肿瘤生长，也可有效激活NK、CD8+细胞的繁殖对肿瘤细胞起到杀伤作用〔14,15〕。针对肿瘤组织的研究，应扩大样本量，合理应用IL-15对抗肿瘤治疗具有重要意义。