p53、PTEN、p16、HER-2和Ki-67蛋白表达与子宫内膜癌的关系研究

石 岩，肖继辉

(临颍县人民医院病理科，河南 漯河 462600)

子宫内膜癌是常见妇科恶性肿瘤疾病，近年来发病率呈直线上升[1]。早期诊断及早期治疗是提高患者生存率及改善患者生活质量的重要手段。肿瘤发生的关键因素是患者体内基因的改变[2]，而子宫内膜癌标志物在子宫内膜癌中的表达可反映肿瘤的分期、转移以及浸润情况，因此临床上对子宫内膜癌组织中特异性标志物进行检测分析，有助于子宫内膜癌的临床早期诊断，更利于治疗过程中的疗效评估及预后分析。本研究就p53、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、p16、人类表皮生长因子受体-2(HER-2)和Ki-67在不同子宫内膜组织中的表达差异情况进行分析，总结上述几种标志物在子宫内膜癌临床诊治中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2016年5月至2018年4月在我院因子宫内膜癌进行治疗的65例病理组织样本作为研究对象纳入观察组，患者年龄35～75(49.83±6.74)岁。按照国际精准分型标准[3]，子宫内膜癌分级：Ⅰ期13例，Ⅱ期20例，Ⅲ期25例，Ⅳ期7例；细胞分化程度：G1期25例，G2期23例，G3期17例。所有患者全部经病理检查确诊为子宫内膜癌，未合并其他肿瘤。选取同期我院手术收集的正常子宫内膜组织32例作为研究对象纳入对照组，年龄28～70(47.42±7.56)岁。2组患者年龄比较差异无统计学意义(t=1.590，P>0.05)。

1.2 方法用免疫组化法检测各个指标的表达情况。其中一张切片用做HE染色病理组织学诊断，其余石蜡切片备做免疫组织化学用。检测具体步骤：样本使用前用甲醛进行固定，脱水后用石蜡切片进行包埋。将石蜡切片至于烘箱中，待其烘干后进行脱蜡处理。并用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2～3次，每次冲洗时长3 min。滴加体积分数3%双氧水(以消除内源性过氧化物酶的活性)，孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3 min。去除PBS后加入相应的第一抗体，室温孵育1.5 h。PBS冲洗2次，1次5 min。在每张切片上滴加增强子，孵育20 min。重复清洗步骤，PBS冲洗2次，1次5 min。每张切片加入酶标二抗(单克隆抗体)并孵育30 min。用PBS冲洗2次，1次5 min。最后用移液器吸取1 mL DNB Plus Substrate至1.5mL离心管中并加入2滴DNB Plus Chromogen 在混匀仪上震荡混匀(显色)1 min离心3 s后加入切片中。室温孵育10 min。冲洗后复染、脱水、封片。

1.3 结果判定免疫组化法分析的p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67阳性表达位于细胞核中，光学显微镜下随机观察计数100个细胞，细胞质为淡蓝色，阳性表达为棕褐色颗粒。

2 结果

2.1 2组患者p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67的阳性表达情况比较观察组p53阳性表达率显著高于对照组，而PTEN、p16、HER-2和Ki-67阳性表达率均明显低于对照组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 2组患者p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67的阳性表达情况比较 n(%)

2.2 子宫内膜癌组织中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67阳性表达与其病理特征的关系p53阳性表达与子宫内膜癌的临床分期有关(P<0.05)；PTEN、p16、HER-2和Ki-67阳性表达与子宫内膜癌的临床分期和分化程度有关(P均<0.05)。见表2、3。

表2 子宫内膜癌组织中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67阳性表达与其肿瘤分期的关系 n(%)

表3 子宫内膜癌组织中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67阳性表达与其肿瘤分化程度的关系 n(%)

3 讨论

随着早期诊断技术的发展及子宫内膜癌病理研究的深入，抑癌基因在子宫内膜癌的发生、发展中的作用已引起了广泛关注。既往研究中，p53、PTEN、p16、HER-2以及Ki-67在子宫内膜癌组织的表达情况已有相关研究进行分析，但几种标志物联合诊断分析的较少[4-5]。

野生型p53是一种抑癌基因，p53所携带的编码蛋白有着很重要的功能[6-7]，包括引起细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡、促进细胞分化等，其突变情况可以导致多种肿瘤的发生。本研究中65例子宫内膜癌的阳性表达率为50.76%，显著高于对照组。不同肿瘤细胞分化程度的p53阳性表达并无显著性差异(P>0.05)，但不同肿瘤分期下p53阳性表达差异显著(P<0.05)；这表明p53可以作为临床病理组织子宫内膜癌不同细胞分期的重要参考指标。

PTEN基因是一种具有双重磷酸酶活性的抑癌基因[8]，具有较好的抗肿瘤活性。本研究结果显示，观察组的PTEN基因阳性表达低于对照组，这说明PTEN基因的变异导致子宫内膜癌的发生。p16基因在很多恶性肿瘤中都有存在[9]。本研究结果表明，p16在正常的子宫内膜中都有不同的表达，观察组的p16阳性表达率明显低于对照组。这一研究表明p16的失活意味着子宫内膜癌的发生。因此，p16可以对子宫内膜癌的诊断及治疗有明确的指导作用。HER-2基因也是子宫内膜癌的一种肿瘤标志物，其表达与病理分期有着很大关联[10]。本研究数据发现，HER-2基因的异常表达在G3级最高，G1级最低。随着病理的升高，差异具有统计学意义。此外，从本研究数据同样可以看出子宫内膜癌中的ki-67指数同样高于正常子宫内膜指数，结果显示G3级最高，G1级最低。结合本研究总体数据，得出结论：PTEN、PTEN、p16、HER-2和Ki-67蛋白阳性表达与子宫内膜癌的临床分期以及分化程度有关。

综上所述，p53、PTEN、p16、HER-2和Ki-67在子宫内膜癌组织中存在异常表达，可作为子宫内膜癌临床诊断、治疗的观察指标。