2016～2017年山东省三种亚型猪流感血清学调查

肖一红，王玉超，彭 涛，孙法超，古金元，马梓承，王宏宇，孟凡亮，李宝全，刘思当

（山东农业大学动物科技学院 山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室，泰安 271018）

猪流行性感冒简称猪流感（swine influenza,SI），是由猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV）感染猪引起的一种急性、热性和高度接触性呼吸道传染病。猪流感属于人畜共患病，并且猪的上呼吸道同时含有人流感病毒和禽流感病毒受体[1]。若人流感病毒和禽流感病毒同时感染猪，两种流感病毒很有可能在猪的体内发生基因重配，从而产生新的病毒株[2]。人群往往对重配的新病毒没有免疫力，从而有可能导致流感大流行。因此，对猪流感进行流行病学调查具有重要的公共卫生意义，可为动物与人流感大流行的预测和猪流感疫苗的研发提供依据。

1 材料和方法

1.1 主要试剂类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（2009/H1N1）和H3N2亚型SIV抗原均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室提供。

1.2 样品来源2016年7月到2017年12月在山东省各市区养殖场，采集未免疫猪流感疫苗的血清共7000份，具体见表1。

1.3 血凝抑制检测（HI）参照国标GB/T27535-2011推荐的方法处理血清样品，以去除血清中的非特异性抑制因子。根据相应抗原的HA效价配制4 HAU的抗原，以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI效价[3]。HI效价≥1∶10，判定为阳性。

2 结果与讨论

2.1 三种亚型猪流感病毒血清学检测结果用类禽型猪H1N1（EA H1N1）SIV、2009甲型H1N1（2009/H1N1）SIV和H3N2亚型SIV为标准抗原，对7000份血清进行检测。检测结果显示3种猪流感亚型抗体总阳性率为63.79%，其中EA H1N1亚型SIV抗体阳性率为56.31%，2009/H1N1亚型SIV抗体阳性率为24.61%，H3N2亚型SIV抗体阳性率为1.61%（表1）。

表1 2016～2017年山东省三种亚型猪流感病毒血清学抗体阳性率Table 1 Antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV in Shandong province from 2016 to 2017

2.2 三种亚型猪流感病毒血清学抗体阳性重复率检测过程中发现在同一份血清中可同时检测到两种或两种以上的猪流感亚型的抗体，EA H1N1亚型SIV和2009/H1N1亚型SIV抗体阳性重复率为17.34%，EA H1N1亚型SIV和H3N2亚型SIV抗体阳性重复率为1.29%，2009/H1N1亚型SIV和H3N2亚型SIV抗体阳性重复率为0.89%，EA H1N1亚型SIV、2009/H1N1亚型SIV与H3N2亚型SIV抗体阳性重复率为0.76%。

2.3 2016年下半年至2017年各季度三种亚型猪流感抗体阳性率检测结果显示，EA H1N1亚型SIV抗体阳性率总体处于上升的趋势，并且在2017年第三季度达到最高；2009/H1N1亚型SIV抗体阳性率则是先上升后下降；H3N2亚型SIV抗体阳性率也是先上升后下降，变化趋势基本与2009/H1N1亚型SIV抗体阳性率的变化趋势相吻合（图1）。

图1 2016～2017年各季度三种亚型猪流感抗体阳性率变化图1 Seasonal changes of antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV during 2016-2017

2.4 不同猪场中三种亚型猪流感血清学检测结果2016年下半年至2017年累计检测117个猪场的猪流感血清抗体。检测结果显示，EA H1N1亚型SIV在不同猪场间的抗体阳性率为0～97.78%；2009/H1N1亚型SIV在不同猪场的抗体阳性率为0～100%；H3N2亚型SIV在不同猪场的抗体阳性率为0～16.67%（表2）。检测到EA H1N1亚型SIV抗体存在的猪场为115个，占所检测猪场的98.29%；检测到2009/H1N1亚型SIV抗体存在的猪场为107个，占所检测猪场的91.45%；检测到H3N2亚型SIV存在的猪场为49个，占所检测猪场的41.88%。在所检测的117个猪场当中，有21个猪场的2009/H1N1亚型SIV抗体阳性率高于EA H1N1亚型SIV的抗体阳性率。

在调查的117个猪场中，EA H1N1亚型SIV抗体阳性率在60%以上的猪场为38个，占所调查猪场的32.48%；EA H1N1亚型SIV抗体阳性率在40%以上的猪场有74个，占所调查猪场的63.25%；EA H1N1亚型SIV抗体阳性率小于20%的猪场有13个，占所调查猪场的11.11%，说明绝大部分的猪场EA H1N1的抗体阳性率处于一个相对较高的水平。在调查的117个猪场中，2009/H1N1亚型SIV抗体阳性率在40%以下的猪场有94个，占所调查猪场的80.34%，说明绝大部分猪场中，2009/H1N1的抗体阳性率处于一个相对较低的水平。

对采集的样品用EA H1N1、2009/H1N1和H3N2亚型SIV抗原进行检测，结果显示，EA H1N1亚型SIV的抗体阳性率最高，其次为2009/H1N1亚型SIV，而H3N2亚型SIV的抗体阳性率较低，表明山东省猪群中H1亚型毒株具有一定的流行优势，这与其他文献报道的检测结果基本一致[4-6]。

表2 各猪场H1N1抗体阳性率分布情况Table 2 Distribution of antibody positive rate of H1N1 SIV

不同国家和地区流行的猪流感病毒类型不尽相同。自从1918年猪流感首次爆发以来，一直到20世纪90年代，北美地区流行的猪流感毒株都是以古典猪流感病毒为主，基本没有变异情况的发生。1979年研究人员发现EA H1N1的亚型SIV，欧洲SIV的进化速度开始发生变化。在北美地区则是从1998年发现1株三源重配H3N2亚型SIV开始，并且大部分的变异情况都是以基因重配为主。美国近年来发生多次人感染猪流感的事件，并且多以禽-人-猪三源重配的H1和H3亚型为主[7-9]。经过基因重配的SIV，含有禽、猪或人流感病毒的基因，在选择优势和跨种传播能力明显比单纯的猪流感病毒更强。在我国，猪群中流行的猪流感毒株主要是H1和H3亚型。本次调查结果表明，EA H1N1亚型SIV是目前临床上的优势流行毒株，这种流行不仅表现在同一个猪场中，也表现在不同的猪场中以及不同季节中。研究发现2017年第4季度EA H1N1亚型SIV抗体有上升趋势，而2009/H1N1和H3N2亚型SIV抗体有下降趋势，这些抗体变化意味着临床上毒株流行情况发生变化，给SIV的监控提供了重要的线索。

在目前我国猪群尚未普遍使用猪流感疫苗的情况下，对其进行血清学监测很有必要。通过对猪流感流行情况的调查，对于追溯SIV的来源以及疫苗的研发生产具有十分重要的意义。猪流感的血清学监测需要持续采集大量的样品，掌握各个亚型猪流感的流行比例。将SIV的监测同人流感病毒与禽流感病毒的监测结合起来，密切关注其流行动态，对于动物健康和预防人流感的流行具有十分重要的意义。