巴楚蘑菇多糖成分对小鼠抗氧化以及免疫功能的影响

唐天龙

（郑州工程技术学院，河南 郑州 450044）

食用真菌在我国分布广泛，其栽培和食用历史长达数千年。食用真菌具有较高的食用价值，不仅可以提供人体所需的蛋白质、脂肪、糖类、维生素以及各种矿物质以外，其自身的鲜美口感也广受食用者的好评[1]。此外，近年来食用真菌的药用价值也不断被挖掘，其糖蛋白、萜类物质、黄酮、多酚等物质对人体抗氧化性能以及免疫功能均具有良好影响[2]。巴楚蘑菇，学名裂盖马鞍菌（Helvella leucopus），属子囊菌纲（Ascomycetes）马鞍菌科（Helvella），其菌盖直径一般为3 cm ～ 6 cm，常带有马鞍状裂纹，部分黑色表面带有明显绒毛，因为其可以人工养殖，所以具有很高的医用和食用价值[3]。巴楚蘑菇的维生素含量极其丰富，尤其是维生素B1含量远高于一般的食用菌类。有关生物学家对其研究结果表明，巴楚蘑菇含有较多种类的多糖[4]。多糖的组成形式多样，结构较为复杂，目前尚没有办法对其性能进行完全准确的概括，已知的多糖成分已经被证实具有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等作用[5]。巴楚蘑菇内的多糖，在医学领域研究和药物提取工作中具有研究价值。通过医学生物体内试验研究可以得出结论，巴楚蘑菇多糖提取物可以有效提高生物中性粒细胞自身的外界吞噬力以及免疫淋巴细胞的转换率[6]，这说明巴楚蘑菇对生物体内的免疫功能有较大影响。为了探究巴楚蘑菇多糖成分的功能，试验以小鼠抗氧化和免疫能力为分析目标，进行巴楚蘑菇影响性分析。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

二硝基氟苯试剂、甲醇试剂、溶菌酶试剂盒、总抗氧化能力试剂盒、超氧化酶试剂盒和丙二醛测定试剂盒，均购自中国医药集团上海化学试剂公司；试剂盒，购自南京生物工程研究所。试验用巴楚蘑菇2019年购自新疆巴楚县，在40℃条件下烘干，并用粉碎机打粉过筛，筛孔为40目。将石油醚按照4∶1的比例填入巴楚蘑菇粉中进行脱脂，静置一天一夜后再次烘干，备用[7]。

1.2 试验对象培育和分组

试验采用单因子随机法设计，将60只1日龄的试验小鼠随机划分3个组，即对照组、少剂量组和多剂量组，每组小鼠数量为20只。其中对照组小鼠喂基础培育饲料和水，少剂量组和多剂量组在基础营养饲料和水的基础上，分别添加上述制备的巴楚蘑菇粉。少剂量组巴楚蘑菇粉添加量为2 g，多剂量组为6 g。3组初始小鼠重量均为1.5 g左右，为了减轻体质因素对试验影响性分析的误差，3组进行统一培育。

培育共分为2个阶段，育雏期为1日～ 10日龄，育成期为10日～ 25日龄。培育前需要对小鼠严格消毒，采用4层立体笼式培养。每日保证小鼠生长所需的饮食采水量，舍内温度、湿度光照环境完全一致且严格按照培养要求进行。育雏期需要进行人工辅助保温，分别在3日龄、7日龄和10日龄时接种新城疫IV系列疫苗。培育饲料成分和含量见表1。

表1 小鼠基础营养饲料组成及营养成分表Tab.1 Basic nutritional feed composition and nutrient composition of mice

按表1配制的基础饲料， 含有代谢能11.50 J·mol-1、粗蛋白 24.10 J·mol-1、钙 0.82 J·mol-1、有效磷 0.57 J·mol-1、氨基酸 0.60 J·mol-1、赖氨酸 0.35 J·mol-1。

1.3 培育试验生产性能

试验前需要将所有试验小鼠单独称重，计算平均初始体重。培育期间观测记录对照组、少剂量组、多剂量组试验小鼠的生理和精神状况。每天记录小鼠进食前后体重，并记录固定时间间隔下的阶段采食量、增重变化规律以及饲料转化规律（FCR）。

1.4 试验结果处理

试验结果采集数据采用TPSS 13.54软件进行差异性显著特征分析。当P＜0.05时差异。最终试验数据使用“平均值±标准差”的形式表示。

2 结果与讨论

2.1 巴楚蘑菇多糖成分对小鼠免疫器官指数的影响

胸腺、脾腺和法氏囊包括肝脏是鼠类重要的免疫器官，也是免疫细胞形成、分化以及生成的最重要场所，其生长发育与当前基体免疫功能具有直接关联。免疫器官指数测定选择第25天，从3个试验组随机抽取12只体重相近的试验小鼠（每组4只），空腹15 h后开始进行心脏采血、血清分离。随后进行生物解剖， 摘取小鼠的肝脏、脾脏、法氏囊、胸腺进行称重， 计算免疫器官指数，公式（T）为：

式中：n为小鼠免疫器官重量，g为小鼠解剖前活体重量。

对照组、少剂量组、多剂量组之间的对比结果，见表2。

由表2可知，剂量组小鼠胸腺指数和法氏囊指数显著提高（P＜0.05），且多计量组的影响程度明显大于少剂量组。而剂量组与对照组相比，对肝脏指数和脾脏指数整体影响不大。因此，添加适量的巴楚蘑菇粉，可以提高小鼠免疫器官胸腺指数和法氏囊指数，增强机体免疫应答。不同育龄期的小鼠和各自的对照组相比，均可以明显提高胸腺指数和法氏囊指数。说明巴楚蘑菇多糖成分对免疫器官的生长和发育具有明显的促进作用，且对免疫功能具有一定影响。

表2 小鼠免疫器官指数Tab.2 Index of mice immune organs

2.2 巴楚蘑菇多糖成分对小鼠新城疫HV抗体效应影响

新城疫抗体效应的评价测定，需要在小鼠培育期的25 d，从3个试验组抽取15只试验小鼠（每组5只）进行心脏采血（1 mL）。在常规室温下静置30 min析出血清后，收集血清，用β微量法检测血清中的新城疫HV抗体。检测过程中，需要进行样品血凝抑制试验，以验小鼠对新城疫的抗体效应。在96孔的微量凝血面板上顺次添加无菌生理盐水，每排首个凝血孔加入小鼠血清，向后依次按照1∶3的比例稀释，直到第12孔。向每孔填入抗原，在微量振荡器上混荡后，放入温箱静置20 min，待对照孔红细胞沉淀后判定结果。结果判定时，检测孔内红细胞需要呈网状凝剂，孔底出现圆点状沉淀物。以100%的凝集抗原处，以最大稀释孔作为原血凝价，也就是单位凝集；从该孔前移2孔的抗原稀疏度作为最终4单位的抗原稀释度，结果见表3。

表3 多糖成分对新城疫抗体效应影响Tab.3 Effect of polysaccharide components on newcastle disease antibody

由表3可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效提高小鼠新城疫HV抗体效应评价。新城疫HV抗体影响评价也是反映机体免疫应答的常用评价指标。巴楚蘑菇粉的添加量与小鼠新城疫抗体效应存在正相关，多剂量组的增强幅度明显高于少剂量组。

2.3 巴楚蘑菇多糖成分对小鼠PHA有效诱导细胞反应趾皮肤厚度的影响

通过对巴楚蘑菇多糖成分对小鼠PHA有效诱导细胞反应趾皮肤厚度的影响的具体研究好分析结果，见表4。

表4 多糖成分对小鼠趾皮肤厚度影响Tab.4 Effects of polysaccharide components on toe skin thickness in mice

由表4可知，少剂量组和多剂量组对小鼠的PHA诱导细胞反应明显更强，其中多剂量组的反应差异更为明显。由此可以推测，巴楚蘑菇的多糖成分是T淋巴细胞的促增长因子，可以刺激T淋巴细胞的增殖分化，引起小鼠皮肤外部的肿胀刺激。其肿胀程度与当前小鼠的免疫强度成正比例关系。因此，小鼠PHA有效诱导细胞反应趾皮肤厚度可以在一定程度上判定小鼠免疫淋巴细胞功能，代表小鼠当前机体的细胞免疫状态。试验中添加巴楚蘑菇的小鼠趾皮肤厚度增加，表明其可以通过促进小数据T淋巴细胞的生殖速率，提高小数据细胞免疫反应，进而提高小鼠的免疫功能。

2.4 巴楚蘑菇多糖成分对小鼠抗氧化能力的影响

生物机体抗氧化能力与身体健康具有重要关联。当抗氧化能力降低时，生物机体容易引起炎症、免疫系统疾病。超氧化歧化酶（SOD）对细胞氧化还原和抗氧化能力具有重要的平衡作用，它能有效杀灭生物机体中的有氧阴离子，保护细胞自由基不会受到损伤。此外，SOD在生物体中还能作为自由基清除酶，提高机体活力。其活性的实际值可以间接反映出当前机体对体内有氧自由基的清除能力。丙二醛（MDA）是机体脂质过氧化产物之一，测定其具体含量可以反映出当前机体脂质的过氧化程度，间接评价当前细胞活力和损伤程度。巴楚蘑菇多糖成分是生物机体内源性抗损伤重要营养元素，可以有效清除机体有氧自由基和脂质过氧化， 因此对于抗氧化能力T-AOC、SOD、MDA指标检测，可以充分反映出当前机体抗氧化能力的整体效应增减。

按照2.2中血清培育方法重新提取小鼠血清，利用总抗氧化能力试剂盒、超氧化酶试剂盒和丙二醛测定试剂盒检测3组小鼠血清样本的（T-AOC）和（SOD）的活性指数以及（MDA）的具体含量。 研究在不同项目情况下，3个试验组的具体数据，见表5。

表5 多糖成分对小鼠航氧化能力的影响Tab.5 Effects of polysaccharide components on aero-oxidation ability of mice

由表5可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效增加不同育龄小鼠血清中SOD活力值。有效降低小鼠体内血液中MDA的产生，有效提高其抗氧化能力。此外随着巴楚蘑菇多糖成分剂量的上升，T-AOC和SOD活性提高幅度明显加剧，说明该影响性具有递增效应，MDA量也在不断递减，证明其脂质过氧化作用逐渐衰弱。综上所述，巴楚蘑菇多糖成分可以有效提高试验小鼠抗氧化能力，对小鼠免疫能力具有间接性的影响。

3 结语

免疫功能是生物机体生存发展的重要保障，经过试验，巴楚蘑菇粉对机体新城疫HV抗体有效性具有正向影响，证明其对生物免疫机体具有正向调节作用。巴楚蘑菇粉可以通过提高淋巴细胞的繁殖能力，促进机体细胞免疫功能，抑制MDA值的扩大，提高机体超氧化歧化酶活性和丙二醛活性，提高机体抗氧化能力。综上所述，可以推测巴楚蘑菇中的多糖成分对生物体免疫器官具有重要的促进作用。