微柱凝胶法检测孕妇血清IgG抗体效价参考值的临床研究

盛晓星

（南京市六合区人民医院检验科，江苏 南京 211500）

新生儿溶血病主要因胎儿同母体的血型不相符所造成，且症状表现同母体抗体的效价值存在密切联系。新生儿溶血病的患病概率会伴随孕妇抗A、B水平的提升而增高。患儿轻则可能发生水肿、贫血、肝肿大等情况，严重者可能出现核黄疸，乃至发生新生儿死亡。那么，对夫妇血型不合的情况需重点关注，并定时筛查，便于及时发现并处理。本文以我院收治ABO血型不合的O型血孕妇500例为例，探究微柱凝胶法检测的临床应用价值，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月～2018年12月我院收治ABO血型不合的O型血孕妇500例作为研究对象，其中，年龄22～35岁，平均年龄（28.5±1.2）岁，孕周短则17周，长则40周，平均孕周（24.1±1.3）周，167例O型血孕妇丈夫血型为A型，168例O型血孕妇丈夫血型为B型，165例O型血孕妇丈夫血型为AB型。本次研究经伦理委员会许可，全体孕妇及家属均自愿参与，签署同意书。

1.2 纳入/排除标准

纳入标准：（1）全体孕妇仅属于ABO血型不合情况，孕妇血型均为O型；（2）全体孕妇年龄22～35岁。

排除标准：（1）排除Rh血型阴性血孕妇；（2）排除患血液系统疾病的孕妇；（3）排除有输血史的孕妇。

1.3 方法

本次选用设备包括：抗人球蛋白检测卡、0.2 mol/L2-ME应用液、不规则抗体检测试剂等。

全体孕妇均接受微柱凝胶法检测，具体过程为：通过抗人球蛋白检测卡对不规则抗体进行筛查，注意严格遵照说明书进行操作与读取。取孕妇空腹静脉血3 mL，经沉淀、离心处理后获得400 uL血清样本，将其同400 uL浓度0.2 mol/L的2-ME应用液混匀，于试管口贴好密封膜，放入恒温37℃的箱内静止1小时，保证血清内免疫球蛋白M抗体充分裂解。选择12个容量为10 mm×60 mm的试管进行标记，最后标记为12的试管内放入生理盐水为阴性对照，将经2-ME裂解后的血清通过生理盐水稀释至不同倍数，浓度分别为：1：2、1：22、1：23……1：210、1：211，通过盐水法确定1：2的稀释度管IgM抗体被损坏。通过母体IgG抗体效价检测卡检测抗体效价，并做好标记。分别于胃管内添加50 uL与孕妇丈夫血型相同的浓度0.8%的红细胞悬浊液，顺次加入处理过稀释不同梯度的血清及对照生理盐水各50 uL，放入恒温37℃的孵化箱内孵化15分钟，通过离心机对微管进行离心处理，离心速度调制900转/min离心2 min，后调制1500转/min离心3 min。以发生1+凝集强度的血清最高稀释度作为判定阳性的标准，以血清稀释的倒数作为效价参考值。

2 结果

500例孕妇中，IgG抗体效价参考值超过256的患者约229例，占比45.80%，其中丈夫A型血84例，丈夫B型血94例，丈夫AB型血51例，见表1。

表1 孕妇IgG抗体效价分布

3 讨论

新生儿在出生时可能产生多种先天性疾病，其中溶血病是一类严重的新生儿疾病。其主要是因为母体血液当中所含的免疫球蛋白G（IgG）抗体经由胎盘、脐带运输到胎儿体内，与胎儿血液红细胞中遗传父亲的抗原相结合，由于抗体和抗原的异源性，导致胎儿血液中的红细胞寿命严重缩短，引发溶血性病变。根据现代医学数据统计显示，由于孕妇和胎儿之间的ABO血型不合产生的新生儿溶血病症的概率最高，而IgG抗体也是孕妇血液中唯一能够通过胎盘——脐带系统进入胎儿血液中的抗体物质，在与异源抗原结合后就会破坏其红细胞，在新生儿出生时产生溶血性病变，包括黄疸、早产、早期流产、贫血等，严重时甚至会导致新生儿死亡[1]。因此可见ABO血型溶血病症的发生与孕妇本身的IgG抗体中的A、B型效价有着直接的关系，在孕妇怀孕期间的孕检中需通过检测IgG抗A效价和B效价的方式对新生儿溶血病症进行预判，从而尽早采取预防措施，在新生儿出生后能够立即进行各种治疗，以确保其生命健康。

人类最早对孕妇IgG抗体进行检查时采用的是试管法，利用抗人球蛋白直接对ABO血型进行交配确认，操作相对简便，但对于血型中亚型的判断不够准确。随后医学工作者又制备出了具备抗IgG抗体的抗人免疫球蛋白抗体，从而直接可在生理盐水环境下直接观察红细胞的凝集反应，从而使血型检测工作更加方便和直观，而该技术也直接使用了抗体制备者——Coombs的名字。该技术也进一步确定了新生儿溶血病症的发病原因和IgG抗体有直接关系，同样对于部分输血性溶血病的发病原因也给出了解释[2]。

而在上个世纪末，国外医学研究者提出了一种全新的检测方式，被命名为微柱凝胶法，至此Coombs检验法便被取代，微柱凝胶法则逐渐成为了部分国家血液配型和溶血病检测中的常规方式[3]。该方法主要是将凝胶分子的筛查技术与传统的抗原-抗体凝集反应向结合，将凝集反应的环境转移至微柱凝胶介质当中，在该介质下仍可以用肉眼直接对凝集情况进行观察。同时微柱凝胶法在实际应用中也不需要使用传统检验技术中的“三洗”步骤，血样的孵化时间被缩短至15min，操作步骤和孵化时间的减少避免了不可控因素对检测结果的影响，而且也降低了操作难度，最重要的是检测结果可直接用凝胶保存[4]。因此该技术能够被更广泛地应用在新生儿溶血病的检测当中，且敏感性更高，给医疗工作者的数据更加准确，可更好地保障新生儿的生命健康。

总之，孕妇血清IgG抗体效价参考值以微柱凝胶法检测效果较佳，正常参考值可定位低于256，对临床预防、治疗新生儿溶血病有重要的参考价值。