脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型建立及客观性评价 *

★ 陈浩 刘志勇 侯吉华 李龙雪 朱文婷 舒坤 张琦***

(1.江西中医药大学附属医院 南昌 330006;2.江西中医药大学 南昌330004)

随着生活方式的改变，肥胖成为了世界上日益严重的问题。WHO工作报告中指出2015年全球成人已有23亿达到超重，7亿人口达到了肥胖标准[1]。单纯性肥胖症是现代社会中最常见的营养障碍性疾病，是指无明确的内分泌、遗传原因，因热量摄入超过消耗而引起脂肪组织在体内堆积过多，导致体重超常的病症，并除外继发性肥胖，约占肥胖95%。单纯性肥胖从中医症型而言，分为脾虚湿阻型、阴虚内热型、肝瘀气滞型等多种症型，其中尤以脾虚湿阻型单纯性肥胖为临床常见，肥胖者素体脾虚之人，脾失健运，水湿不布，反而聚湿生痰，痰湿留于机体产生肥胖[2-4]。中医临床治疗脾虚湿阻型单纯性肥胖手段多样如中药、针刺、穴位埋线等，并已取得一定效果[5-9]。因此建立脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型，尽快开展其病变机制的研究并临床助力已刻不容缓。

关于脾虚动物模型已有深入研究[10-13]，但脾虚湿阻型单纯性肥胖的动物模型的建立学界尚未有涉足。因此本实验针对脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠模型的建立展开研究，为下一步自拟的固本化湿降脂方作用于脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的药效学实验的开展及脾虚湿阻型单纯性肥胖病变机制的研究提供基础。

1 实验动物与材料

1.1 实验动物 SPF级SD雄性大鼠70只(180-220g)，均购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物合格证号：SCXK(湘)2016-0002，动物饲养于江西中医药大学实验动物科技中心SPF级屏障系统内，动物合格证：SYXK(赣)2017-0004，环境温度为20℃～23℃、相对湿度45%～55%，自由饮水进食。

1.2 实验材料 数字式医用远红外热成像仪(维恩伟业，生产标准为YZB/渝0066-2009)，全自动生化仪(贝克曼AU480)，电子天平(AUY120岛津分析天平)。甘油三酯测定试剂盒(长春汇力，批号2019007)，总胆固醇测定试剂盒(长春汇力，批号2019004)，高密度脂蛋白测定试剂盒(长春汇力，批号2019006)，低密度脂蛋白测定试剂盒(长春汇力，批号2019008)，谷丙转氨酶测定试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司，批号20190522)，谷草转氨酶测定试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司，批号20190430)，肌酐测定试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司，批号20190515)。

2 实验方法

2.1 动物分组 将70只SD雄性大鼠适应性饲养检疫一周，随机分成2组，其中10只为正常组，60只为前期实验造模组，每笼饲养五只大鼠。

2.2 大鼠造模及模型指标筛选[14-18]造模采用79%湖北万千佳兴基础饲料(蛋白含量30%)基础上添加10%高胆固醇的动物油脂、10%胆固醇、1%胆盐形成造模饲料。高脂饲料喂养模型组大鼠一周后，在高脂喂养的同时，以冰糖水给大鼠灌胃，按每日2次每次2mL/只灌胃，持续时间为16d；同时每日一次游泳达到耐力极限后将大鼠放回笼内，游泳持续时间为21d。继续用高脂饲料喂养大鼠至七周后，造模完成。

依据临床诊断及文献[5-9,19]按如下指标筛选造模指标，造模筛选指标及症状评分：①行为：倦怠(无0分，有1分)，扎堆(无0分，有1分)，嗜卧(无0分，有1分)，动作缓慢(轻度缓慢1分，重度2分)，动作缓慢判断指标包括悬空拉尾抵抗力弱(2分)；②精神状态：正常0分，萎靡(1分)，常眯眼(1分)，反应迟钝(2分)；③毛发、耳尾及肛门部：毛发耳尾肛门均正常0分，毛发稀疏(1分)，枯黄无光泽(2分)，耳尾血色淡(1分)；④排便：正常0分，大便稀溏、便软不成形(1分)或泻下如水样(2分)；⑤造模五周后，正常0分，大鼠进食量少(1分)，体重增长缓慢或下降(2分)；⑥体温下降，数字式医用远红外热成像仪观察到动物远红外辐射的温度变化(一般1分，明显2分)。⑦舌体胖大质淡苔白滑(质正常淡红无苔0分，淡红有薄苔1分)。从前期实验造模组60只大鼠中挑选体重≥500g且症状评分≥10分的大鼠50只，将此50只大鼠编为后续实验模型组。

3 结果

3.1 体重检测结果

造模后，模型组与正常组大鼠体重比较，两者存在显著差异，说明模型组大鼠开始转变为单纯性肥胖大鼠。

3.2 远红外热成像检测结果 探测器的像元数:320×240，测温范围:0℃～50℃，测温精确度:±1℃，观察到动物远红外辐射的温度变化，随时储存图像，测量区域温，并进行图像分析。试验时室温保持24℃～27℃，相对湿度40%～60%之间，室内热源均匀，背景墙温度均匀一致。室内无明显空气流动及强红外辐射源存在等，以确保所测数据精确。

3.3 血脂四项检测结果

表2 为模型组与正常组血脂各项差异比较

造模后，模型组与正常组TG、TCH、HDL和LDL比较均有显著差异，说明模型组大鼠血脂异常。

图1，3 后期实验肥胖模型大鼠；图2，4 正常大鼠，颜色不同显示两组大鼠腹部脂肪的堆积程度不同。

3.4 肝肾功能检测结果

表3 为模型组与正常组肝肾功能差异比较

造模后，模型组与正常组Cr、ALT、AST比较均无显著差异，说明造模过程中，未对模型组大鼠肝肾造成损害。

3.5 胃肠动力活性检测结果

表4 为模型组与正常组肠肽激素及胃动素差异比较

造模后，模型组与正常组VIP及MTL比较，有显著差异，说明造模后的模型组大鼠胃肠蠕动能力较正常组大鼠有所下降，客观说明模型组大鼠脾的运化功能较正常组大鼠有所减弱。

3.6 舌像分析结果 造模结束后，采用佳能EOS 5D MARK IV单反相机对两组大鼠的舌体进行拍照。从图5-6中观察可知，舌苔明显存在差异。

图5 为模型组大鼠 图6 为正常组大鼠

由远红外热成像图显示所示，图1，3为实验肥胖模型大鼠，图2，4为正常大鼠。按照成像的对比图，可见，正常组大鼠腹部脂肪分布均匀，颜色呈现绿色至粉色，红外温度显示较高。实验模型组大鼠腹部脂肪较多，颜色呈现蓝色至深蓝色，红外温度显示较低，说明腹部有脂肪堆积。由表1-2可知模型组体重及TG、TCH、HDL和LDL浓度都与正常组相比有显著差异，TG、TCH等数值明显增高，后期实验模型组体脂明显增多，显示出高脂饮食后，后期实验模型组正体现出单纯性肥胖大鼠的病理特征。

实验模型组肝肾功能与正常组没有显著差异，说明造模过程中大鼠肝肾不存在脏器的损伤，可以交叉排除实验模型组大鼠是脾肾两虚、肝郁气滞等其他中医证型的可能。同时实验模型组肠肽激素、胃动素与正常组的明显差异说明模型组胃排空能力及舒张胃肠平滑肌下降，符合中医脾虚湿阻中脾气虚致脾气升发无力、脾失健运的客观描述。从两组大鼠舌像可知，图5后期实验模型组大鼠舌像图可见其舌体胖大，舌质淡，苔白滑。图6正常组大鼠舌像图可见其舌苔薄白，舌质淡红的中医表征。

4 讨论

从60只大鼠中挑选体重≥500g，且症状评分≥10分的50只大鼠为后续实验造模组，结合大鼠体重、远红外观测、血脂四项与正常组比较可知为单纯性肥胖大鼠。通过肝肾功能的检测排除脾肾两虚、肝郁气滞等其他中医证型的可能。同时肠肽激素及胃动素及舌像分析多项验证可认为实验模型组符合脾虚湿阻型单纯性肥胖型大鼠模型。且60只大鼠中造模成功50只，造模成功率为83.3%，可认为脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠模型造模成功。

脾虚湿阻型单纯性肥胖大鼠模型的建立可为脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型的药效学研究，及脾虚湿阻型单纯性肥胖病变机制探讨建立基础。