超高压液相色谱-串联质谱法测定茶及茶饮品中解热镇痛药物

丁建兰，黄 宁，黄恩堂，赵 超

（鹰潭市综合检验检测中心，江西 鹰潭 335000）

常见解热镇痛类药物有美洛昔康、萘普生、双氯芬酸钠等，在一些茶及茶饮品中存在非法添加此类化学药物的现象。由于非法添加行为的隐蔽性，给饮用者带来了药量叠加的中毒风险、药物残留隐患，并可通过食物链传递，对人体健康造成严重危害。为了打击非法添加的违规行为，本文参考有关文献[1-10]，研究建立了茶及茶饮品中非法添加解热镇痛类药物的检测方法。

1 仪器与试药

Agilent 6460三重串联四级杆液质联用仪（配MassHunter软件、电喷雾离子源）；KQ-500DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；MSE224S-1CE-DU电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。

对照品均来源于中国食品药品检定研究院，供试品均为市场上购得；甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

精密称取对乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康、双氯芬酸钠各10 mg分别置入100 ml量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取上述对照品储备液各1 ml，置入同一100 ml量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的配制

取研磨后混匀的茶叶或摇匀的液体饮料0.5 g，精密称定，置入25 ml量瓶，加入甲醇约18 ml，超声15 min，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.22 μm, 尼龙膜），取续滤液，供液相色谱-质谱联用仪分析。除不加试样外，均按试样同法操作，作为空白溶液。

2.3 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）； 流速：0.3 ml/min；柱温：25 ℃；进样量：1 μl。流动相：0.5 %的甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～16 min，97 %A～38 % A；16～17 min，38 % A～97 % A；17～20 min，97 % A）。

2.4 质谱条件

离子源为电喷雾离子源（ESI），干燥气温度300 ℃，干燥气流速11 L/min, 扫描方式为多反应监测模式（MRM），扫描模式为正离子模式，毛细管电压4000 V；7种化合物定性、定量离子和质谱分析参数参考值见表1。

2.5 方法学研究

表1 7种化合物定性、定量离子和质谱分析参数

2.5.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液适量，用甲醇稀释制成不同浓度系列的标准工作溶液（临用新配），按上述色谱条件，分别进样测定，结果见图1；以浓度（C）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，具体线性关系参数见表2。结果表明，各化合物线性关系良好。

图1 混合对照品色谱图

表2 7种化合物线性关系

2.5.2 精密度试验 取0.1 μg/ml的混合对照品溶液，按上述色谱条件测定，重复进样6次，测得对乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康和双氯芬酸钠的峰面积的RSD值分别为0.8 %，1.1 %，1.8 %，2.7 %，1.6 %，2.4 %，4.1 %，均小于5 %，结果表明，仪器进样精密度良好。

2.5.3 稳定性试验 取加了混合对照品的供试品溶液，分别于配制0，2，4，8，12 h后，按上述色谱条件测定，测得对乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康和双氯芬酸钠的峰面积的RSD值分别为2.1 %，0.8 %，1.4 %，2.7 %，1.7 %，2.7 %，2.3 %，结果表明，对照品溶液至少在12 h内稳定。

2.5.4 重复性试验 取加了混合对照品的供试品溶液，按上述色谱条件测定，重复进样5次，测得对乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康和双氯芬酸钠的峰面积的RSD值分别为0.7 %，1.0 %，1.6 %，2.3 %，1.5 %，2.1 %，2.5 %，均小于5 %，结果表明，方法重复性好。

2.5.5 回收率试验 精密称取阴性的研磨后混匀的茶叶0.5 g，共9份，分别精密加入对乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康和双氯芬酸钠低、中、高不同的量，按供试品溶液的制备方法和上述色谱条件，分别进样测定，测得乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡罗昔康、萘普生、美洛昔康和双氯芬酸钠平均回收率分别为99.12 %，98.57 %，98.43 %，97.65 %，98.13 %，96.14 %，95.25 %，RSD值分别为0.7 %，1.5 %，1.3 %，2.1 %，1.7 %，2.2 %，2.9 %。

2.5.6 专属性试验 取加了混合对照品的供试品溶液，按上述色谱条件质谱扫描，将扫描的质谱图与对照品溶液的质谱图进行比对，结果显示匹配度98 %，表明样品中的相关物质对目标物的测定不产生干扰，该方法专属性良好。

2.5.7 检出限 取对照品储备液适量，稀释至不同浓度，按上述色谱条件，分别进样测定，可得到信噪比为3：1的色谱峰，即对乙酰氨基酚的检出限为4 ng/ml，氨基比林、安替比林、吡罗昔康、美洛昔康的检出限为10 ng/ml，萘普生和双氯芬酸钠的检出限为12 ng/ml。

2.6 样品测定

取不同产地、不同品种的茶叶及茶饮品，按供试品溶液的制备方法及上述色谱条件测定，结果见图2、图3及表3。

图2 加标样品色谱图

图3 阴性样品色谱图

表3 茶叶及茶饮品中解热镇痛类药物测定结果

3 讨论

本文考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-甲酸溶液/乙酸溶液、乙腈-甲酸溶液/乙酸溶液等不同流动相中各组分的分离效果，以及水、甲醇、乙醇等不同的提取溶剂；最终确定甲醇为提取溶剂，流动相为0.5 %的甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～16 min，97 % A～38 % A；16～17 min，38 %A～97 % A；17～20 min，97 % A）；该方法样品前处理简单，分析速度快，灵敏度、准确度、精密度和稳定性良好，能满足检测要求，可用于茶及茶饮品中非法添加解热镇痛药物的检测。