热量限制在卵巢功能保护中的作用及其机制

叶智裕，秦鉴，陈洪达

中山大学附属第七医院，广东 深圳 518000

在卵巢功能保护方法中，热量限制为延缓卵巢及机体衰老的重要方式之一，但具体作用机制目前鲜有报道。基于此，本次选42只8周健康雌性C57BL/6小鼠分组进行自由饮食及热量限制研究，并探究热量限制对小鼠抗氧化应激能力对卵巢影响。

1 材料与方法

1.1 一般材料 选2018年6月-2019年8月期间，42只8周健康雌性C57BL/6小鼠，随机分组，形成常规组（21只，饮食自由）、研究组（21只，热量限制），饲养2周后开始用于模型构建。

1.2 方法 常规组：饲料成分：纤维5%、脂肪4%、蛋白18%，每天每只饲料为3.8g，不限制饮水。

研究组：按照常规组75%进行饲养，即每只每天饲料为2.8g，不限制饮水。饲养8周后完成模型构建。

模型构建完成后，每组随机取7只小鼠，腹腔麻醉注射处死后，眼球摘除采血；分离双侧卵巢，两侧卵巢分别以-80℃干冻保存、4%多聚甲醛固定。

1.3 观察指标 对两组小鼠雌二醇、孕酮、卵泡数量、抗过氧化应激反应相关指标进行比较。

雌二醇、孕酮检测方式采用ELISA试剂盒检测；卵泡数量检测方式：取以4%多聚甲醛固定的卵巢以常规石蜡包埋，连续切片（厚度为4μm），每4片后取出1片行HE染色（苏木素-伊红染色法），请2名阅片者共同阅片，取平均数，卵泡术计数标准为在光镜下卵母细胞核。抗氧化应激反应相关指标检测指标包括SIRT（基因sirtuin）3、CAT（过氧化氢酶）mRNA，检测方式为实施荧光定量PCR技术。

1.4 统计学方法 选用SPSS24.0计算，计量资料（技术水平等）用（Mean±SD）表示，t检验，计数资料（卵泡数量等）用（%）表示，χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组小鼠卵泡数量 研究组总卵泡764个，常规组401个，始基卵泡占比分别为38.22%（292/764）、29.43%（118/401），闭锁卵泡占比分别为5.37%（41/765）、16.71%（67/401），差异有统计学意义（χ2=8.916、40.71，P=0.003、0.000＜0.05）。

2.2 两组小鼠血清雌二醇、孕酮水平 研究组雌二醇水平较常规组高，孕酮水平较常规地低（P＜0.05），见表1。

表1 两组小鼠血清雌二醇、孕酮水平（Mean±SD）

2.3 两组小鼠抗氧化应激相关指标 常规组SIRT3、CAT表达水平为1.00，研究组SIRT3表达水平1.38、CATmRNA表达水平1.55，研究组两者表达水平均较常规组上调，差异有统计学意义，（t=4.087、5.916，P=0.002、0.000＜0.05）。

3 讨论

热量限制指保证生物体营养成分基础上，限制每日热量摄入，能够在一定程度上降低生物体老龄化发生的心血管疾病、延长寿命等作用[1]。卵巢衰老为自然过程，主要原因为卵巢储备功能下降、卵泡数量下降，同时因卵巢环境变化，引发内分泌水平紊乱等情况。因此本次研究探究热量限制对卵巢保护功能的影响[2]。

本次研究中，相同饮食时间内，研究组小鼠始基卵泡占比增加，减少闭锁卵泡占比，能够说明，热量饮食可阻止化疗小鼠始基卵泡向初级卵泡转变，进而减少卵泡募集消耗；而此时小鼠雌二醇数量上升，在下丘脑-垂体-卵巢轴抑制下，可降低黄体形成，并在孕酮水平较低的情况下，使其生殖能力受到一定程度的抑制，但因卵巢储备功能的相对提升，一旦恢复正常饮食，可增强小鼠生殖能力；在对氧化应激反应研究中，研究组SIRT3、CATmRNA表达水平均较常规组上调，考虑原因为机体食物代谢过程中可产生大量自由基，而热量限制可减少机体氧化应激反应发生，进而达到抗卵巢衰老的作用。

综上，热量限制可通过增强小鼠卵巢抗氧化应激能力，进而可增强及卵巢储备能力，并改善改善内分泌水平，达到增强卵巢保护功能的效果。但卵巢衰老过程中受多种因素影响，因此具体机制仍有待进一步研究，以为延缓卵巢衰老提供治疗思路。