外源性大麻素HU210缓解慢性神经病理性疼痛诱发的焦虑抑郁样行为机制研究*

吴宇蔚 付东琴 谷巧芬 刘一辉

（陕西师范大学现代教学技术教育部重点实验室，西安 710062）

慢性痛是一种极为高发、流行的疾病之一，全球超过20% 的人群患有慢性疼痛。慢性痛病人常常伴有焦虑、抑郁、认知等功能的改变[1,2]，并且慢性痛并发焦虑和抑郁情绪的治疗也给社会带来了巨大的经济负担。临床研究表明，在大多数情况下，慢性痛会增加个体的负性情绪反应，慢性痛病人并发焦虑和抑郁等精神疾病的概率要高于普通人群[3,4]。动物研究表明，大鼠脊神经结扎 (spinal nerve ligation,SNL) 建模后第14天、21天出现了触诱发痛行为，并且在高架十字迷宫中进入开放臂次数百分比和开放臂停留时间百分比显著缩短，在强迫游泳实验中不动时间显著增加[5]。以上研究表明，经历慢性痛的人群或动物均伴有焦虑和抑郁样情绪。因此，慢性痛诱发焦虑和抑郁样情绪的机制及治疗手段是目前亟须解决的问题。

前额叶皮层 (prefrontal cortex,PFC) 亚区之一—腹外侧眶皮层 (ventrolateral orbital cortex,VLO)，参与了疼痛相关的负性情绪，例如电损毁或者化学损毁大鼠双侧VLO阻断了福尔马林诱导的条件位置厌恶 (formalin-induced conditioned place avoidance,F-CPA)[9]。Zhang等发现，外周神经损伤导致PFC的前边缘区 (prelimbic area) 中锥体神经元的放电减弱从而影响疼痛和情绪反应[10]。基于以上推论，外源性大麻素HU210在神经病理性疼痛引起的焦虑和抑郁样行为中的作用及对VLO锥体神经元自发放电的影响还不清楚。因此，本研究采用CPN结扎构建神经病理性疼痛模型，并运用药理学及在体细胞外记录等方法，探讨外源性大麻素HU210在神经病理性疼痛诱发焦虑和抑郁样行为中的作用及可能机制，为慢性神经病理性疼痛诱发焦虑和抑郁情绪的治疗提供新的思路。

方 法

1.实验动物及分组

实验动物为成年雄性C57Bl/6小鼠，鼠龄8周，体重24～26 g，由西安交通大学医学院提供。实验室饲养动物环境：温度22±1℃，湿度40%，保持通风换气，干净整洁，光照自动控制：8:00～20:00开灯，20:00～8:00熄灯。

分组：① 研究疼痛及焦虑、抑郁样行为，将动物分为SHAM组和CPN组；②研究腹腔注射HU210对CPN结扎引起焦虑、抑郁样行为的影响，将动物分为Vehicle组和HU210组；③研究VLO定位注射HU210对CPN结扎引起焦虑、抑郁样行为的影响，将动物分为Vehicle组和HU210组；④研究CPN结扎对VLO中锥体神经元自发放电的影响，将动物分为SHAM组和CPN组；⑤研究腹腔注射HU210对CPN结扎后VLO中锥体神经元自发放电的影响，记录并比较基线 (Baseline)和HU210注射后的神经元放电情况。

2.实验仪器及主要试剂

von Frey 纤毛（美国North Coast Medical 公司），脑立体定位仪（深圳市瑞沃德生命科技有限公司），高架十字迷宫、强迫游泳等动物行为分析系统（宁波安来软件科技有限公司），Ethovision XT 10运动轨迹跟踪系统（荷兰Noldus公司），CED电生理记录分析系统（英国CED公司），微量注射泵(Harvard Apparatus)，套管系列（深圳市瑞沃德生命科技有限公司），HU210（sigma公司）。

3.实验方法

（1）神经病理性疼痛模型的建立：神经病理性疼痛模型的建立参照Vadakkan等报道的方法[11]，即小鼠腹腔注射戊巴比妥钠 (50 mg/kg)麻醉后，沿着水平线30～45°剪开左后肢腓骨头端皮肤，暴露出一条白色的筋膜，用钝性镊子沿着筋膜分开肌肉，用玻璃分针分离腓总神经 （假手术组只需分离腓总神经，不需要结扎），再用鼠尾胶原纤维结扎腓总神经，结扎的松紧程度以小鼠腿部肌肉轻微颤抖为宜。结扎完后将腓总神经放回原来的位置，并且在伤口处涂抹少量青霉素粉末，最后缝合好肌肉和皮肤。

（2）50%缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)测定：将小鼠置于底部为金属网格的棕色测试框中，让小鼠在测试框中适应环境30 min，直到小鼠的探索和理毛行为停止。根据chaplan等介绍的up and down法[12]，将一系列von Frey纤毛 (0.04,0.07,0.16,0.4,0.6,1.0,1.4,2.0 g) 从0.6 g力度开始参照up and down法从金属网格测试框下方刺激小鼠后肢足底中央，以von Frey 纤毛弯曲成“C”形4 s，如果小鼠出现抬脚、舔足、甩腿等反应则视为阳性反应 （记为O），否则视为阴性反应 （记为×）。如果第一根纤毛为阳性反应，则给予小一级的纤毛继续刺激。如果第一根纤毛为阴性反应，则给予大一级的纤毛继续刺激。以出现“O×”或“×O”开始再测四次，得到一串O或者×的序列组合，用该序列（查表）和最后一根纤毛的力度 (f) 计算出50% PWT。50% PWT (g) ＝ (10[Xf+kδ]) / 10000。其中Xf=log(f)；δ为各个纤毛力度取Log后的均差，在此约等于0.2427；k由序列查表所得。

（3）高架十字迷宫测试：将小鼠置于高架十字迷宫闭臂与开臂交叉处 （头朝开臂），采用Ethovision XT 10 动物运动轨迹跟踪系统记录其5 min的活动情况。观察指标：进入开臂次数百分比 (frequency in the open arms %)，即开臂次数 / （开臂次数 + 闭臂次数）×100%；进入开臂时间百分比 (time in the open arms %)，即开臂时间 /（开臂时间 + 闭臂时间）×100%；进入开臂和闭臂总次数。每只小鼠测试完后，用清水及30%酒精擦拭迷宫，防止留下气味线索影响后续小鼠的测试。

（4）强迫游泳测试：将小鼠置于盛有18 cm 水深（水温25±1℃）的玻璃圆筒（直径13 cm，高25 cm）内，采用Ethovision XT 10 动物运动轨迹跟踪系统记录其6 min的活动情况，分析后4 min 的不动时间 (immobility duration)。

（5）颅内埋管手术：CPN结扎后第5 d进行颅内埋管手术，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠 (50 mg/kg) 麻醉后，将小鼠固定在脑立体定位仪上，沿中线用剪刀将皮肤剪开，完全暴露出前囟和后囟，参考小鼠脑定位图谱确定VLO区 (AP:2.4 mm；M/L:±0.75 mm; DV:-2.7 mm)坐标，用颅骨钻在颅骨表面打孔，再将不锈钢双套管 (O.D.0.48 mm*I.D.0.34 mm / C.C 1.5 / B 5.5 / M 3.5)埋入VLO区域，用玻璃离子水门汀进行固定。术后进行观察，剔除有运动障碍的小鼠。

（6）颅内给药：小鼠高架十字迷宫、强迫游泳测试前1 h 进行颅内给药，设定微量注射泵参数：注射体积 (0.5 μl/side)、注射速率 (0.1 μl/min)、注射时间(5 min)，药物注射完后停留3 min，防止药物回流至套管内。

（7）在体电生理记录：小鼠腹腔注射乌拉坦(40 mg/kg) 麻醉后，将小鼠固定在脑立体定位仪上，并用保温毯维持其体温在37 ℃，采用玻璃微电极细胞外记录VLO (AP:2.4 mm；M/L:±0.75 mm;DV:- 2.7 mm) 锥体神经元的电活动，记录电极阻抗13～24 MΩ，电极内液为2 mol/L NaCl。细胞放电经Neurolog系统放大、Micro1401信号采集器采集和Spike2软件进行记录及分析。锥体神经元自发放电频率较慢 (0.1～5 HZ)，波宽 ≥1 ms，根据放电间隔图鉴别神经元的放电形式，放电间隔图由300 s 内神经元放电个数生成，bin宽4 ms，放电形式为不规则放电或爆发式放电[13]。符合以上标准且基础自发放电频率能稳定维持5 min的神经元进行记录分析，计算单位时间的自发放电频率。

4.统计学分析

利用SPSS 20.0 软件对实验结果进行统计分析，结果用均数±标准误 () 表示。为标准化起见，50% PWT (100% Baseline)=结扎后测试值 /结扎前测试值 ×100%，组间比较采用双因素重复测量方差分析 (Two-way RM ANOVA)，在每个时间点进行组间差异的事后检验(Bonferronit-test)。其他所有数据组间比较采用独立样本t检验 (Independent-Samplest-test) 进行分析，给药前后采用配对样本t检验 (Paired-Samplest-test) 进行分析。P＜ 0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1.CPN结扎降低小鼠的触诱发痛

为了研究CPN结扎对小鼠疼痛的影响，本研究利用von Frey纤毛分别在术后第7、14、21、28、35 d对SHAM组和CPN组小鼠手术侧进行50%PWT测试。双因素重复测量方差分析发现，CPN组小鼠的50% PWT显著低于SHAM组 (F(1,14)=301.55,P＜0.001,n=8)，时间主效应极其显著 (F(5,70)=25.27,P＜0.001)，时间与分组的交互效应极其显著(F(5,70)=28.45,P＜0.001)；事后检验发现，从术后第7 d开始，CPN组小鼠的50% PWT显著低于SHAM组，并且一直持续到第35 d（P＜0.001，见图1）。以上结果表明，CPN结扎引起的神经病理性疼痛模型建立成功。

2.CPN结扎导致小鼠产生焦虑和抑郁样行为

为了探讨CPN结扎是否对小鼠的焦虑和抑郁样行为产生影响，于CPN结扎后第13 d采用高架十字迷宫评估小鼠的焦虑样行为，强迫游泳测试评估小鼠的抑郁样行为。在高架十字迷宫行为学实验中，CPN组 (n=8) 与SHAM组 (n=10) 小鼠进入开臂和闭臂的总次数没有显著性差异（P=0.74，见图2A），说明CPN结扎后，小鼠运动功能并未受损，从而排除运动能力对行为结果造成的影响；对两组小鼠进入开臂时间百分比以及进入开臂次数百分比进行分析，结果显示，CPN组小鼠进入开臂时间百分比 (t=6.135,P＜0.001) 及进入开臂次数百分比 (t=4.297,P＜0.001) 均显著低于SHAM组（见图2B，2C）。在强迫游泳行为学实验中，CPN组小鼠在水中的不动时间 (t=4.012,P＜0.001,n=8)显著高于SHAM组（见图2D）。以上结果表明，CPN结扎后第13天导致小鼠出现焦虑和抑郁样行为。

图1 CPN组与SHAM组小鼠50% PWT的测定 (n=8,±SEM)###P＜0.001，CPN组与SHAM组比较 (双因素重复测量方差分析)；***P＜0.001，CPN组与SHAM组在各个时间点的比较 (Bonferroni t-test)Fig.1 50% PWT in CPN and SHAM mice (n=8,±SEM)###P＜0.001,CPN group compared with the SHAM group (Two-way RM ANOVA); ***P＜0.001,CPN group compared with the SHAM group at each time points (Bonferroni t-test).

3.小鼠腹腔注射HU210缓解CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为

为了研究外源性大麻素HU210能否改善CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为，小鼠在CPN结扎后第13天分别腹腔注射溶剂或20 μg/kg HU210，注射1 h后，我们再分别采用高架十字迷宫及强迫游泳实验检测小鼠的焦虑和抑郁样行为。在高架十字迷宫行为学实验中，溶剂组 (n=10) 与HU210(n=8) 组小鼠进入开臂和闭臂总次数没有显著性差异 (P=0.11，见图3A)，说明腹腔注射20 μg/kg HU210不影响小鼠的运动功能，从而排除运动能力对行为结果造成的影响；对两组小鼠进入开臂时间百分比以及进入开臂次数百分比进行分析，结果显示，HU210组小鼠进入开臂时间百分比 (t=7.498,P＜0.001) 及进入开臂次数百分比 (t=3.633,P＜0.01)都显著高于溶剂组（见图3B，3C）。在强迫游泳行为学实验中，HU210组 (n=8) 小鼠在水中的不动时间 (t=5.879,P＜0.001) 显著低于溶剂组（n=9，见图3D）。以上结果表明，小鼠腹腔注射20 μg/kg HU210能够改善CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为。

图2 CPN组 (n=8) 与SHAM组 (n=10) 小鼠高架十字迷宫测试及CPN组 (n=8) 与SHAM组 (n=8) 小鼠强迫游泳测试(±SEM)(A)进臂总次数；(B)进入开臂时间百分比；(C)进入开臂次数百分比；(D)不动时间；###P＜0.001，CPN组与SHAM组比较（独立样本t检验）Fig.2 Elevated plus-maze Test of CPN (n=8) and SHAM (n=10) mice and Forced Swimming Test of CPN (n=8) and SHAM (n=8) mice (±SEM)(A)Total number of arm entries; (B)Time in the open arms (%); (C)Frequency in the open arms (%); (D)Immobility duration; ### P＜0.001,CPN group compared with the SHAM group (Independent-Samples t-test).

4.小鼠VLO定位注射HU210缓解CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为

之前的研究结果显示，小鼠全身给予HU210能够改善CPN结扎引起的焦虑、抑郁样行为，那么VLO作为疼痛调节的高级中枢是否参与调节了HU210在CPN结扎引起焦虑、抑郁样行为中的作用？我们在小鼠CPN结扎后第13 d，向小鼠VLO中注射200 ng HU210或溶剂，并于1 h后分别采用高架十字迷宫及强迫游泳实验检测小鼠的焦虑和抑郁样行为。在高架十字迷宫行为学实验中，溶剂组与HU210组小鼠进入开臂和闭臂总次数没有显著性差异（P=0.53,n=8，见图4A），说明VLO注射200 ng HU210不影响小鼠的运动功能，从而排除运动能力对行为结果造成的影响；对两组小鼠进入开臂时间百分比以及进入开臂次数百分比进行分析，结果显示，HU210组小鼠进入开臂时间百分比 (t=3.038,P＜0.01) 及进入开臂次数百分比(t=2.773,P＜0.05) 都显著高于溶剂组（见图4B，4C）。在强迫游泳行为学实验中，HU210组 (n=9)小鼠在水中的不动时间 (t=7.111,P＜0.001) 显著低于溶剂组 （n=8，见图4D）。以上结果表明，小鼠VLO定位注射200 ng HU210能够改善CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为。

5.HU210可提高小鼠VLO中锥体神经元的自发放电频率

为了研究小鼠CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为是否与VLO中锥体神经元的活动有关，本研究利用在体细胞外记录方法，依据PFC中锥体神经元自发放电特征，从而对VLO中的锥体神经元进行甄别，并分别记录术后第13 d SHAM组及CPN组小鼠锥体神经元300 s的自发放电活动。结果显示，CPN组小鼠VLO中锥体神经元自发放电的频率 (1.21±0.1) spikes/s (n=49) 显著低于SHAM组(1.83±0.19) spikes/s（t=2.882,P＜0.01,n=50，见图5C）。以上结果表明，小鼠CPN结扎导致VLO中锥体神经元自发放电活动减弱。为了进一步研究小鼠CPN结扎后，HU210对VLO锥体神经元自发放电活动的影响，我们给小鼠腹腔注射HU210后再检测VLO锥体神经元的放电情况。首先，我们记录锥体神经元300 s的基础放电频率，然后再给小鼠腹腔注射20 μg/kg HU210，观察给药后20～30 min之间锥体神经元300 s的放电频率。结果显示，小鼠腹腔注射HU210之后，锥体神经元的放电频率 (2.06±0.67) spikes/s 显著高于基础放电频率(0.85±0.27) spikes/s (t=2.561,P＜0.05,n=8，见图5D）。以上结果表明，20 μg/kg HU210 显著提高CPN结扎后VLO锥体神经元的自发放电活动水平。

讨 论

图3 小鼠CPN结扎后，腹腔注射HU210在高架十字迷宫及强迫游泳测试中的作用(n=8～10,±SEM)(A)进臂总次数；(B)进入开臂时间百分比；(C)进入开臂次数百分比；(D)不动时间；##P＜0.01，###P＜0.001，HU210组与溶剂组比较（独立样本t检验）Fig.3 Effects of HU210 intraperitoneal injection on Elevated plus-maze and Forced Swimming Test after CPN ligation in mice(n=8-10,±SEM)(A)Total number of arm entries; B: Time in the open arms (%); (C)Frequency in the open arms (%); (D)Immobility duration; ##P＜0.01,###P＜0.001,HU210 group compared with the Vehicle group (Independent-Samples t-test).

据医学研究统计，慢性疼痛与焦虑和抑郁样精神疾病同时发生的概率高达80%，而临床结果又显示，神经病理性疼痛病人并发焦虑和抑郁样精神疾病的概率要比普通人群高4.9倍，这不仅严重影响了病人的生活质量，而且极大地增加了治疗难度，同时也给社会带来了巨大的经济负担。目前，一些神经机制如单胺递质和神经营养因子的耗竭、下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱、内源性大麻素系统功能紊乱等，已经被证实与疼痛和情绪异常相关。因此，本研究旨在探究外源性大麻素HU210在小鼠神经病理性疼痛诱发的焦虑和抑郁样行为中的作用，以及对VLO锥体神经元自发电活动的影响。结果表明，VLO中锥体神经元可能参与了HU210缓解神经病理性疼痛引起的焦虑和抑郁样行为。

图4 小鼠CPN结扎后，VLO定位注射HU210在高架十字迷宫及强迫游泳测试中的作用(n=8～9,±SEM)(A)进臂总次数；(B)进入开臂时间百分比；(C)进入开臂次数百分比；(D)不动时间；(E)药物注射位点；#P＜0.05,##P＜0.01，###P＜0.001，HU210组与溶剂组比较（独立样本t检验）Fig.4 Effects of VLO microinjection of HU210 on Elevated plus-maze and Forced Swimming Test after CPN ligation in mice (n=8-9,±SEM)(A)Total number of arm entries; (B)Time in the open arms (%); (C)Frequency in the open arms (%); (D)Immobility duration;(E)Injection site of drug; #P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001,HU210 group compared with the Vehicle group (Independent-Samples t-test).

本研究首先采用鼠尾胶原纤维对小鼠的腓总神经进行结扎，然后对术前及术后7、14、21、28、35 d的小鼠的疼痛阈值进行检测，结果发现，与羊肠线相比，鼠尾胶原纤维结扎同样能够让小鼠产生触诱发痛且至少持续35 d。在慢性痛模型中，我们通常采用多种实验范式来评估小鼠的焦虑和抑郁样行为，如高架十字迷宫、旷场、糖水偏爱、强迫游泳、悬尾实验等。Norman等研究表明，选择性神经损伤 (spared nerve injury,SNI) 7 d后，小鼠停留在旷场中央区域的时间显著减少，并且在强迫游泳实验中的不动时间显著增加[14]。同时Wang等的研究也表明，SNI 14 d后，大鼠对糖水的偏爱比率减少并且在强迫游泳实验中的不动时间有所增加[15]。因此，为了配合VLO微量注射药物的时间节点，本研究对CPN结扎后第13 d的小鼠的焦虑和抑郁样行为进行评估。在高架十字迷宫实验中，对小鼠进入开臂及闭臂的总次数进行分析，结果发现CPN结扎组和SHAM组没有显著性差异，说明CPN结扎没有损伤小鼠的运动功能，从而排除运动功能损伤对实验结果造成的误差。继而采用高架十字迷宫及强迫游泳实验对小鼠的焦虑和抑郁样行为进行检测，结果显示，小鼠在高架十字迷宫中进入开臂时间百分比和进入开臂次数百分比都显著低于SHAM组，说明CPN结扎能够让小鼠产生焦虑和抑郁样行为；同时CPN结扎小鼠在强迫游泳实验中的不动时间显著高于SHAM组，这说明CPN结扎使小鼠在强迫游泳实验中表现出了典型的抑郁症特征—行为绝望。

以往的研究表明，外源性大麻素能够抑制多巴胺、去甲肾上腺素及5-HT的重吸收，这意味着外源性大麻素具有抗焦虑和抑郁的作用。同时有临床证据表明，神经病理性疼痛病人服用Δ9-THC后，疼痛及焦虑、抑郁症状有所减轻[6]；另外还有研究发现阻断CB1信号后将会对情绪起到负调控作用，一个典型的例子就是，2006～2008年期间欧洲广泛使用CB1受体阻断剂利莫那班来治疗肥胖和代谢性综合征，虽然该药物对治疗肥胖和代谢性综合征具有很好的治疗效果，但是会导致病人产生焦虑和抑郁等精神疾病[16]。通过动物研究则进一步表明，CB1受体敲除小鼠在部分坐骨神经结扎模型4～7周后产生了焦虑和抑郁样行为，这说明大麻素系统在神经病理性疼痛引起的情绪疾病中起着保护性作用[17]。本研究结果显示，外源性大麻素HU210能够缓解CPN结扎引起的焦虑和抑郁样行为，这可能为由神经病理性疼痛引起的情绪异常的治疗提供新思路。

图5 VLO中锥体神经元的自发放电活动(±SEM)(A)左侧为神经元的放电原始图，右侧为相应神经元的放电间隔直方图，a：SHAM组，b：CPN组，c：baseline，d：HU210；(B)动作电位波形；(C) CPN组 (n=49)和SHAM组 (n=50) VLO中锥体神经元的放电速率；(D) CPN结扎后，腹腔注射HU210 (n=8) 对VLO锥体神经元放电速率的影响； ##P＜0.01，CPN组与SHAM组比较（独立样本t检验）；*P＜0.05，与基础放电频率比较（配对样本t检验）Fig.5 Spontaneous firing activities of VLO pyramidal neurons (±SEM)(A)The left side is the original firing diagram of a neuron.The right side is the inter-spike interval histogram of the corresponding neuron.a: SHAM group,b: CPN group,c: baseline,d: HU210; (B)Waveform of action potential; (C)Firing rates of pyramidal neurons of CPN (n=49) and SHAM (n=50) group in the VLO; (D)Effect of intraperitoneal injection of HU210 (n=8) on the Firing rate of VLO pyramidal neurons; ##P＜0.01,CPN group compared with the SHAM group(Independent-Samples t Test); *P＜0.05，compared with baseline firing rate (Paired-Samples t-test).

研究显示，VLO广泛参与认知、情绪、记忆、疼痛等各种生理活动。有研究报道，神经病理性疼痛小鼠mPFC中的锥体神经元的活动减弱[10]。目前的观点普遍认为，疼痛和抑郁共存，疼痛可以导致情绪异常，异常的情绪反过来又会加重疼痛感觉，因此疼痛和抑郁情绪的调节可能存在相似的神经机制。本研究结果也显示，CPN结扎后，VLO中大部分锥体神经元的放电频率显著降低，与SHAM组相比有显著性差异。因此，我们推测CPN结扎引起的情绪异常可能与VLO中锥体神经元活动的改变有关。为了探究外源性大麻素HU210缓解CPN结扎引起焦虑和抑郁样行为的机制，我们采用在体细胞外记录已经证实腹腔注射20 μg/kg HU210 能够显著增加VLO锥体神经元的放电频率。本研究使用腹腔注射HU210引起VLO中锥体神经元的放电频率增加，其效果可能不仅限于VLO，因为在其他脑区也存在大麻素受体，Robinson等[18]在大鼠海马CA3和CA1区发现腹腔注射HU210可以引起该脑区内锥体神经元放电异常，同时我们运用药理学方法证明VLO定位注射200 ng HU210后能够缓解神经病理性疼痛引起的焦虑和抑郁样行为，与腹腔注射HU210结果一致，提示VLO中锥体神经元可能参与了HU210缓解神经病理性疼痛引起的焦虑和抑郁样行为，但也不排除其他脑区中的锥体神经元发挥了一定的作用。根据以往文献报道，越来越多的研究表明，谷氨酸和GABA能信号在慢性痛相关的抑郁症中起着重要的作用，例如NMDA受体阻断剂（氯胺酮）减弱了SNI引起的抑郁样行为[15]；激活AMPA受体易化了NAc中谷氨酸能传递，从而减弱了神经病理性疼痛诱发的抑郁样行为[19]。CB1受体参与调节GABA能信号在伤害感受和情绪中的加工都有报道[20]。另外，CB1受体高度表达在大脑皮层GABA能神经元突触前膜[21]，CB1受体的激活会抑制钙通道，活化钾通道，从而抑制了神经递质的释放[22]。因此，我们推测外源性大麻素HU210缓解神经病理性疼痛引起的焦虑、抑郁样行为很有可能是通过激活VLO中GABA能中间神经元上的CB1受体，去抑制锥体神经元的活动来调节神经病理性疼痛引起的焦虑、抑郁样行为，该结论还有待进一步研究。

综上所述，本研究的结果提示：外源性大麻素HU210可能通过增加VLO锥体神经元的活动参与调节神经病理性疼痛引起的焦虑、抑郁样行为。本研究的发现为慢性痛诱发焦虑和抑郁疾病的治疗提供了线索。