两种药剂对冬枣叶斑病的室内毒力和田间防效研究

陆德玲，张耀中，黄延昌，张国福，吴亚玉*

(1.山东滨农科技有限公司，山东滨州 256600；2.山东省农药检定所)

冬枣叶斑病又称冬枣黑斑病，为冬枣常见病害，病原菌为细极链格孢菌(Alternariatenuissima)，主要危害冬枣叶片和果实。叶片感病初期失绿，后产生浅褐色小斑点，严重时叶片脱落。果实发病初期病斑为浅褐色针头状麻点，随着枣果的膨大病斑逐渐扩大，果皮味苦失去食用价值，严重影响冬枣的产量和品质。目前，冬枣叶斑病仍以化学防治为主，但取得农药登记证的农药寥寥无几，合法药剂严重缺乏，生产中乱用、滥用药现象较严重。

吡唑醚菌酯属于甲氧基丙烯酸酯杀菌剂，其环境相容性好[1]、有植物保健增产作用[2,3]，对多种作物病害防治具有很好效果[4-7]，丙环唑为三唑类杀菌剂之一，对多种植物病害有较好的防治效果。笔者以冬枣叶斑病为靶标，分别对吡唑醚菌酯和丙环唑进行了室内活性测定及田间药效试验，以明确两种药剂对冬枣叶斑病的防治效果，为合理使用提供参考。

1 试验材料

供试药剂：①97.5%吡唑醚菌酯原药，巴斯夫欧洲公司生产；②95%丙环唑原药，江苏丰登作物保护股份有限公司生产；③250g/L吡唑醚菌酯微乳剂，山东滨农科技有限公司提供；④250g/L丙环唑乳油，山东滨农科技有限公司提供。

供试菌株：冬枣叶斑病菌，采自沾化县古城镇大王村冬枣园。经室内PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂)分离培养获纯菌株，山东农业大学植物保护学院鉴定。

试验枣园3处：分别在山东省沾化县大高镇东黄村、山东省无棣县水湾镇刘王村、河北省黄骅市齐家务镇桃园村。栽植普通冬枣品种，树龄分别为8年、10年、8年，株行距2m×3m。试验植株长势、栽培条件和杂草覆盖一致。

2 试验方法

2.1 室内毒力测定

采用含毒介质法[8]，将吡唑醚菌酯原药、丙环唑原药分别用丙酮溶解，制成母液，用含0.1%吐温-80无菌水配制成5个有效成分系列浓度(吡唑醚菌酯640、320、160、80、40mga.i/L；丙环唑320、160、80、40、20mga.i/L)。于无菌操作台上，在灭菌的锥形瓶中加入45mL灭菌的液体培养基，从低浓度到高浓度依次吸取5mL药液，分别加入上述锥形瓶中，摇匀，倒入9cm培养皿中，待其凝固，制成含毒平板。每处理重复4次，以不含药剂的平板为空白对照。用直径5mm打孔器自菌落边缘切取菌饼，接种于已凝固的含药平板中央，菌丝面朝下，盖上皿盖，置于26±1℃的培养箱中培养。接种第7天，用十字交叉法测定菌落直径，取其平均值，计算菌丝生长抑制率。根据菌丝生长抑制率，求毒力回归方程、EC50(菌丝生长抑制率为50%时的药剂浓度)、EC90(菌丝生长抑制率为90%时的药剂浓度)及95%置信区间。

菌落直径增长量(cm)=实测菌落直径-0.5

菌丝生长抑制率(%)=(1-处理组菌落直径增长量/对照组菌落直径增长量)×100

2.2 田间药效试验

2014年进行田间防治试验，试验设计如表1。试验药剂浓度丙环唑根据药剂的登记剂量设定，吡唑醚菌酯根据沾化区大高镇东黄村枣农常用剂量设定。

表1 试验设计处理

于冬枣叶斑病发病初期施药，用机动喷雾器全树均匀喷雾至叶片正反两面均匀着药稍下滴为宜(666.7m2用液约75L)，连喷3次，间隔期10天。每处理重复4次，每小区5株树，各小区随机区组排列。

每次施药前当天和末次施药后10天分别调查病情指数，共4次。每小区随机选取3株树标定，在植株的东、西、南、北、中5个方位各选取2个枣吊标记，调查枣吊的叶片总数和各级病叶数。

病叶分级：0级，无病斑；1级，病斑面积占整个叶片面积的5%以下；3级，病斑面积占整个叶片面积的6%～10%；5级，病斑面积占整个叶片面积的11%～20%；7级，病斑面积占整个叶片面积的21%～30%；9级，病斑面积占整个叶片面积的31%以上。

病情指数=Σ(各级病叶数×相对级数)/(调查总叶数×9)×100。

防效(%)=(1-对照组药前病指×处理组药后病指)/(对照组药后病指×处理组药前病指)×100

2.3 数据分析

采用统计软件DPS 7.05[9]对室内数据分析，求做毒力回归方程，EC50值、EC90值及其95%置信区间等，对田间试验所得数据进行方差分析和邓肯氏新复极差法多重比较。

3 结果与分析

3.1 室内毒力测定结果

由表2可知，以药剂浓度(mga.i/L)对数值为自变量x，菌丝生长抑制率值为因变量y，建立的吡唑醚菌酯原药和丙环唑原药的毒力回归方程分别为y=3.2449+1.6782x和y=3.4537+1.7017x，相关系数均大于0.99，线性相关性好。吡唑醚菌酯原药、丙环唑原药EC50分别为11.11和8.30mga.i/L；EC90分别为64.49和38.81mga.i/L，两种药剂的EC50和EC90均小于100mga.i/L，对冬枣叶斑病菌丝生长抑制作用明显。

表2 吡唑醚菌酯、丙环唑对冬枣叶斑病菌室内毒力结果

3.2 田间药效试验结果

如表3，山东无棣、山东沾化、河北黄骅三地田间试验表明，250g/L吡唑醚菌酯微乳剂和250g/L丙环唑乳油两种药剂每10天喷药1次连喷3次喷药后，对冬枣叶斑病均有较好防治效果。250g/L吡唑醚菌酯微乳剂2500～1500倍液病情指数控制在1.91以下，防效在80%以上；250g/L丙环唑乳油3000～1500倍液病情指数控制在1.63以下，防效在83%以上。防效随时间延长逐步提高，至30天(第3次喷药10天)时，3个地方均达到最高。防效随药剂浓度升高而升高，均以1500倍液的防效始终最高，至30天时，两种药剂的防效达最高(>90%)，均显著高于低浓度的防效。两种药剂之间的防效无显著差异，各浓度喷施后冬枣均无明显药害反应，对有益生物也无明显不良反应。

表3 两种药剂对冬枣叶斑病田间防治效果(2014)

注：表中同地点的同列数字旁小写字母表示P<0.05水平差异显著，大写字母表示P<0.01水平差异极显著。

4 小结与讨论

吡唑醚菌酯和丙环唑都是内吸性杀菌剂，但二者作用机制不同。吡唑醚菌酯属于甲氧基丙烯酸酯类，为线粒体呼吸抑制剂；丙环唑为三唑类杀菌剂，主要通过阻碍真菌麦角甾醇的生物合成而影响真菌细胞壁的形成。

在冬枣叶斑病发生初期，间隔10天连续施药3次，250g/L吡唑醚菌酯微乳剂2500～1500倍液控制病情指数1.92以下，防效在80%以上；250g/L丙环唑乳油3000～1500倍液控制病情指数1.63以下，防效在83%以上；两种药剂以1500倍液防效最高，均达90%以上，二者差异不显著。对环境和有益生物无不良影响，可作为防治冬枣叶斑病的药剂在生产上推广使用。施药间隔期7～10天，连续用药3～4次。为了延缓抗药性产生和延长药剂使用寿命，建议防治冬枣叶斑病时两种药剂轮换施用。

室内毒力测定结果表明，吡唑醚菌酯和丙环唑均能有效抑制冬枣叶斑病菌的菌丝生长，二者对孢子是否具有抑制作用及抑制作用的大小，仍需要进一步试验验证。