IL-6、STAT3在子宫内膜癌中的表达及与临床特征的关系△

姚文娟，宋会双，王凤琴，于婧，吴冬梅，刘大鹏

河北中石油中心医院1病理科,2神经外科，河北 廊坊 065000

子宫内膜癌是临床常见的妇科恶性肿瘤，具有较高的发病率，近年来，随着人们生活方式的改变及社会压力的增加，其发病率呈逐年上升的趋势，且发病人群趋于年轻化[1-2]。目前临床对子宫内膜癌在分子水平上的发病机制尚不明确，据较多研究显示，其发生与发展是多种因素共同参与导致的结果，涉及多种抑癌基因的失活及癌基因的激活。同时炎症与肿瘤的发生存在密切关系，大量研究显示，在富含趋化因子、炎性细胞、促DNA损伤物质的炎性环境中可引发肿瘤的发生与发展[3-5]。信号转导及转录激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）是一种具备高度同源性的转录因子，能够介导多种生长因子和细胞因子的信号转导至细胞核，对靶基因的转录产生影响，能够调控细胞的功能，与肿瘤的发生与发展以及肿瘤细胞的凋亡具有密切相关性[6]。STAT3是STAT的重要成员，是一种被公认的癌基因。子宫内膜癌的高危因素，如高龄、多囊卵巢综合征、肥胖、糖尿病等可使白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和肿瘤坏死因子表达增加，这些炎性介质在子宫内膜癌的发生和发展中起重要作用。本研究主要探讨IL-6、STAT3在子宫内膜癌中的表达情况，并分析其与临床特征的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2013年8月至2018年8月于河北中石油中心医院接受手术治疗的82例子宫内膜癌患者为研究对象。纳入标准：①均经病理检查确诊为子宫内膜癌；②未接受放化疗治疗。排除标准：①伴其他恶性肿瘤；②伴感染性疾病。82例子宫内膜癌患者中，年龄34～72岁，平均年龄（57.82±7.13）岁；肿瘤大小0.7～5.8 cm，平均（2.76±0.32）cm。选取子宫内膜癌组织标本为观察组，癌旁正常子宫内膜组织（距肿瘤2 cm）标本为对照组。本研究通过医院伦理委员会批准，且所有患者均自愿参与本研究，并签署知情同意书。

1.2 检测方法

应用免疫荧光组化法检测两组子宫内膜组织中IL-6、STAT3的表达情况：兔抗人IL-6单克隆抗体（稀释浓度为1∶100）购自上海明睿生物技术有限公司，兔抗人STAT3多克隆抗体（稀释浓度为1∶150）购自美国Ventana公司。将子宫内膜组织应用4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，染色采用EnVision二步法，将组织切片置于65℃温度下烘烤12 h，然后脱蜡、水化切片，应用3%过氧化氢对内源性过氧化物酶进行灭活，加入一抗放置在湿盒中，在4℃的环境下孵育过夜，然后加入二抗，在37℃恒温箱中孵育30 min，将辣根过氧化物酶应用链霉亲和素标记，并置于37℃环境下孵育10 min。每张组织切片上滴加50 μl二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色剂，在光学显微镜下显色3～5 min，适时应用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗以终止显色，苏木素复染，中性树胶进行封固。

1.3 阳性判断

IL-6、STAT3均以细胞质或细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性，应用半定量积分法，对每个视野阳性细胞着色强度及阳性细胞所占百分比分别计分。着色强度：未着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色或褐色为3分；阳性细胞所占百分比：＞50%为3分，26%～50%为2分，2%～25%为1分，≤1%为0分。阳性细胞所占百分比计分+阳性细胞着色强度计分＞3分则判断为阳性[7-8]。

1.4 观察指标

检测两组组织中IL-6、STAT3的表达情况，分析IL-6、STAT3与子宫内膜癌患者临床特征的关系，并分析IL-6、STAT3在子宫内膜癌组织中表达的相关性。

1.5 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）的表示，组间比较采用t检验，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman秩相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-6、STAT3表达情况的比较

观察组子宫内膜组织中IL-6、STAT3阳性表达率分别为 59.76%（49/82）、63.41%（52/82），均明显高于对照组的6.10%（5/82）、10.98%（9/82），差异均有统计学意义（χ2=53.452、48.263，P＜0.01）。

2.2 不同临床特征的子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中IL-6、STAT3阳性表达情况的比较

国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、组织学分级为G2～3级的子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中IL-6阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及组织学分级为G1级的患者，差异均有统计学意义（χ2=10.530、11.078、12.584，P＜0.01）；FIGO 分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、组织学分级为G2～3级的子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中STAT3阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及组织学分级为G1级的患者，差异均有统计学意义（χ2=12.373、12.323、14.267，P＜0.01）。（表1）

表1 不同临床特征的子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中的IL-6、STAT3阳性表达情况（n=82）

2.3 IL-6、STAT3在子宫内膜癌组织中表达的相关性

经相关性分析显示，IL-6与STAT3在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关（r=0.657，P＜0.05）。

3 讨论

Virchow最初在1863年提出肿瘤的发生与炎性反应存在密切联系，其在肿瘤组织中检测到了白细胞，并发现了约有15%的恶性肿瘤患者因感染而死亡，例如由人乳头状瘤病毒长期感染引发的宫颈癌、慢性乙型肝炎感染久治不愈可发展为肝癌等[9-10]。IL-6是目前发现的功能较为广泛的细胞因子之一，其参与血细胞生成，调节免疫反应，并参与多种细胞的分化及增殖。起初临床学者对于IL-6的研究只是将其作为一种炎性因子，后来越来越多的研究发现其与肿瘤的发生与发展以及肿瘤的转移、侵袭具有密切相关性，同时还与较多恶性肿瘤的预后有关[11]。STAT3是一种存在于细胞质的信号转导分子，其激活后能够与DNA相结合，进而与酪氨酸磷酸化的信号通路相互偶联，对细胞凋亡、分化、增殖、免疫调节等多种相关功能蛋白的表达具有调控作用[12-14]。STAT3是STAT家族中与肿瘤发生与发展关系最密切的成员，其在多种肿瘤组织中均被激活，如卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌等[15]。

在本研究中对IL-6及STAT3在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的阳性表达情况分析显示，观察组患者子宫内膜癌组织中IL-6、STAT3阳性表达率均明显高于对照组，说明IL-6、STAT3在子宫内膜癌组织中的表达水平高于健康内膜组织。在本研究中对IL-6及STAT3与子宫内膜癌患者临床特征的关系分析中显示，FIGO分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、组织学分级为G2～3级的子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中IL-6、STAT3阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及组织学分级为G1级的患者，说明IL-6、STAT3阳性表达情况与子宫内膜癌患者FIGO分期、淋巴结转移及组织学分级有关，能够促进肿瘤细胞的侵袭与转移，分析其原因主要是因为IL-6能够通过胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）/核因子-κB（nuclear factor of kappa-B，NF-κB）信号通路对子宫内膜癌细胞的增殖与生长发挥促进作用，同时炎性细胞对局部活性氧簇及活性氮簇的产生具有促进作用，导致细胞DNA受损，极易导致细胞异常突变，如中性粒细胞、肥大细胞等炎性细胞均能够介导氮簇、氧簇、白细胞介素、干扰素等炎性反应过程，对肿瘤的侵袭及生长均具有影响，可促进肿瘤细胞的侵袭与转移。STAT3已经被认为是一种癌基因，其激活后能够诱导某些与细胞分化、增殖、凋亡密切联系的关键基因出现异常表达，能够通过多种途径对细胞恶性转化、增殖发挥促进作用，对细胞凋亡发挥抑制作用，且随着其阳性表达的升高，会促进肿瘤的侵袭与转移。在本研究中对IL-6、STAT3在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析中显示，IL-6与STAT3在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关，分析其原因主要是因为IL-6能够通过gp130激活STAT3，然后进一步促进抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-XL（B cell lymphoma-XL，Bcl-XL）的表达，进而刺激肿瘤细胞的生长，使病情进一步恶化，因此IL-6的阳性表达对STAT3的表达具有促进作用。

综上所述，IL-6、STAT3在子宫内膜癌组织中的阳性表达率明显升高，且与肿瘤细胞的侵袭与转移存在一定的关系，对临床诊断与治疗子宫内膜癌具有较高的临床价值。