胃癌组织中Podoplanin、血管内皮生长因子-C表达水平及临床意义

唐 欢，奚维东，夏 敏，文 静，王绍荣

(1.四川省彭州市人民医院消化内科，四川 彭州 611930；2.成都市第三人民医院消化内科，四川 成都 610036)

胃癌为临床常见恶性肿瘤，发病早期症状不明显，多与胃炎、胃溃疡等慢性疾病类似，易被临床诊断忽略，早期检出率较低[1]。现阶段，多数胃癌确诊患者处于中晚期，淋巴结转移率较高，即使是早期患者淋巴结转移率也在10%～15%，而淋巴结转移不仅决定患者手术范围，同时对预后也有一定影响[2]。有研究发现，肿瘤淋巴结转移可能与淋巴管生成密切相关，而血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作为促血管生成因子，家族包含多种异构体，而VEGF-C作为该家族重要成员之一，主要通过与酪氨酸激酶受体调节血管生成；Podoplanin作为Ⅰ型跨膜蛋白在人体多种组织细胞中均有表达，但主要表达在淋巴管内皮，故对淋巴管内皮细胞特异性较强[3，4]。本文对胃癌癌组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平及临床意义进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2015年5月至2018年5月四川省彭州市人民医院及成都市第三人民医院收治的127例胃癌患者。纳入标准：①符合《NCCN胃癌临床实践指南》[5]中诊断及分期标准，且在我院实施胃癌手术治疗；②术前均实施放疗、化疗等治疗方案；③标本根据染色结果，均选择具有典型癌组织代表性蜡块进行免疫组化研究；④临床病理及病例资料均完整；⑤经我院医学伦理委员会批准该项研究。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并严重基础性疾病、感染等；③妊娠期或哺乳期妇女；④无对应手术指征、存在手术禁忌证。取患者手术切除胃癌组织(127例)及距肿瘤5～10 mm处癌旁组织(50例)石蜡标本进行研究。

1.2 方法采用免疫组化法检测全部标本中Podoplanin、VEGF-C水平，操作如下：组织切片常规脱蜡至水，其中Podoplanin于乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修复液(pH 9.5)、VEGF-C于枸橼酸组织抗原修复液(pH 6.5)中使用高阳加热进行抗原修复(3 min)。修复结束后采用免疫组化三步法进行染色(所有染色操作严格参照试剂盒说明进行)→免疫组化显色→苏木精复染→中性树脂封片→光镜下观察。本研究均用PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照则为已知阳性胃癌组织切片。所有试剂盒均购于北京中杉金桥生物制品有限公司。

1.3 观察指标观察Podoplanin、VEGF-C在胃癌及癌旁组织中表达情况及与病理参数(年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移)关系。Podoplanin采用微淋巴管密度(LVD)表示，LVD计数方式参照Weidner法[6]：1个淋巴管为棕黄色染色的单个内皮细胞或细胞簇，先在低倍镜(40倍镜)下观察，再选择高密度区在高倍镜(200倍镜)随机选择5个视野内淋巴管进行计数，记录平均值。VEGF-C表达阳性率并由3名高年资主治医师双盲阅片，并协商一致后进行记录。具体方法[5]：采集切片图像，并在显微镜下观察阳性区域(10倍镜)及阳性细胞计数(40倍镜)。阳性区域标准[6]：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性计数比例标准：0～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，50%以上为3分；总评分：0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中阳性(++)，6分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法采用SPSS 17.0统计学软件处理数据。计量资料比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌及癌旁组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平比较胃癌组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平均高于癌旁正常组织(P< 0.05)，见表1。

表1 胃癌及癌旁组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平比较

2.2 胃癌组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平与临床病理参数关系不同年龄、性别、肿瘤大小的胃癌患者癌组织中Podoplanin表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)，临床分期高、分化程度低、存在浆膜浸润及淋巴结转移的患者Podoplanin表达水平较高(P< 0.05)。不同年龄、性别、肿瘤大小、分化程度的胃癌患者癌组织中VEGF-C表达阳性率差异无统计学意义(P> 0.05)，临床分期高、存在浆膜浸润及淋巴结转移患者VEGF-C表达阳性率较高(P< 0.05)。见表2。

表2 胃癌组织中Podoplanin、VEGF-C表达水平与临床病理参数关系

3 讨论

胃癌是一类起源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，高发于50岁以上男性，且与患者饮食结构、工作压力及幽门螺杆菌感染相关，随着近年社会生活方式不断转变，使得胃癌呈年轻化趋势[7]。目前，胃癌治疗主要以手术治疗为主，但术后仍存在较高复发和转移率，而淋巴结转移是胃癌手术治疗失败的主要原因之一，且影响胃癌患者预后。

Podoplanin蛋白作为淋巴管内皮标志物的跨膜唾液酸蛋白，主要表达部位为淋巴管内皮细胞，而在血管内皮上不表达，且在多种恶性肿瘤及瘤旁组织中均有表达，现已成为新型免疫组织化学标志物，与恶性肿瘤侵袭、迁移及转移密切相关[8]。肿瘤细胞自身可分泌促进淋巴管生成的Podoplanin蛋白，对肿瘤性淋巴管生成具有一定促进作用，同时癌细胞可通过增多的淋巴管向外散播和转移，进而促进肿瘤细胞沿淋巴结转移。本文研究结果显示，胃癌癌组织中Podoplanin表达水平明显高于癌旁正常组织，其高表达可能与肿瘤临床分期、分化程度、浆膜浸润及淋巴结转移有关，这与郭海等[9]研究类似，提示癌组织中淋巴管密度明显高于正常组织，临床可通过抑制或阻断Podoplanin蛋白表达，降低新生淋巴管形成，进而抑制肿瘤细胞增殖、浸润等。

VEGF是一种强大的内皮调控因子，主要诱导内皮细胞增殖，同时可促进肿瘤内外管脉生成，其在胃癌组织血管内皮细胞及淋巴管内皮细胞分裂和增殖过程中起着较为关键的作用。VEGF-C作为其中之一，是促进肿瘤淋巴管生成的重要因子之一，其可诱导淋巴内皮细胞增殖、迁移，并形成淋巴窦，同时与肿瘤转移和侵袭密切相关。VEGF-C诱导肿瘤转移及侵袭机制包括：诱导淋巴管生成促进肿瘤转移；激活淋上皮细胞释放肿瘤趋化因子，进而促进肿瘤浸润生长及淋巴转移；通过调节淋巴管收缩增加淋巴渗透范围[10]。肿瘤组织中癌细胞可通过自分泌或旁分泌产生VEGF-C，使其作用与肿瘤周围组织，进而刺激并诱导新生淋巴管的形成及扩张，对恶性肿瘤淋巴转移有一定促进作用[11]。本研究结果显示，胃癌癌组织中VEGF-C阳性率明显高于癌旁正常组织，且VEGF-C阳性表达与肿瘤临床分期、浆膜浸润及淋巴结转移有关，这与修丽娟等[12]研究结果类似。

综上所述，胃癌癌组织中Podoplanin、VEGF-C均呈高表达状态，两者高表达均增加胃癌淋巴结转移风险，其中Podoplanin高表达可能与肿瘤临床分期、分化程度、浆膜浸润情况有关，而VEGF-C高表达可能与肿瘤临床分期、浆膜浸润有关。