血清lncRNA PTENP1联合CA724、CA19-9、癌胚抗原检测在胃癌诊断及预后中的价值

胃癌是常见的消化道肿瘤之一，中国的发病率约为27.77/10万，病死率约25.27/10万[1]。早期胃癌患者常无自觉症状，发病隐匿，这是疾病最终进展至晚期并导致患者预后较差的重要原因。血清学标志物可为胃癌的早期发现和及时诊疗赢得宝贵时间，已逐渐引起人们重视。研究发现，糖类抗原724(CA724)、糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、长链非编码RNA(lncRNA)PTENP1在胃癌患者体内异常表达，与胃癌的发生、发展、侵袭、转移等过程密切相关[2-5]。本研究纳入110例胃癌患者、108例胃良性疾病患者和120例健康体检者，检测并比较了3组研究对象的血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1的表达水平，分析这四项指标与胃癌的临床病理特征的相关性及临床价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集新疆医科大学第五附属医院2013年3月至2015年2月经病理学确诊的110例胃癌患者，其中乳头状腺癌57例，黏液腺癌28例，管状腺癌25例；发生淋巴结转移35例，未发生淋巴结转移75例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期60例，Ⅲ～Ⅳ期50例。胃癌的分期参照美国肿瘤联合会(AJCC)第8版TNM分期系统[6]。同期选取108例胃良性疾病患者(胃平滑肌瘤38例、胃腺肌瘤20例、胃纤维瘤19例、胃溃疡31例)和120例健康体检者。3组研究对象的年龄、性别、吸烟史、饮酒史差异均无统计学意义(P均>0.05)，具有可比性，见表1。本研究的开展经医院伦理委员会批准。

表1 3组研究对象的临床基本资料

1.2 血清CA724、CA19-9、CEA与lncRNA PTENP1表达水平检测

研究对象禁食10 h以上，次日清晨由医护人员使用含促凝剂的采血管抽取静脉血5 mL，血液标本经12 000 r/min离心15 min(离心半径10 cm)，收集上层血清。采用化学发光法检测CA724、CA19-9、CEA表达水平，检测原理为：采用化学发光剂吖啶酯类化合物直接标记CA724、CA19-9、CEA抗体，分别与标本中CA724、CA19-9、CEA特异性结合，用发光信号测定仪——Archetect j2000sr全自动免疫分析仪(美国Abbott公司)进行发光测定，而后根据CA724、CA19-9、CEA标准品制作的标准曲线进行定量，并采用配套的原装进口试剂盒。

采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测lncRNA PTENP1的相对表达量，检测试剂购自中国Takara公司，反应体系为：Mix 10 μL，上下游引物各0.8 μL，cDNA 2 μL，DEPC水6.4 μL。qPCR反应循环条件为：95 ℃变性5 min；95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，45个循环。每组设置3个复孔。应用PrimerPremier 5.0进行PCR引物设计，引物合成由武汉擎科创新生物科技有限公司提供，引物序列见表2。采用2-ΔCt法计算lncRNA PTENP1的相对表达量。△Ct值= PTENP1 Ct值-GAPDH Ct值。

采用英国朗道公司肿瘤高值、低值质控品进行质量控制，判断标准为Westgard多规则分析，并分析本次实验血清CA724、CA19-9、CEA与lncRNA PTENP1检测的批内、批间变异系数，用以评估检测的重复性和精确度。

表2 引物序列

1.3 随访

依据纳入研究的时间，对胃癌患者进行40个月的电话随访，记录患者的生存时间。随访终点为：(1)40个月内患者死亡；(2)40个月内患者退出该项研究；(3)40个月随访结束。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 3组血清CA724、CA19-9、CEA与lncRNA PTENP1表达水平比较

血清CA724、CA19-9、CEA与lncRNA PTENP1检测的批内和批间变异系数值小于5%，提示实验具有良好的重复性和精确度。与胃良性疾病组和健康体检组相比较，胃癌组的血清CA724、CA19-9和CEA表达水平均升高，血清lncRNA PTENP1水平降低，差异均有统计学意义(P均<0.05)。而胃良性疾病组与健康体检组间血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1的水平差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 3组研究对象血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平比较

注：与胃癌组相比，aP<0.05

2.2 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系

以胃癌患者血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表达水平的中位数分别将患者分为高表达组和低表达组。相比于CA724、CA19-9、CEA低表达和lncRNA PTENP1高表达组，CA724、CA19-9、CEA高表达和lncRNA PTENP1低表达组的淋巴结转移发生率、Ⅲ～Ⅳ期患者所占比例均升高，且差异具有统计学意义(P<0.05)，见表4和表5。Spearman相关性分析显示，血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平与胃癌患者淋巴结转移及TNM分期均具有显著相关性(P<0.05)，见表6。

表4 血清CA724和CA19-9表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系/例(%)

表5 血清CEA和lncRNA PTENP1水平与胃癌患者临床病理特征的关系/例(%)

表6 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表达水平与临床病理特征的相关性分析

2.3 ROC曲线分析结果

血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1区分胃癌组与胃良性病变组及健康体检组的ROC结果见表7和图1，4项指标对应的诊断临界值分别为2.82 U/mL、30.14 U/mL、2.25 ng/mL和26.91(-log)。当联合检测CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1时，敏感度显著提高至96.1%。

表7 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1对胃癌鉴别诊断的ROC结果

图1 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1 对胃癌鉴别诊断的ROC曲线分析

2.4 生存分析

110例胃癌患者依据CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平的中位数分别被分为高水平组与低水平组。与高lncRNA PTENP1组相比，低lncRNA PTENP1组患者的生存时间显著降低(log-rankP=0.002，见图2A)；与低CA19-9组相比，高CA19-9组患者的生存时间显著降低(log-rankP=0.039，见图2B)；与低CA724组相比，高CA724组患者的生存时间显著降低(log-rankP<0.001，见图2C)；与低CEA组相比，高CEA组患者的生存时间也显著降低(log-rankP=0.010，见图2D)。

图2 各组生存情况分析 A lncRNA PTENP1组 B CA19-9组 C CA724组 D CEA组

3 讨论

由于胃癌的早期筛查尚未在中国普及，导致一部分胃癌患者在就诊时已处于晚期。目前对晚期胃癌尚无有效的治疗方法，因而其5年生存率极低。寻找可靠的早期筛查生物学指标是提高胃癌患者生存率的重要方法。

CEA是一种具有胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，在胃肠道恶性肿瘤及乳腺癌、肺癌等肿瘤患者体内表达升高，对恶性肿瘤的诊断具有提示作用[7]。CA19-9是糖抗原的一种，其表达升高多提示有胰腺炎、肝硬化、糖尿病、消化道肿瘤可能。CA724是一种较新的肿瘤标志物，对胃肠道肿瘤的判断具有潜在价值，但目前在临床上的应用较少[8]。陈钟等[9]对41例胃癌患者和40例健康对照的血清肿瘤标志物检测发现，胃癌患者的血清CA19-9、CA724和CEA水平明显高于健康人群。王梅等[10]对92例胃癌患者和45例对照者血清CEA、CA724水平的分析结果表明，胃癌患者血清CEA、CA724水平、阳性率均明显高于对照组(P<0.05)，两者联合检测的阳性率显著高于单项检测(P<0.05)，且两者的表达水平随胃癌TNM分期和疾病进展呈逐级升高趋势。国外研究亦有类似报道[11-12]。本研究发现，胃癌患者血清CA724、CA19-9、CEA表达水平均显著高于胃良性疾病患者和健康体检者，与国内外研究结果相一致[9-12]。进一步的相关性分析发现，血清CA724、CA19-9、CEA水平与胃癌患者淋巴结转移及TNM分期均具有显著相关性，这一发现与王梅等[10]的研究结果相符。生存分析结果也进一步提示，高水平CA724、CA19-9、CEA与胃癌患者的不良预后有密切联系。

除肿瘤标志物外，lncRNA PTENP1也被证实在胃癌患者体内异常表达，与胃癌的发病及转移过程密切相关。Dong等[13]通过检测110例胃癌患者血浆lncRNA PTENP1表达，发现与健康对照相比，胃癌患者血浆lncRNA PTENP1表达水平显著降低。Guo等[14]通过基因重组方法构建lncRNA PTENP1的siRNA载体，并感染人SGC7901及MKN45胃癌细胞系，发现下调lncRNA PTENP1表达后可显著降低胃癌细胞系中抑癌基因PTEN的表达，表明lncRNA PTENP1在抑制胃癌细胞的生物学过程中发挥了重要作用。Zhang等[15]的研究证实，lncRNA PTENP1可通过影响胃癌组织血管形成微环境，抑制肿瘤组织新生血管形成，从而抑制肿瘤的生长转移；此外，该研究提示lncRNA PTENP1可通过“海绵作用”吸附并抑制miR-106b和miR-93发挥功能，从而抑制胃癌细胞的增殖与侵袭。同样，本研究发现lncRNA PTENP1水平在Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者及发生淋巴结转移患者中明显降低，提示低水平的lncRNA PTENP1与胃癌的不良预后相关。

此外，本研究还探究了联合检测血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平对胃癌的诊断价值，发现联合4项指标可将胃癌诊断的敏感度提高至96.1%，高于单独检测CA724(91.2%)、CA19-9(63.1%)和CEA(66.2%)。

综上所述，联合检测血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平对胃癌的诊断和预后具有一定价值，有望为胃癌的临床诊疗路径提供新的思路。