p16、Ki-67联合应用在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用价值分析

郑州市妇幼保健院（450012）任志敏 陈慧萍 古雅丽

宫颈癌为现今女性群体中较为常见的恶性肿瘤，而宫颈鳞状上皮病变（squamous intraepithelial lesion，SIL）在其发病中起到了重要作用[1]。病理学检测为SIL诊断中的“金标准”，但因缺乏客观依据，SIL的组织病理学诊断将受病理科医师的主观性及彼此间可变性因素影响，极易影响诊断结果，造成误诊或过度治疗现象。目前生物学标志物在SIL诊断中逐渐应用，可为组织病理学诊断提供确切信息，其中p16作为抑癌基因，其在细胞周围调控中发挥了重要作用，Ki-67属于增殖细胞标记物，免疫组化染色阳性则可判定细胞增殖活跃[2][3]。鉴于此，本研究将分析p16、Ki-67联合应用在SIL诊断中的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2017年1～12月我院治疗的宫颈各类病变患者117例作为研究对象，患者自愿参与，人乳头瘤状病毒(HPV-DNA)基因检测、液基薄层细胞学（TCT）检测结果异常，且经苏木素-伊红染色(hematoxylin eosin，HE)病理检测确诊为慢性宫颈炎、宫颈上皮鳞状化生、低级别鳞状上皮病变(low-grade squamous intraepithelial lesions，LSIL)、CIN1-2、高级别鳞状上皮病变(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL) 患者各26例、4例、61例、10例、16例，其中年龄23～76岁，平均年龄（36.85±3.62）岁，入选病例均未实施放、化疗治疗。

1.2 方法 应用免疫组织S-P法对入选者Ki-67、p16蛋白表达进行测定，其中兔抗人单克隆Ki-67抗体、小鼠抗人单体克隆P16抗体均由上海基因科技股份有限公司提供，其中组织阳性对照为确诊的阳性鳞癌组织切片。通过半定量方法分析免疫组化染色相应细胞分布与强度，其中阳性细胞在基底层附近1～2层细胞分布为“+”；阳性细胞在上皮内＜1/3部位分布为“++”；在上皮内＜2/3部位分布为“+++”；在上皮细胞内≥2/3处分布为“++++”。Ki-67阳性细胞呈棕黄色颗粒状，定位于细胞核，但Ki-67阳性细胞仅在副基底层、基底层时分布可判定为阴性；若Ki-67阳性细胞于上皮的上2/3分布则可判定为阳性；p16阳性细胞呈棕黄色颗粒状，定位于细胞核或细胞质，但若细胞核未着色，仅出现细胞质着色可诊断为阴性；宫颈良性病变：Ki-67、p16均为阴性，LSIL（CIN1）：Ki-67（++）、p16（+）和（++）；HSIL（CIN2-3）：Ki-67、p16≥（+++）。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件，计数资料以百分数和例数表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki-67、p16检测结果 通过观察Ki-67、p16检测结果对原病理诊断情况进行修订，其中宫颈上皮鳞状化生中的4例患者更正诊断1例为HSIL，慢性宫颈炎中的26例患者仍诊断为慢性宫颈炎，LSIL中的61例患者中41例患者为LSIL，其余患者（16例）更正诊断HSIL，CIN1-2中的4例患者更正诊断为为LSIL、6例更正诊断为HSIL，HSIL中的14例患者诊断仍为HSIL，2例患者更正诊断为LSIL，而Ki-67、p16免疫组化染色更正诊断前、后HSIL、LSIL患者占比比较，差异有统计学意义（χ2=8.518，P=0.004）。

2.2 Ki-67、p16诊断效能 LSIL患者中p16检测均为阴性，阳性率为0.00%（0/51），HSIL病例中仅有1例患者p16检测呈阴性，其余均为阳性，阳性率为97.30%（36/37），LSIL、HSIL患者中的p16阳性率对比，差异有统计学意义（χ2=83.975，P=0.000）。Ki-67在LSIL、HSIL阳性率分别为21.57%（11/51）、67.57%（25/37），LSIL、HSIL患者中的Ki-67阳性率对比，差异有统计学意义（χ2=18.769，P=0.000）。而将Ki-67、p16联合用于HSIL检测中的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值见附表。

附表 Ki-67联合p16检测结果（%）

3 讨论

宫颈癌发病、进展属于一个渐进过程，故强化对癌前病变、早期宫颈癌的诊断及进展进行预测极为重要。增殖作为细胞特别是肿瘤细胞的主要生物行为，其在恶性肿瘤发病中发挥了重要作用，其中与细胞增殖相关的标志物在肠癌、乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤中均有过度表达现象，而在女性生殖道肿瘤病变中也具备了上述特征[4]。

p16基因属于细胞周期调控基因，可利用成视网膜细胞瘤蛋白质通路而对细胞增殖、细胞周期进展进行控制。经研究发现，若细胞被HPV-DNA感染，可导致其细胞中的HPV肿瘤蛋白E7对成视网膜细胞瘤蛋白质功能造成损伤，进而可影响转录因子与其间的结合作用，促使细胞增殖失调，p16蛋白过表达[5]。Ki-67属于细胞增殖标志物，而Ki-67分布于宫颈鳞状上皮部位与SIL病变级别间具有密切联系，可作为SIL病变级别判断中的敏感指标，同时其免疫组化检测也多被临床用于判断多种肿瘤的增殖活性中。郭艳敏[6]等研究中将Ki-67、p16用于宫颈鳞状上皮病变及慢性宫颈炎诊断中，其研究结果得出，Ki-67、p16联合检测可改善宫颈鳞状上皮病变及慢性宫颈炎诊断效能，提升病变分级诊断率，是宫颈癌早期筛查的有效手段。本次研究结果得出，p16、Ki-67在HSIL、LSIL患者中的阳性率对比差异显著，而将Ki-67、p16免疫组化染色更正诊断前、后的HSIL、LSIL病例占比比较也存在较大的差异性，同时两者联合检测特异度较高，由此可见，Ki-67、p16可作为SIL诊断中的敏感指标，利于对SIL进行筛查，并可对SIL分级情况进行预测，以良好判断SIL病变进展，降低漏诊、误诊几率，减少患者过度治疗现象。

综上所述，可将p16、Ki-67联合检测作为SIL中的辅助诊断方法，这利于预测宫颈病变的进展，提升宫颈病变诊断的效能。