去甲斑蝥素钠小鼠体内组织分布研究

崔向珍 郑雪凌 孙静 丁新丽

【摘要】本文建立快速灵敏的HPLC-MS/M方法测定血浆和组织中去甲斑蝥素钠的浓度，研究去甲斑蝥素钠小鼠体内组织分布。

【关键词】去甲斑蝥素钠 体内组织 分布

1实验方法

1.1仪器与试药

仪器Agilent 1200 Series/6410 Series HPLC/MS/MS高效液相色譜/质谱仪（安捷伦科学技术公司）;梅特勒-托利多AX -205电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）;PROIND离心机（贺立氏）;XW-80A型旋涡混合器（上海精科实业有限公司）;PK514BP超声清洗器（德国BANDEL），BHW-IV型电热恒温水温箱（北京医疗设备厂）。

药品 去甲斑蝥素钠，实验室自制，纯度99.4%;去甲斑蝥素标准品由山东莒南制药厂提供;利巴韦林标准品（纯度），中国药品生物制品检定所。

试剂乙腈，批号501287;乙酸铵，批号110020;甲酸，批号406014;丙酮，批号405160均为色谱纯，美国TEDIA COMPANY，INC生产。

标准溶液的制备 去甲斑蝥素钠和利巴韦林储备液及标准系列的配制同前。

1.2实验动物

昆明种小白鼠，体重25±2克，雌雄各半，购于山东大学实验动物中心。

1.3实验设计

于给药后0.25，1，2，4，8 h经摘眼球取血后脱颈处死小鼠，取出心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、胃、睾丸/子宫，组织用生理盐水冲洗干净后用滤纸吸干，-20℃保存待测。

1.4样本分析

色谱条件C18色谱柱（150×4.6 mm，5 （m）;流动相乙腈-水（20：80，2 mM乙酸铵，含0.1%甲酸）;在线脱气，流速1.0 mL·min-1;柱温25℃;进样量10μL。

质谱条件 AP-ESI离子源，正离子模式，干燥气（N2）流速12.0 L·min-1，干燥气压力50 psi，干燥气温度为350℃，毛细管电压4000 V，多级反应监测（MRM）模式，选择性离子对（M/Z）为169→123（去甲斑蝥素钠）和267.1→135.1（内标利巴韦林），碎片电压分别为120 V和170 V，碰撞能分别为5 eV和13eV。

组织样品处理 取动物脏器，精密称重，剪碎后按2 mL·g-1比例加入生理盐水，冰浴条件下用组织匀浆机进行匀浆。取组织匀浆液0.3 mL，置离心管中，加10 （g·mL-1利巴韦林溶液30 （L（心、脾、脑组织加1 （g·mL-1利巴韦林溶液30 （L），涡旋30秒，加入100 （L 1MHCl，涡旋30秒，然后加入1 mL丙酮涡旋1 min，5000r·min-1离心10 min，取上清液1 mL置离心管中，40℃氮气吹干，残留物用100 （L水复溶，取10 （L进样测定。

1.5数据处理

组织分布参数计算根据计算得到的组织中药物浓度-时间数据，计算药时曲线下面积AUC，MRT，结合Cmax、Tmax等参数考察药物在体内组织分布情况及动力学过程。

2结果

2.1组织称重及处理

将给药后0.25，1，2，4，8 h采集的组织样本经生理盐水冲洗，滤纸吸干后用电子天平精密称量，称重原始数据。

2.2小鼠组织中去甲斑蝥素钠浓度-时间数据

根据HPLC-MS/MS法测定得到的组织中去甲斑蝥素钠的浓度和精密称量的组织重量，计算每克组织中药物含量（μg·g-1）=C测×V/W称，其中C测为测定得到组织匀浆中去甲斑蝥素钠浓度（μg·mL-1）;V为所加生理盐水体积（mL）;W称为组织重量。

由结果看出，小鼠灌胃给予去甲斑蝥素钠溶液后，在各组织中分布广泛，给药后不同时间点各组织中药物浓度依次为：0.25h，小肠>子宫>胃>肾>睾丸>肝>肺>心>脾>脑;1h，胃>小肠>子宫>肾>肝>睾丸>肺>心>脾>脑;2h，小肠>胃>子宫>肾>睾丸>肝>脾>肺>心>脑;4h，肾>小肠>肝>子宫>胃>睾丸>肺>心>脾>脑;8 h，小肠>子宫>胃>肝>睾丸>肾>肺>脾>心>脑。

2.3组织中药物浓度-时间分布图

根据各组织平均浓度-时间数据绘制组织中药物浓度-时间分布图。

由结果可知，除脾脏是1 h达峰外，去甲斑蝥素钠在其他组织均在15 min达到最高浓度，然后随时间逐渐降低;给药后4 h，在心、肝、肺、肾的浓度再次升高，随后降低;而脑、胃、睾丸、子宫随时间浓度逐渐降低。

去甲斑蝥素钠在肠、胃和子宫的分布最高，肾和睾丸次之，在心、肝、脾和肺的分布较低，脑中药物量极低。

2.4组织药-时曲线下面积和平均滞留时间数据

根据DAS 2.0计算小鼠灌服去甲斑蝥素钠溶液后各组织药-时曲线下面积（AUC）和平均滞留时间（MRT），以AUC为指标进一步分析去甲斑蝥素钠在小鼠组织的分布，以MRT为指标分析去甲斑蝥素钠在小鼠组织的消除情况。

由结果可知，给药后各组织药时曲线下面积依次为：小肠>胃>子宫>肾>睾丸>肝>肺>脾>心>脑。给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺>肝>睾丸>脑>脾>肾>子宫>心>胃>小肠。

3讨论

给药后各组织药时曲线下面积依次为：小肠>胃>子宫>肾>睾丸>肝>肺>脾>心>脑。给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺>肝>睾丸>脑>脾>肾>子宫>心>胃>小肠。由此可以看出，去甲斑蝥素钠在胃、小肠等消化道组织中分布最高，为其在消化道癌症的临床应用提供药动学理论依据;其次，子宫中去甲斑蝥素钠的分布较多，体外实验证实去甲斑蝥素对宫颈癌（HeLa）具有较强的抗癌作用，但临床在子宫癌或宫颈癌的应用较少，可以此为理论基础增加其临床适应症;去甲斑蝥素钠在肾中的分布仍较高，临床表现为泌尿系统刺激性;去甲斑蝥素钠在临床主要用于肝癌的治疗，但实验结果表明肝中去甲斑蝥素钠的浓度较低;药物在睾丸、肺、脾、心和脑的分布较低，特别是脑组织中的浓度极低，说明其不易透过血脑屏障，与其极性大、脂溶性低有关。

给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺>肝>睾丸>脑>脾>肾>子宫>心>胃>小肠，其在肺和肝中的滞留时间较长，消除比较慢，可以增强药物的疗效，因此临床常用于肝癌的治疗。

从两项结果可以看出，去甲斑蝥素钠在分布较高组织滞留时间较短，分布较低的组织滞留时间较长，决定其在临床上作用广泛。

参考文献：

[1]董成.3H-去甲基斑蝥素在小鼠体内分布的研究[J].江西医学院学报，1984（1）：24-25.

[2]魏春敏，王本杰，马娅等.3H-去甲斑蝥素小鼠体内药代动力学与组织分布[J]. 药学学报，2007，42（5）：516–519.