液相色谱串联质谱法测定草莓中3种农药残留量

吕燕　汪旭波　童越敏

摘 要：

本文建立了同时快速测定草莓中3种农药的液相色谱-串联质谱检测方法。乙腈提取草莓样品，多壁碳纳米管净化出的净化液经液质联用法测定，以多反应监测（MRM）方式采集数据，外标法定量。在5～500μg/L范围内3种农药均具有良好的线性关系（线性回归系数r>0.99）;在3个不同浓度添加水平下，3种农药的平均回收率为78.9%～103.7%，RSD为1.5%～6.5%，本方法的定量限为0.10～0.50μg/kg。该方法简便、快捷、准确、重现性好、灵敏度高，适用于草莓中3种杀菌剂的同时检测。

关键词：

液相色谱-串联质谱仪;草莓;农药残留

中图分类号：S-3

文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191130007

基金项目：宁波市科学技术局科技惠民项目“动物性食品中头孢类药物残留检测技术与方法研究”（项目编号：2017C50014）;宁波市科学技术局农业领域重大专项“宁波特色农产品质量安全风险评估及预警技术研究”（项目编号：2015C110004）;宁波市科学技术局社发领域重大科技专项“粮谷中有毒有害物质分析关键技术研究与应用”（项目编号：2016C51002）

草莓是我国的一种主要水果品种，大部分农户采用大棚覆膜的方式种植草莓，大棚环境内温湿度高，高温多湿又极易引起病虫害的发生。草莓果实含糖量高、多汁肉嫩，极易感染灰霉病（Botrytis cinerea），感病率高达60%以上，一旦被感染，果实很快就会腐烂， 连花蕾都不能幸免，严重降低草莓的品质和产量。长期以来，我国对灰霉病的防治方法进行了大量的研究，也取得了不小进展，但缺少系统性的综述报道，尤其缺少相关防治效果及其残留情况的研究。本文主要研究了氟菌唑、啶酰菌胺、醚菌酯同时作用于草莓中，能够达到预想的抑菌效果。不过，虽然该类药物毒性低，但氟菌唑对眼睛黏膜会有轻度刺激，长期接触可能引起肝肾毒性，而且现在社会对食品安全问题也很重视，为了公民健康，老版的GB2763-2016《食品中农药最大残留限量》虽然规定了啶酰菌胺、醚菌酯在草莓中的残留限量，却没有氟菌唑在草莓中的限量，现行的国标方法GB/T 20769也并未涵盖此药，刚刚出台的GB2763-2018《食品中农药最大残留限量》报批稿虽然将氟菌唑纳入了，但其残留限量还只是临时限量，而且目前鲜有同时分析这3种杀菌剂在草莓中残留分析方法的报道，因此建立方便快捷的草莓中3种杀菌剂残留量分析方法已是迫在眉睫。

蔬菜水果中多农残检测技术目前虽有不少相关报道，使用的仪器方法也都不外乎是气相色谱法[1-3]、气质联用法[4，5]和液相色谱-串联质谱法[6-8]、液相色谱法[9-12]和气相色谱-串联质谱法[13]等;而鲜有报道如本文所研究的同时测定草莓中3种农药的方法。

本文在已有研究的基础上建立了同时测定草莓中3种农药残留的检测方法，其灵敏度、精密度和定量限等相关参数均符合残留分析要求。日后也将对3种农药在草莓和土壤中的降解和最终残留量情况进行研究，为我国3种农药在草莓中的风险评估提供可靠的数据依据和支持。

1 实验部分

1.1 试剂与标品

甲醇、乙腈均为默克色谱纯;甲酸为阿拉丁色谱纯;氯化钠为国药集团化学试剂有限公司分析纯。多壁碳纳米管XFM1（南京先丰）、PSA（天津博纳科技有限公司）和C18（Agilent）;氟菌唑（Triflumizole）、啶酰菌胺（Boscalid）、醚菌酯（Kresoxim-methyl）标准品：1000mg/L（介质为乙腈），德国Dr;所用草莓来源于本地超市、农贸市场。

1.2 仪器

Waters XEVO TQ液质联用;IKA T25匀浆机;SIGMA 3K15离心机;N-EVAP氮吹仪。

1.3 标液的配制与贮存

介质为乙腈的氟菌唑、啶酰菌胺、醚菌酯标准储备液（1000mg/L）避光-18℃储存，使用前用乙腈将储备液逐级稀释至1.0 mg/L，然后用草莓基质稀释至所需浓度。

1.4 分析方法

1.4.1 提取

称取5g（精确至0.01g）匀浆后的草莓样品于50mL聚四氟乙烯带盖离心管中，加入20mL乙腈，13000r/min匀浆60s，后盖盖震荡提取1min，再加入3g氯化钠剧烈震荡30s后9500r/min离心5min，上层有机相待净化。

1.4.2 净化

取1.4.1中有机相5.00mL于装有20mg多壁碳纳米管的10mL具塞离心管中，盖盖振荡净化2min后，9500r/min离心5min;取4.00mL上清液于40℃水浴中氮吹至近干，用0.5mL0.1%甲酸水溶液和0.5mL乙腈溶解涡旋混匀，过膜，供液质联用测定分析。

1.5 仪器方法

1.5.1液相部分

液相分离柱：waters UPLC BEH C18MVK（2.1mm×100mm， 1.7μm）;柱温：40℃;流动相：A相为乙腈+ B相为0.1%甲酸水溶液（具体洗脱程序详见表1）;进样量：10μL。

1.5.2 MS部分

电离模式： ESI+（电喷雾离子源）;多级反应监测（MRM） ;離子源温度150℃;毛细管电压2.5kV;雾化温度500℃;脱溶剂气流速1000L/h;碰撞气流速50L/h;锥孔电压30V;RF透镜电压0.35V;倍增电压650V;3种农药的定性定量离子对等参数详见表2。

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择

因为草莓含糖量高、水分又多，为能够更充分地提取待测药物，实验中考虑用有机溶剂作提取液，而该有机溶剂选择了能够与水互溶的甲醇、乙腈。经过多次尝试分析发现，虽然甲醇的提取效果不错，但没有可行的方法能够分离出来草莓中大量的水分;而用乙腈不仅具有良好的提取效果，而且能用简单的盐析法除去大量的水分，以得到需要的有机相。因此，确定乙腈为最终提取溶剂。