甲状腺癌组织中lncRNA CCHE1水平及其临床意义

许春晖

(杭州市余杭区第二人民医院普外科，浙江 杭州 311121)

甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤，甲状腺癌的发病率呈上升趋势，其主要病理类型为甲状腺乳头状癌，最主要的治疗方式为甲状腺癌根治术，多数患者术后总体生存率比较好，但部分术后患者预后比较差〔1，2〕。甲状腺癌起病隐匿，早期诊断比较困难，主要依靠症状、体征、超声、CT、穿刺细胞学活检等方法进行鉴别和诊断，穿刺细胞学活检是甲状腺癌早期诊断的有效方法，但有依从性差、无法确诊、存在假阴性率等问题，使其难以在甲状腺癌筛查中普及，因此研究甲状腺癌早期诊断、预后评估的生物标志物具有重要意义〔3，4〕。CCHE1为一种新近鉴定的长链非编码(lnc)RNA，在宫颈癌等多种癌组织中表达异常〔5，6〕，宫颈癌组织中CCHE1高水平表达和宫颈癌的FIGO分期、肿瘤大小、淋巴结转移和人乳头瘤病毒感染关系密切，低CCHE1表达患者的5年生存率高于高表达CCHE1患者。CCHE1在甲状腺癌组织中的表达及临床意义尚不十分清楚，本文对甲状腺癌组织中CCHE1表达水平进行研究，探讨其在甲状腺癌诊断和预后评价中的价值。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择杭州市余杭区第二人民医院普外科2010年1月至2013年12月行甲状腺癌根治术的80例甲状腺癌患者的甲状腺癌组织和癌旁组织(距离甲状腺癌组织5 cm)。年龄(54.36±6.57)岁，男25例，女55例，乳头状癌54例，滤泡状癌14例，髓样癌12例，肿瘤最大直径≥1.0 cm者57例，肿瘤最大直径<1.0 cm者23例，有包膜浸润者36例，无包膜浸润者44例，TNM分期Ⅰ期14例，Ⅱ期24例，Ⅲ期39例，Ⅳ期3例，有淋巴结转移41例，无淋巴结转移39例。

纳入标准：病理确诊为甲状腺癌，术前未进行放化疗等其他治疗，首次手术，签署知情同意书，经伦理委员会批准。排除标准：其他恶性肿瘤患者，患心、肝、肾等其他重要脏器疾病者，甲状腺功能异常者，肺转移或远处转移者，不配合研究者，未进行正规随访或失访者。

1.2甲状腺癌组织和癌旁组织中CCHE1水平测定 取患者甲状腺癌组织和癌旁组织，采用Trizol提取总RNA，将组织RNA反转录为cDNA，以甲状腺癌组织和癌旁组织cDNA为模板，采用实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)测定甲状腺癌组织和癌旁组织中CCHE1水平。CCHE1上游引物序列为：5′-AAGGTCCCAGGATACTCGC-3′，下游引物序列为：5′-GTGTCGTGGACTGGCAAAAT-3′。甲状腺癌组织和癌旁组织中CCHE1相对表达量以2-ΔΔCt表示。

1.3随访 所有患者通过电话随访和门诊随访，术后1个月时随访1次，第1年内3个月随访1次，第2年内6个月随访1次，以后每年随访1次，随访至2018年5月结束，随访率100%，记录随访资料。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件进行t检验、方差分析，CCHE1对甲状腺癌的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积分析，5年总生存期采用Kaplan-Meier生存曲线分析。

2 结 果

2.1甲状腺癌组织中CCHE1水平 甲状腺癌组织中CCHE1水平(1.83±0.13)显著高于癌旁组织(1.00±0.07，t=50.280，P=0.000)。

2.2CCHE1对甲状腺癌的诊断价值 CCHE1诊断甲状腺癌的ROC曲线下面积为0.821(95%CI：0.818～0.824，P=0.000)，诊断阈值1.68，诊断灵敏度为71.43%，特异度为78.14%。见图1。

图1 CCHE1诊断甲状腺癌的ROC曲线下面积

2.3CCHE1与甲状腺癌临床病理特征的关系 甲状腺癌组织中CCHE1表达量与甲状腺癌患者的年龄、性别、病理分型、肿瘤最大直径、包膜浸润无关(P>0.05)，与TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者CCHE1表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移者。见表1。

表1 CCHE1与甲状腺癌临床病理特征的关系

2.4CCHE1与甲状腺癌预后的关系 术后随访5年，80例患者死亡38例，存活42例，其中31例死于甲状腺癌本身，7例死于远处转移。以CCHE1≥1.68为高表达，<1.68为低表达。Kaplan-Meier生存分析结果显示，CCHE1低表达患者5年生存率为67.35%，明显高于高表达患者(31.24%，P<0.05)。见图2。

图2 不同CCHE1水平甲状腺癌患者生存曲线

3 讨 论

大部分甲状腺癌患者经手术治疗及辅助治疗疗效显著，预后良好，但部分甲状腺癌呈多灶型，出现包膜侵犯、远处转移、淋巴结转移、TNM分期高等高侵袭性特点，容易复发，对甲状腺癌患者的生命健康造成严重危害〔7〕。早期手术是提高甲状腺癌预后的重要手段，因此早期诊断甲状腺癌对改善患者预后具有重要意义〔8〕。超声和细胞活检术是鉴别和诊断甲状腺癌的主要方法，超声检查受超声医生经验和个人主观因素影响比较大；细胞活检术虽然灵敏度和特异度比较高，但其取材不当可影响结果，且患者依从性比较差，因此寻找灵敏度和特异度比较高的生物标志物对甲状腺癌的早期诊断、靶向治疗、预后评估具有重要意义〔9，10〕。

lncRNA为一种不参与蛋白编码的RNA分子，长度大于200个核苷酸〔11〕。lncRNA虽不参与蛋白编码，在可在转录、转录后以及翻译等水平调控基因表达〔12〕。lncRNA参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程，在恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用〔13，14〕。lncRNA在甲状腺癌的发生发展中也扮演重要角色，可用于甲状腺癌早期诊断、预后评估及治疗靶点的寻找〔15～17〕。CCHE1为新近鉴定的lncRNA，定位在人类10号染色体基因，最初在宫颈癌组织中被发现呈高表达而命名。后来研究发现CCHE1在多种恶性肿瘤发生发展中具有重要价值：CCHE1在宫颈癌组织中呈高表达，和宫颈癌肿瘤大小、临床分期和生存率关系密切，CCHE1可通过增加增殖细胞核抗原的表达在宫颈癌细胞增殖中发挥重要作用，可作为宫颈癌的潜在治疗靶点和预后生物标志物〔18〕；在非小细胞肺癌组织中CCHE1呈高表达，CCHE1表达水平和肿瘤大小及患者存活时间关系密切，CCHE1可通过ERK/MAPK信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭和转移〔19〕；上调胃癌细胞中CCHE1可促进胃癌细胞增殖、抑制胃癌细胞凋亡〔20〕。

本研究表明CCHE1可能参与甲状腺癌的发生发展过程，在甲状腺癌的诊断、预后评估中具有重要价值，有望成为甲状腺癌早期诊断、预后评估的潜在标志物。