单免疫球蛋白-白介素1受体蛋白在原发性EB病毒感染肝损伤患儿血清中的表达及临床意义

胡玲珑 温正旺 俞佳珂 陈洁 石海矾 陈均亚 余金生 陈益平

Toll样受体介导的炎症反应与HBV、HCV的肝损 伤密切相关[1-2]。单免疫球蛋白-白细胞介素1受体相关蛋白（single immunoglobulin interleukin-1 receptor related，SIGIRR）是最近发现的一个Toll样受体超家族成员，是Toll样受体信号通路中的负性调控分子，起着一个免疫反应刹车制动器样的作用。有研究发现它参与了肝脏的炎症反应[3]。原发性EB病毒感染患儿，80%左右可出现肝损伤[4]；而这些患儿的临床症状多在治疗1周后好转[5]。SIGIRR是否参与EB病毒感染后导致的肝损伤，目前尚未明确。本研究通过检测原发性EB病毒感染患儿血液单核细胞中SIGIRR的表达情况，以探讨这一指标在损伤中的临床意义。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2018年1至12月在本院住院治疗的40例原发性EB病毒感染患儿为A组，入院时EB-IgM和EB-DNA检测均阳性；另选门诊体检EB-IgG阳性（EB-VCA-IgG、EB-NA-IgG）而EB-IgM阴性的40例儿童为B组，门诊体检EB-IgG和EB-IgM均阴性的40例儿童为C组。3组对象性别、年龄比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。本研究经医院医学伦理委员会审查通过（编号：LCKY2019-90），所有患儿家属知情同意。

表1 3组对象一般资料比较

1.2 血清收集 采集A组患儿入院时（急性期）及治疗1周后（恢复期）以及B、C组儿童体检时静脉血3ml，加入含肝素溶液（10～50U/ml血样本）的试管并混匀，使之呈不凝状态。使用PBS将抗凝血稀释1倍，18～20℃用水平离心机以400r/min离心30～40min，留取上层血清备用。

1.3 单核细胞中SIGIRR表达水平检测 采用ELISA法。取血清2ml加等量PBS混匀，加入含有2ml淋巴细胞分离液的培养管中，然后再400r/s离心40min后出现分层，用200μl规格移液枪收集淋巴细胞，加入3～5ml PBS，300r/s离心 10min，去上清液加入 3～5ml PBS，200r/s离心 20min，去上清液加入 3～5ml PBS，400r/s离心10min，去上清液后得到单核淋巴细胞。ELISA试剂盒（美国PeproTech公司）在室温下放置30min，每孔加50μl单核细胞匀浆或标准样品，留2孔作空白对照用；塑料薄膜覆盖微孔板，孵育2h；洗板4次，反转酶标板，将洗涤液轻甩干；每孔加50μl抗SIGIRR抗体（英国Abcom公司），封板，孵育2h；洗板4次，反转酶标板，洗涤液轻甩干；每孔按顺序滴入显色剂A和B，遮光常温孵育30min；滴进终止反应液100μl，酶标仪在450nm处检测各孔光密度值（OD）；以标准品浓度为横坐标，OD为纵坐标，绘制标准曲线，根据样品所测OD确定其表达水平。

1.4 AST、ALT水平检测 使用德国西门子ADV2400全自动生化分析仪检测血清AST、ALT水平。

1.5 统计学处理 应用SPSS 18.0统计软件。计量资料用表示，组内治疗前后比较采用配对样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。原发性感染患儿血清SIGIRR表达水平与ALT水平的相关性分析采用Pearson相关。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原发性感染患儿治疗前后血清SIGIRR表达水平及ALT、AST水平比较 治疗1周后，原发性感染患儿血清SIGIRR表达水平明显升高，ALT水平明显降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；而AST水平变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 原发性感染患儿治疗前后血清SIGIRR表达水平及AST、ALT水平比较

2.2 3组对象血清SIGIRR表达水平的比较 A组入院时血清SIGIRR表达水平与B、C组（[0.149 4±0.005 8）、（0.145 7±0.008 7）pg/ml]比较，差异有统计学意义（F=64.39，P＜0.01），其中A组较B、C组均明显升高（均P＜0.05），B组与C组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。A组治疗1周后与B、C组的差异无统计学意义（F=0.33，P＞0.05）。

2.3 原发性感染患儿血清ALT水平与SIGIRR表达水平的相关性 原发性感染患儿入院时血清ALT水平与SIGIRR 表达水平呈负相关（r=-0.806，P＜0.05），治疗 1周后两者未见相关性（r=0.106，P＞0.05），见图 1。

3 讨论

EB病毒属4型疱疹病毒，是一种非嗜肝病毒。绝大部分原发性EB病毒感染可导致肝损伤，但EB病毒感染肝损伤的分子机制目前仍不明确。既往临床研究提示EB病毒与HBV感染导致的肝损伤存在某种相似性，可能通过B淋巴细胞亚群协同作用实现[6]。Zekri等[7]研究发现HCV感染伴EB病毒急性感染的患者肝损伤更为严重。另有研究显示EB病毒感染后可诱发机体免疫相关因子增加，从而介导体内各脏器的损害，其中以肝损伤较为明显[8]。

图1 原发性感染患儿血清ALT水平与SIGIRR表达水平的散点图（a：入院时；b：治疗 1周后）

SIGIRR于1999年在人体细胞中初次鉴定[9]。它是白介素1受体和Toll样受体超家族的一个特殊成员[10-11]，其细胞外部分的免疫球蛋白（Ig）结构域由单个Ig分子组成，有别于其他由3个Ig分子组成的成员。SIGIRR的主要功能是调节免疫反应、抑制过度炎症反应，并在维持宿主免疫自稳定机制中起着重要作用。SIGIRR通过抑制白介素1受体和Toll样受体信号传导通路来降低NF-κB转录因子的活性，从而发挥其抑制炎症反应的作用，同时通过影响Akt/mTOR和JNK等关键信号分子的活性，在细胞存活和增生中发挥重要的生物调节作用。近年来的研究表明，SIGIRR参与许多炎症反应的过程，与机体病原体感染、自身免疫性疾病、移植排斥反应等有着密切联系；可见，SIGIRR广泛参与各种疾病的免疫调节过程，是一个重要的免疫制动子[12]。但SIGIRR与EB病毒感染导致的机体损害是否存在相关性，目前尚未明确。笔者分析了美国基因表达公共数据库中一组有关肝脏疾病的数据（GEO数据库号：GSE54238），发现慢性HBV病毒感染患者肝组织SIGIRR表达水平与正常人无明显差异，而肝硬化、肝癌患者肝组织SIGIRR表达水平均明显下降。

本研究结果发现，A组患儿急性期血清SIGIRR表达水平较B、C组均明显下降，且与恢复期比较差异亦有统计学意义。治疗1周后，A组患儿血清SIGIRR表达水平及ALT水平变化明显，提示经治疗后，EB病毒感染导致的肝损伤已得到有效控制，SIGIRR水平升高是肝损伤的保护因子。此外还发现，原发性感染患儿入院时血清ALT水平与SIGIRR表达水平呈负相关，提示SIGIRR在EB病毒感染导致的肝损伤中起着重要作用。AST多在慢性肝损伤时升高明显，本研究结果显示EB病毒感染急性期与恢复期AST比较差异不明显。

综上所述，本研究从炎症反应入手，将SIGIRR引入EB病毒感染导致肝损伤的研究中，结果发现EB病毒感染后体内SIGIRR表达水平明显降低，且与ALT水平变化呈负相关，提示SIGIRR可能参与EB病毒肝损伤的病理、生理过程；经治疗后，SIGIRR表达水平升高，而ALT水平明显降低，提示SIGIRR是此类肝损伤的保护因子。这为EB病毒感染致肝损伤的治疗提供了一个全新的靶点及理论依据。