疏脑解郁汤对脑卒中后抑郁症大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平的影响

脑卒中后抑郁(PSD)指脑卒中产生的心理问题，主要表现为持续性抑郁，可维持14 d以上，通常致残和病死率较高，为老年残疾和病死的高危险因素[1]。PSD通常会在脑卒中后产生，在思维方面表现为迟缓，通常病人容易产生较低情绪和绝望的念头，甚至有轻生的想法，进而产生自杀行为。PSD对病人生活产生严重影响，不利于肢体功能恢复，增加家庭疾病负担[2]。目前的研究并未明确PSD的病因和发病机制，也就没有理想的治疗方法和治疗效果。疏脑解郁汤是李宝玲多年的经验方，病机为气郁、血瘀、痰阻，治则为疏肝解郁、理气活血、化痰宁心。有研究显示，采用疏脑解郁汤能够明显缓解PSD大鼠的抑郁症状，对海马组织损伤具有保护作用[3]。本研究通过观察疏脑解郁汤对PSD大鼠血清6-酮-前列腺素1α(6-Keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)含量的影响，进一步探讨疏脑解郁汤治疗PSD可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用清洁级雄性SD大鼠130只，由中国食品药品检定研究院提供，动物批号：11401500045192，采用普通大鼠饲料、自来水喂养。

1.2 药物及试剂 疏脑解郁汤(柴胡、赤芍、丹参、黄芩、陈皮、半夏、茯苓、炙甘草、枳实、竹茹、石菖蒲、合欢皮、川芎、远志、炒枣仁)；由山西省中医院药剂科统一煎制；煎煮方法：将上述药材去除杂质，煎煮2次过滤后，将2次滤液合并浓缩至膏状，于烘箱干燥后研粉，4 ℃冰箱保存备用。盐酸帕罗西汀片(商品名：舒坦罗，生产厂家：浙江尖峰药业有限公司，国药准字：H20040533)。其他包括0.4%戊巴比妥、6-Keto-PGF1α、TXB2试剂盒，由黄石市艾恩斯生物科技有限公司提供。

1.3 主要仪器 电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器械有限公司GZX-DH-Ⅱ)；自动酶标分析仪(上海安泰分析仪器有限公司AT-858型)；微量移液器(赛默飞世尔FINNPIPETTE)；低速冷冻离心机(科大创新股份有限公司)；恒温水浴箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 动物饲养 初次购回动物在实验室中先适应性喂养1周，不限食水，手术前12 h不再喂食，前6 h不再供水。

1.4.2 PSD动物模型制备 根据Zea-longa改良线栓法制作局灶性脑缺血后再灌注大鼠模型，戊巴比妥麻醉大鼠，并于手术台仰卧固定，分离暴露左侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)，常规消毒颈部正中切口。无创微血管夹夹闭，结扎，将鱼线栓子从CCA插入，松开微血管夹，鱼线经CCA进入ICA，从CCA分叉处鱼线进入，可达大脑中动脉起始部，制作大鼠脑缺血状态。计时以鱼线进入大脑中动脉为准，缺血1.5 h后缓慢拔出，实现再灌注，最后结扎ECA残端并进行缝合。待其苏醒，用5级评分法进行神经功能评分，对评分结果进行筛选，留取Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级大鼠，常规条件饲养。术后1周孤养大鼠，禁水24 h、禁食24 h、夹尾1 min、昼夜颠倒24 h、水平振荡30 min(160次/min)等方法刺激，维持3周，每日选择1种。通过持续的应激处理，大鼠表现为活动、进食、进水减少，糖水消耗减低，重量下降，求生欲望下降等，提示造模成功[4]。

1.4.3 分组及给药方法 随机选取15只大鼠作为空白对照组，其余大鼠采用改良线栓法行局灶性脑缺血再灌注模型制作，在造模过程中，由于死亡率较高，于空白对照组中抽取了8只大鼠进行造模。符合特定要求条件，进入下一步骤中。术后1周，连续3周进行孤养结合慢性温和应激。造模成功后，将其随机分为模型组(7只)、盐酸帕罗西汀组(8只)、疏脑解郁汤大剂量组(8只)、中剂量组(7只)、小剂量组(8只)。空白对照组与模型组采用等体积生理盐水灌胃；疏脑解郁汤大、中、小剂量组采用不同剂量疏脑解郁汤溶液灌胃，大剂量疏脑解郁汤为成人用药的15.0倍，中剂量为成人标准的7.5倍，小剂量为成人标准的3.5倍，分别为3.015 g/kg、1.058 g/kg、0.704 g/kg。盐酸帕罗西汀组予盐酸帕罗西汀溶液灌胃，盐酸帕罗西汀给药剂量为成人的5倍，即0.001 7 g/kg。PSD大鼠造模成功1周经口灌胃给药，每日1次，维持4周。

1.4.4 观察指标 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测6-Keto-PGF1α、TXB2水平，按试剂盒说明进行操作。

2 结 果

2.1 各组大鼠体重变化情况 不同时间段模型组与空白对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；疏脑解郁汤组体重增加较快，且以大剂量组增加最快。详见表1。

表1 各组大鼠体重变化情况(±s) g

与空白对照组比较，1)P<0.05

2.2 各组大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平比较 与空白对照组比较，模型组大鼠6-Keto-PGF1α含量显著降低，TXB2含量显著增加(P<0.05)。与模型组比较，疏脑解郁汤大、中剂量组6-Keto-PGF1α含量显著增加，TXB2含量显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 各组大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平比较(±s) pg/mL

与空白对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

3 讨 论

前列环素(prostaglandin，PGI2)在当前已知的血小板聚集抑制剂中作用最强，血栓素A2(thromboxanA2，TXA2)有较强的血小板聚集作用，而TXA2和PGI2的性质不稳定，TXB2和6-Keto-PGF1α作为TXA2和PGI2的前体，性质较稳定，所以目前都用TXB2和6-Keto-PGF1α代表两者的浓度，TXB2和6-Keto-PGF1α与抑郁症有一定相关性，抑郁症病人血清TXB2水平升高，6-Keto-PGF1α水平降低[5]。脑血管病病人6-Keto-PGF1α水平下降，TXB2水平升高[6]。

李宝玲多年治疗PSD病例，总结出经验方疏脑解郁汤，疏脑解郁汤针对的主要病机是气郁血瘀痰阻，其主要治则是疏肝解郁、理气活血、化痰宁心。该方的底方为柴芩温胆汤、四逆散为主，在此基础上进行加减化裁。柴芩温胆汤具有疏肝解郁、理气化痰的作用，四逆散可以透邪解郁，和柴芩温胆汤合用增加疏肝理气的作用，两方共奏疏肝解郁、理气化痰的作用，方中石菖蒲、远志化痰开窍；炒枣仁、合欢皮养心安神解郁；丹参、川芎使血行而不滞，活血中有理气作用。诸药合用，安全有效，毒副作用少。

本研究通过观察PSD大鼠血清6-Keto-PGF1α、TXB2水平，探讨疏脑解郁汤对PSD的治疗作用，明确其作用机制。本研究结果显示，疏脑解郁汤能有效升高 PSD大鼠6-Keto-PGF1α水平，降低TXB2水平，改善 PSD 大鼠的抑郁症状，其机制可能与其能升高PSD大鼠6-Keto-PGF1α、降低血清TXB2水平有关。