两种菌体前处理方法对MALDI-TOFMS鉴定临床分离菌效果的影响

2020-01-08杨铭华阚秀梅孙喜娟晏培杰宋娜

国际感染病学(电子版) 2019年3期

杨铭华，阚秀梅，孙喜娟，晏培杰，宋娜

哈尔滨市儿童医院检验科，黑龙江哈尔滨 150010

1 材料与方法

1.1 材料菌株来源：由实验室保存和分离的43种临床常见菌株。主要试剂和仪器：MALDI-TOFMS微生物样品处理试剂，384目标板，组分I（包括乙腈，甲酸，纯水）6,000 μL，组分II（包括乙腈，三氟乙酸，纯水）200 μL哥伦比亚血液板，沙宝弱片[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统（Microflex，北京布鲁克科技有限公司），生物安全柜（Biobse B2-x），恒温培养箱（Thermo Fisher 3111），红外接种环灭菌器（UniPower-I），涡旋混合器（GL-88B），紧凑型离心机（LX-300）。

1.2 方法

1.2.1 菌株传代将在哥伦比亚血液平板上收集的革兰氏阳性细菌（16株）和革兰氏阴性菌（14株）杂交，并将真菌（13株）用沙宝弱板培养。传代培养条件：将细菌置于37 ℃，含5%CO2培养箱中18-24小时，并在35 ℃真菌培养箱中制备霉菌24-48小时。

1.2.2 仪器校准在测试之前，使用单个大肠杆菌ATCC 25922菌落作为仪器校准标准。

1.2.3 提取方法将20-30 μL组分I加入每个离心管（200 μL）中，从上部菌落中取出单个菌落，并与1 μL无菌接种环或移液管尖端混合。混合并摇动5分钟后，将1 μL样品加入到靶板中并使其风干，加入1 μL组分II以覆盖样品点并使其风干。每个样品平行检测3次[1]。

2 结果

见表1。

3 讨论

在这项研究中，43种临床分离株以两种不同的方式进行预处理，并通过MALDI-TOFMS进行鉴定。结果表明，MALDI-TOFMS鉴定革兰氏阳性菌和真菌的准确率明显高于提取方法后的涂片处理。可以看出，适当的微生物预处理可以改善MALDI-TOFMS鉴定。蛋白质指纹精确度和稳定性以上结果与赵桂明等的结果一致直接应用快速且易于处理，但对其他细菌代谢物更敏感、更容易变化。但是，甲酸-乙腈提取可以从细菌中提取蛋白质。得到的图中蛋白质离子峰的强度是一致的。但提取方法得到的离子峰的信号峰值相对较高，包括更多蛋白质标记物[2]。有研究[3]使用直接涂抹和提取方法鉴定和验证了200株肺炎野生菌株。该比率为100%，通过比较细菌肺炎的特征峰，可以鉴定亚种，为鉴定肺炎克雷伯菌提供了一种快速有效的方法。