慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能变化与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量之间的关系分析

马永虹

（郑州市第六人民医院 肝炎科，河南 郑州 450000）

T 淋巴细胞亚群具有维持机体免疫系统正常功能的重要作用，当各淋巴细胞亚群数量与功能发生变化时，人体的免疫功能就会出现紊乱，导致乙肝病毒携带者（hepatitis B virus carrier, ASC）、慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）、乙肝肝硬化（cirrhosis of liver,LC）和原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma, PHC） 等［1］疾病的发生。为此，本组研究将分析慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能变化与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）载量之间的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本组研究将本院2017 年1 月至2017 年12 月收治的100 例慢性乙型肝炎患者作为乙肝组（根据血清HBV-DNA 定量水平分为低拷贝组29 例与高拷贝组71 例，根据HBeAg 检测结果分为阳性组55 例与阴性组45 例），同时选取此期间进行健康体检的100 例体检者作为对照组。乙肝组中，男57 例，女 43 例；年龄 31～67 岁，平均 （51.34±3.49） 岁；病程 2～9 年，平均 （5.37±1.45） 年。对照组中，男53 例，女47 例；年龄33～70 岁，平均（52.11±5.42）岁。两组患者均符合《病毒性肝炎防治方案》与《慢性乙型肝炎防治指南》［2］中关于慢性乙型肝炎的诊断标准，且在性别、年龄方面差异无统计学意义（P＜0.05），具有可比性。

1.2 伦理审查

研究严格遵照赫尔辛基宣言及“涉及人的生物医学研究伦理审查办法（试行）”，方案获得院伦理委员会批准并全过程跟踪，且所用患者均对本次研究知情，并签署知情同意书。

1.3 方法

1.3.1 血清病毒学标志物检测 采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测乙肝5 项，包括：乙肝表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）表面抗体、е 抗原（HBeAg）、е 抗体、核心抗体。选用中山生物工程有限公司生产的相关试剂，严格按照说明书操作；根据HBeAg 定性检测结果将患者分为阳性组与阴性组。

1.3.2 血清HBV-DNA 定量检测 采用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）对HBV-DNA 定量进行检测，仪器采用罗氏480实时荧光定量仪，选用上海之江生物科技股份有限公司相关试剂，严格按照说明书操作；结果判读：＞1.0×103copy/ml 为阳性，（1.0×103～1.0×105）copy/ml 为低拷贝组，＞1.0×105copy/ml 为高拷贝组。

1.3.3 外周血T 淋巴细胞亚群检测 采用流式细胞术测定外周血T 淋巴细胞表面标志物，仪器采用美国BD 公司生产的FACS Calibur，并选用该公司生产的相关试剂。取100 μl 抗凝血于流式专用试管中，CD3+、CD4+、CD8+单克隆荧光抗体 20 μl，经避光、红细胞溶解、离心后，进行CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞的百分比统计。

1.4 统计学方法

应用SPSS 20.0 软件分析，计量数据采用均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验；相关性分析采用Pearson 直线相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV-DNA载量与细胞免疫功能分析

低拷贝组与高拷贝组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；通过对各组lgHBV-DNA 与CD4+/CD8+T 淋巴细胞比率比值进行Pearson 相关性分析发现，HBV-DNA 载量与细胞免疫功能存在负相关（r=-0.659,P=0.003），见表1。

2.2 阴性组与阳性组细胞免疫功能比较

阳性组 lgHBV-DNA、CD3+、CD4+/CD8+T 淋巴细胞水平明显高于阴性组，CD4+、CD8+T 淋巴细胞水平明显低于阴性组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 HBV-DNA 载量与细胞免疫功能分析 （）

表1 HBV-DNA 载量与细胞免疫功能分析 （）

注：1）与对照组比较，P ＜0.05；2）与低拷贝组比较，P ＜0.05。

组别对照组低拷贝组高拷贝组CD4+/CD8+1.46±0.28 1.12±0.611)0.72±0.371)2)例数100 29 71 CD3+/%74.36±5.64 60.52±5.721)46.18±5.361)2)CD4+/%43.13±5.75 39.16±4.771)33.23±3.751)2)CD8+/%22.61±4.86 36.56±7.331)43.17±6.271)2)

表2 阴性组与阳性组细胞免疫功能比较 （）

表2 阴性组与阳性组细胞免疫功能比较 （）

注：†与阴性组比较，P ＜0.05。

组别阳性组阴性组CD4+/CD8+1.71±0.57†0.83±0.42例数55 45 lgHBV-DNA 16.57±0.62†3.74±0.53 CD3+/%35.22±6.08†26.13±5.86 CD4+/%23.61±6.42†37.14±5.82 CD8+/%23.55±3.64†38.13±6.96

3 讨论

正常情况下，机体中T 淋巴细胞亚群之间彼此保持相对平稳的比例，共同维持机体细胞免疫功能的正常运行，T 淋巴细胞亚群失衡是机体细胞免疫功能损伤的重要指标［3］。有研究发现［4-5］，人体在感染HBV 后，免疫系统会出现损伤，其中外周血CD4+和CD8+等T 淋巴细胞亚群的变化最为明显，考虑与HBV 病毒清除障碍、疾病转归有关；但是，过度的免疫激活与交叉免疫会引起肝细胞损伤，因此，HBV-DNA 载量与机体细胞免疫功能之间的关系处于交互作用之中，尚未能完全明确。

CD4+和CD8+T 亚群作为T 淋巴细胞的主要亚群，能够清除病毒感染，在病毒免疫应答中具有重要作用［6］。CD8+T 淋巴细胞亚群主要包括细胞毒性T 细胞与抑制性T 细胞（Ts）：细胞毒性T 细胞是细胞免疫的主要效应细胞，被激活后分泌释放穿孔素和颗粒酶破坏靶细胞；Ts 通过释放分泌可溶性介质下调体液免疫和细胞免疫［7］。CD8+T 淋巴细胞的激活和凋亡严格依赖CD4+T 细胞的调控［8］。

本组研究中，低拷贝组与高拷贝组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，HBV-DNA 载量与细胞免疫功能存在负相关；此外，阳性组lgHBV-DNA、CD3+、CD4+/CD8+T 淋巴细胞水平明显高于阴性组，CD4+、CD8+T 淋巴细胞水平明显低于阴性组，说明慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能与HBV-DNA载量之间存在交互作用，HBV-DNA 复制是乙肝患者细胞免疫功能紊乱的重要影响因素。