溃疡性结肠炎患者血浆miR-106a 和 miR-363-3p 表达水平的变化及意义

溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)均属于炎症性肠病，具有相似的临床表现及特征[1]。近年来关于UC和CD的分子病理学研究表明，UC和CD在基因表达、免疫学特征方面存在差异[2-4]。UC和CD的临床表现及特征较为相似，因此临床鉴别两者具有一定难度。微RNA(miRNA)是动植物体内长度为20～25个核苷酸的单链非编码RNA，可广泛参与机体内的病理生理过程[5]。目前大量miRNA已成为疾病发生、发展的潜在生物标志物[6]。有研究显示，miR-106a和miR-363-3p在UC和CD患者血浆中表达存在差异，有可能成为鉴别UC和CD的潜在生物标志物[7]。本研究选取78例UC患者、53例CD患者及46例健康体检者作为研究对象，评估miR-106a和miR-363-3p鉴别CD和UC的效能，并分析miR-106a和miR-363-3p表达水平与UC患者病情及预后的关系，以期为UC的临床诊断及治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年3月至2018年7月在重庆市开州区人民医院消化内科救治的78例UC患者(UC组)、53例CD患者(CD组)及同期46例健康体检者(NC组)作为研究对象。根据中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组制定的《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》[8]对UC和CD进行诊断和治疗。UC组男性43例，女性35例，平均年龄(46.08±11.32)岁；CD组男性25例，女性28例，平均年龄(44.85±9.91)岁；NC组男性26例，女性20例，平均年龄(45.72±10.24)岁。排除标准：(1)合并糖尿病；(2)合并严重感染；(3)伴有严重心、肝、肾等脏器疾病；(4)伴有自身免疫性疾病；(5)妊娠期或哺乳期妇女。本研究所有受试者及家属均对研究内容及目的了解，签署了知情同意书，且本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 RT-PCR法检测miR-106a和miR-363-3p相对表达量

抽取受试者空腹肘部静脉血，3 500 r/min离心15 min，提取上层清液。采用总RNA提取试剂盒提取总RNA，试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。采用定量聚合链反应合成cDNA。将合成的cDNA进行PCR扩增，反应条件为95 ℃预变性10 min，然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s，40个循环。采用2-△△Ct表示miR-106a 和 miR-363-3p的相对表达量[9]。

1.3 预后评估

根据《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》[8]对UC患者进行标准化治疗。治疗2个月后，内镜复查黏膜愈合情况，并根据黏膜愈合情况将接受治疗的活动期UC患者分为预后良好组和预后不良组[10]。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 3组受试者的基线资料比较

3组受试者在性别、年龄方面的差异无统计学意义(P>0.05)。CD组和UC组患者在炎性状态方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 3组受试者基线资料比较

注：“—”表示无数据

2.2 3组受试者血浆miR-106a 和 miR-363-3p的相对表达量比较

3组受试者血浆miR-106a 和 miR-363-3p相对表达量比较，差异均有统计学意义(P均<0.001)。UC组患者血浆miR-106a 和 miR-363-3p相对表达量低于CD组，但高于NC组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。详见表2。

表2 3组受试者血浆miR-106a 和 miR-363-3p相对表达量比较()

注：与NC组比较，aP<0.05；与CD组比较，bP<0.05

2.3 血浆miR-106a 和 miR-363-3p鉴别CD和UC的效能

单指标鉴别CD和UC时，miR-106a的ROC曲线下面积(AUC)大于miR-363-3p，但差异无统计学意义(Z=1.402，P=0.161)。血浆miR-106a和miR-363-3p联合检测鉴别CD和UC的Logistic回归方程：F=12.880-6.157×miR-106a-3.987×miR-363-3p。联合检测鉴别CD和UC的AUC为0.943，大于miR-106a、miR-363-3p单独检测的AUC(Z=2.587，P=0.010；Z=2.926，P=0.003)。详见图1、表3。

图1 miR-106a、miR-363-3p及联合检测鉴别CD 和UC的ROC曲线

表3 miR-106a、miR-363-3p及联合检测鉴别CD和UC的效能

注：“—”表示无数据

2.4 不同炎性状态的UC患者血浆miR-106a 和 miR-363-3p相对表达量比较

活动期UC患者血浆miR-106a 和 miR-363-3p相对表达量均高于缓解期UC患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

2.5 影响活动期UC患者预后的相关因素分析

单因素分析影响活动期UC患者预后的相关因素，结果显示年龄、性别、内镜下活动度分级、病理组织分级和病变位置与活动期UC患者预后无关(P>0.05)；miR-106a 和 miR-363-3p与活动期UC患者预后相关(P<0.05)。详见表5。将活动期UC患者预后作为因变量，将miR-106a和miR-363-3p作为自变量，纳入Logistic回归分析，结果显示miR-106a>1.14(OR：2.043，95%CI：1.245～2.674)和miR-363-3p>1.05(OR：1.287，95%CI：1.098～1.775)的活动期UC患者预后不良。

表4 活动期与缓解期UC患者血浆miR-106a和miR-363-3p相对表达量比较()

注：与活动期比较，aP<0.05

表5 影响活动期UC患者预后的单因素分析

2.6 血浆miR-106a 和 miR-363-3p在活动期UC患者预后评估中的价值

单指标诊断活动期UC患者预后时，miR-106a诊断活动期UC患者预后的AUC小于miR-363-3p，差异无统计学意义(Z=0.823，P=0.411)。血浆miR-106a和miR-363-3p联合检测诊断活动期UC患者预后的Logistic回归方程：F=-7.565+3.017×miR-106a+5.259×miR-363-3p。联合检测诊断活动期UC患者预后的AUC为0.860，与miR-106a、miR-363-3p单独诊断活动期UC患者预后的AUC比较，差异均无统计学意义(Z=0.759，P=0.448；Z=0.875，P=0.382)。详见图2、表6。

图2 miR-106a、miR-363-3p及联合检测诊断 UC患者预后的ROC曲线

表6 miR-106a、miR-363-3p及联合检测诊断UC患者预后的效能

注：“—”表示无数据

3 讨论

UC是一种慢性非特异性肠道炎性疾病，病情较为凶险，且并发症较多，严重时可危及患者生命[11-12]。近年来，中国UC患者逐年增加[13]。及时对UC患者进行诊断并加以治疗，可有效控制UC病情发展，降低并发症的发生率及患者病死率[14]。有研究表明，大量miRNA在炎症性肠病的发生、发展中发挥作用，参与组织稳态、肠细胞增殖、分化及维持肠道屏障功能等[15-17]。目前中国较少有关于miR-106a、miR-363-3p与UC关系的研究报道。国外虽有研究报道了miR-106a、miR-363-3p在UC患者中特异性表达，但并未验证两者诊断UC的效能，且未深入研究miR-106a、miR-363-3p与UC患者病情及预后的关系。本研究拟探究miR-106a、miR-363-3p与UC患者临床病理、病情进展及预后的关系，为UC患者病情严重程度及治疗效果评估提供更多参考。

本研究结果显示，UC组患者血浆miR-106a和miR-363-3p相对表达量低于CD组，但高于NC组，与Omidbakhsh等[7]的研究结果一致。提示miR-106a和miR-363-3p在UC患者血浆中特异性表达，有可能成为鉴别UC的潜在生物标志物。本研究进一步发现，miR-106a、miR-363-3p及两者联合检测的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p在鉴别CD和UC方面具有较高价值，可作为鉴别CD和UC的生物标志物。

本研究比较了不同炎性状态的UC患者血浆miR-106a和miR-363-3p的相对表达量，发现活动期UC患者血浆miR-106a和miR-363-3p的相对表达量显著高于缓解期患者，表明miR-106a和miR-363-3p表达水平与UC患者的炎性状态相关，可反映UC患者的病情。本研究结果显示，miR-106a和miR-363-3p与活动期UC患者的预后密切相关。miR-106a>1.14、miR-363-3p>1.05提示活动期UC患者预后不良，相关机制还需进行基础研究进一步阐明。本研究采用ROC评价miR-106a和miR-363-3p诊断活动期UC患者预后的效能，发现miR-106a、miR-363-3p及两者联合检测的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p对于活动期UC患者预后评估具有较高价值，可作为评估活动期UC患者预后的重要参考指标。

综上所述，miR-106a和miR-363-3p不仅在鉴别CD和UC方面具有较高价值，而且还可反映UC患者的病情及预后情况。由于条件有限，本研究未能纳入更多样本，因此结果可能存在一定偶然性和随机性，今后还需进行大样本、多中心研究进一步验证。