祛湿健脾颗粒薄层鉴别研究※

2019-12-17方春雪高梓漠王法宇杨文广高金良李庆杰

中国中医药现代远程教育 2019年22期

方春雪高梓漠王法宇杨文广高金良* 李庆杰*

（1 长春中医药大学附属医院中医药研究中心，吉林长春 130021；2 南昌大学玛丽女王学院临床医学系，江西南昌 330000；3 北京卫生职业学院中药与康复系，北京 100053；4 长春中医药大学附属医院风湿科，吉林长春 130021）

类风湿性关节炎是一种涉及人体全身多个关节的慢性疾病，西医治疗药物主要有水杨酸类和免疫抑制剂，容易出现胃肠道反应，且需要密切观察患者的血液系统变化所引起的不良反应。目前，中医治疗具有明显改善症状、减轻痛苦，不良反应小的特点，对治疗类风湿性关节炎有很好的疗效。

“祛湿健脾颗粒”是我院治疗类风湿性关节炎的院内制剂，本方在临床上应用多年，具有良好的疗效且不良反应小，患者反馈良好，因此继续开发其制剂，将有广阔的前景。本文旨在进一步研究其薄层鉴别方法，并且形成一套完整合理的标准，为以后临床安全用药提供保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器仪器与试剂：瑞士卡玛的薄层色谱扫描仪（CAMAG TLC SCANNER3）；昆山市超声波仪器有限公司生产的超声波清洗机（功率250 W 和频率20 KHZ）。

1.2 试药试药由中国药品生物制品检定所提供；薄层色谱硅胶G 板为青岛海洋化工厂生产，试验用水选用娃哈哈纯净水，试剂均为分析纯。见表1。

表1 试药名称及批号

2 方法与结果

2.1 黄芪鉴别取7.5 g 本品的粉末，向粉末中加入37.5 mL甲醇，置于超声仪中超声20 min。用滤纸过滤后，将滤液放在水浴锅上，调节合适的水浴温度，过滤液蒸发至干，向残留物质中加入20 mL 水使其溶解，用饱和正丁醇与溶解的物质一起振摇，每次20 mL，洗3 次，将正丁醇液合并，并用正丁醇饱和氨水洗涤，每次20 mL，洗3 次，取正丁醇层放在水浴锅上，调节合适的水浴温度，过滤液蒸发至干，向残留物中加入1 mL 甲醇，使溶液充分溶解，得到试验用溶液。另取1 g 黄芪对照药材，加入10 mL 甲醇，置于超声波系统中20 min，然后用滤纸过滤，将滤液置于水浴锅上使其完全蒸发，向残留物中加入1 mL 甲醇，使对照药材的溶液充分溶解。根据处方比，制备阴性样品，其中不含黄芪，并根据供试溶液的制备方法获得阴性样品溶液。参照薄色谱法试验，配三氯甲烷∶甲醇∶水三者比例为13∶7∶2 的混合溶液，将下层溶液用做展开试剂，然后风干，制备10% 硫酸乙醇溶液并均匀喷涂在薄层色谱板上，将烘箱温度调节至105 ℃进行烘烤，观察至斑点清晰可见然后取出，在紫外灯（365 nm）下观察结果［1-2］。对照品及对照药材薄层色谱与供试品的斑点颜色相同，并且在相同位置，阴性样品不会引起干扰，分离良好且可重复。结果见图1。

2.2 甘草鉴别取本品粉末22.4 g，加入112 mL 甲醇至粉末中。置于超声系统中30 min，用滤纸过滤，并将滤液置于水浴上。调节适当的水浴温度，蒸发至干，加入15 mL 水溶解，用乙醚摇匀，每次20 mL，3 次后，把乙醚合并到一起，备用；用乙酸乙酯振摇萃取水溶液，每次加入20 mL，3 次，合并乙酸乙酯溶液。蒸发至干燥向残余物质中加入1 mL 甲醇，并充分溶解，得到试验溶液。另外，取1.0 g 甘草对照药材，参考供试品溶液方法操作获得对照药材溶液。依据处方比制备阴性样品，样品中无甘草，参考供试品溶液方法获得阴性样品溶液。按照薄色谱法试验，配三氯甲烷∶甲醇∶水三者比例为13∶7∶2 的混合溶液，完全混溶，将下层溶液分离为薄层展开剂，充分展开后风干，准备10% 硫酸乙醇溶液，在薄层色谱板上均匀喷雾，并在105 ℃的烘箱中烘烤，观察斑点清晰显现，取出后在紫外灯（365 nm）下观察结果［3-5］。对照品及对照药材薄层色谱与供试品的斑点颜色相同，并且在相同位置，阴性样品不会引起干扰，分离良好且可重复。见图2。

2.3 白芍鉴别黄芪的试验溶液可作为白芍试验溶液。取1 g 白芍，加入10 mL 甲醇，置于超声波系统中20 min，用滤纸过滤，将滤液置于水浴上，调节水浴温度，将滤液蒸发至干。向残余物中加入1 mL 甲醇，使其充分溶解，作为参比药材溶液。根据处方比制备阴性样品，样品不含白芍，参照供试品溶液法操作即得白芍阴性样品溶液。依照薄色谱法试验，配制三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸4 种物质比例为40∶5∶10∶0.2 的混合溶液，完全溶解，用作薄层展开剂，展开并风干后用5% 香草醛硫酸溶液喷涂在薄层色谱板上，置于烘箱中，加热并在105 ℃下烘烤，观察薄层色谱板上的斑点清晰出现，取出后在日光下观察结果［6-7］。对照品及对照药材薄层色谱与供试品的斑点颜色相同，并且在相同位置，阴性样品不会引起干扰，分离良好且可重复。见图3。

2.4 青风藤鉴别取8 g 本品，向其中加入40 mL 甲醇，并在超声系统中超声处理20 min，用滤纸过滤，将滤液放在水浴锅上，调节合适的水浴温度，把过滤液蒸发至干，溶于20 mL 水中，用碱性试液浓氨水把溶液的pH 值调到10 左右，然后用二氯甲烷萃取，每次用量为20 mL，3 次后，合并二氯甲烷层。通过用1 mL 甲醇溶解残留物质获得试验溶液。取1 g 青风藤对照药材，用20 mL 甲醇超声处理20 min，过滤后的滤液置于水浴锅上，调节适当水浴的温度，将过滤液蒸发至干，加1 mL 甲醇溶解，得到对照药材溶液。根据处方比制备出青风藤的阴性样品，样品中不含有青风藤，取青风藤阴性样品，照供试品溶液制备方法操作得阴性样品溶液。参照薄层色谱法试验，依次取5 μL 上述三种溶液，点样在同一个硅胶G薄层板上，制备三氯甲烷∶甲醇∶水比例为13∶7∶2 的混合溶液，完全混溶，使用下层溶液当展开剂展开，然后风干，把10% 硫酸乙醇溶液均匀喷在薄层色谱板上，置于烘箱中，在105 ℃下烘烤，直至薄层色谱板上的斑点可清晰分辨，取出后在日光下观察结果。对照品薄层色谱与供试品的斑点颜色相同，并且在相同位置，阴性样品不会引起干扰，分离良好且可重复。见图4。