宫颈上皮内瘤变级别与感染不同HR-HPV亚型的相关性研究

陆敬巧，闫首珍，时萧阳，沈 鑫

（宿迁市第一人民医院妇产科，江苏 宿迁 223800）

近年来，子宫颈癌的发病率呈逐年升高的趋势，对女性的身体健康造成极大的威胁。相关研究表明，宫颈癌在女性恶性肿瘤中的占比为10%～12%，已然成为女性最为常见的恶性肿瘤之一[1-2]。而宫颈上皮内瘤变（CIN）属于诱发子宫颈癌相应癌前病变，相关研究表明，CIN疾病的发生与发展和人乳头瘤病毒（HPV）感染存在密切关系，尤其是高危型的HPV（HR-HPV）对于人宫颈的上皮细胞具有持续性刺激的角化作用，能够诱发肿瘤基因相应激活及分裂增殖[3]。目前关于宫颈上皮内瘤变级别与感染不同HR-HPV亚型的相关性的研究不多。因而，此次研究基于我院妇产科所收治的行TCT与病理检查及HPV-DNA分型检测的患者作为研究对象，然后对CIN患者感染HPV状况及CIN级别与感染不同HR-HPV亚型的相关性予以分析与总结。课题研究过程中为了减低患者检查过程中的不舒适感及方便高级别宫颈上皮内瘤变患者治疗，申请发明专利2个：一种多用途阴道拉钩（专利号：201710403240.X）目前进入实质审查阶段；申请实用新型专利3个：一种妇产科用便捷式窥阴器（专利号：201720625506.0，已授权）；一种四叶片阴道拉钩（专利号：201720625342.1，已授权）；一种便捷式多药物适用型宫颈上药器（专利号：201920274158.6，第二发明人）。

1 资料与方法

1.1 临床资料

以我院妇产科于2018年2月～2019年2月期间所接收的行宫颈液基细胞学与HPV-DNA分型检测的600例患者作为此次研究对象，TCT及病理学检查，共诊断出520例CIN患者，患者年龄分布在18～76岁，中位年龄为（36.85±9.24）岁，其中CIN 1患者348例，占比为66.92%，CIN 2、3患者172例，占比为33.08%。

1.2 方法

（1）TCT与病理检查

运用TCT配套一次性使用宫颈采样拭子，收集患者宫颈以及宫颈管脱落的上皮细胞于细胞保存液内，将样本送至病理科细胞室检查，诊断标准依照国际癌症协会所制定的“子宫颈细胞学Bethesda报告系统(2004年版)[4]。经TCT检查存在异常的各患者，给予阴道镜检查，依据标准步骤实施检查，针对宫颈组织施以活检，相应病理诊断参依照WHO所制定的关于国际疾病的分类标准(2003年版)[5]。

（2）HPV分型检测

运用人乳头瘤病毒基因分型（25型）检测试剂盒的PCR-反向点杂交法对25种HPV亚型进行检测，本试剂盒采用PCR体外扩增（由美国MBI公司所研制的PE9600型扩增仪）和DNA反向点杂交相结合的基因检测技术。通过HPV特异引物，扩增出包含25种HPV基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在膜务上的型特异性探针进行杂交，依据杂交信号来判断是否有这些HPV基因型的存在。HR-HPV亚型共15种，包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66及HPV68。

1.3 统计学分析

运用SPSS 19.0统计分析软件，以百分率（%）作为HRHPV各亚型感染相应评价指标，同时对HR-HPV检出率给予x2检验，以logistic回归分析HR-HPV各亚型感染和CIN病变级别之间的相关关系，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CIN患者中HPV亚型感染情况分布

520例CIN患者中，共464例患者感染HPV，阳性率为89.23%，其中宫颈上皮内瘤变低等级CIN（CIN 1）患者为348例，相应占比为66.92%，患者年龄分布在18-75岁，中位年龄为(36.78±9.35)岁，HPV的感染率为86.21%(300/348)；宫颈上皮内瘤变高等级CIN（CIN 2、3）患者共172例，相应占比为33.08%，患者年龄分布在19～76岁，平均年龄为(36.86±9.18)岁，HPV的感染阳性率为90.70%(156/172)；对两组患者的一般资料、HPV感染的阳性率等予以统计学分析，结果有P＞0.05，不具有统计学意义。

348例CIN 1患者中共检出21种HPV亚型，其中HRHPV亚型占比依次为HPV16、HPV58、HPV52、HPV33及HPV31，如下表1所示；172例CIN 2、3患者中，共检出19 种HPV亚型，其中HR-HPV亚型占比依次为HPV16、HPV158、HPV133、HPV152和HPV131型，如下表2所示。

表1 CIN1患者中HR-HPV亚型检出率[n=348]

表2 CIN 2、3患者中HR-HPV亚型检出率[n=172]

2.2 HR-HPV感染亚型与CIN疾病级别之间的相关关系

520例CIN患者中，CIN 1患者为348例，相应占比为66.92%，CIN 2、3患者共172例，相应占比为33.08%，不同CIN级别患者中HPV16与HPV52型检出率比较差异具有统计学意义（x2分别为，P＜0.05），而其余亚型于CIN不同级别患者中的检出率比较差异不具有统计学意义（P＞0.05）。

Logistic回归分析如下表3所示，可以看出HPV16、HPV33与患者CIN级别呈正相关性，而HPV52、HPV59与CIN级别呈负相关性。

表3 Logistic回归分析[n=520]

3 讨论

相关调查发现，近年来，宫颈癌的发病率逐年上升，在女性的恶性肿瘤占据第2位，对女性健康的产生极大地威胁。宫颈癌从癌前病变逐步发展并最终癌化，因而及早诊断及时给予针对性的干预措施对改善患者预后具有积极的意义。张贤等[6]通过研究认为，及早发现并给予有效的治疗有助于降低宫颈癌的发病率与病死率。近年来随着对宫颈癌研究的不断深入，HR-HPV于宫颈癌疾病的发生与发展中所表现出的作用越来越清晰，极大地提升了对宫颈癌疾病的筛查效率。

相关研究表明，人黏膜的上皮细胞与皮肤为HPV最主要，也是最常见的感染位置，且感染组织与宿主的特异性也较高。万晓春等[7]通过研究表明，将近90%以上的CIN患者其病变部位在宫颈外口的鳞状细胞。对于HR-HPV主要是借助母婴的垂直传播及直接接触等各种方式进行传播，若HR-HPV长期的持续性感染将极易导致CIN疾病的发生[8]。因而，对HR-HPV给予早期的检测对于改善患者治疗预后具有积极的意义。有研究认为，HR-HPV感染属于CIN疾病的主要致病因素，同时其也是诱发宫颈癌的必要条件。相关研究表明，HR-HPV和CIN级别存在高度的相关性，且与CIN 2、3的相关性要比CIN1更为明显，这对疾病的转归和预后评估具有较大的意义和价值[9]。

此次研究对患者施以HPV-DNA的分型检测，结果表明CIN 1与CIN 2、3患者高危亚型的感染率分别为86.21%和90.70%，对比差异不具有统计学意义（P＞0.05）。同时发现CIN1和CIN2、3之间患者感染HR-HPV亚型种类及占比存在差异，CIN1中CIN 1患者中共检出21种HPV亚型，其中HR-HPV亚型占比依次为HPV16、HPV58、HPV52、HPV33及HPV31；CIN2、3中共检出19种HPV亚型，其中HR-HPV亚型占比依次为HPV16、HPV158、HPV133、HPV152和HPV131型。其中，HPV16与HPV52亚型与不同级别CIN患者中的检出率对比差异具有统计学差异(P＜0.05)。经Logistic回归分析表明，HR-HPV各亚型中HPV16、33、52及59型与CIN病变程度存在相关性，其中HPV16、HPV33型与CIN病变级别呈正相关性，HPV52、HPV59型与CIN病变级别呈负相关性。杨英捷等对以往相关研究进行总结时发现，HR-HPV亚型中HPV16、HPV3l、HPV33和宫颈病变级别存在密切的相关性，这与本文研究结果相似。

综上所述，CIN病变级别与HR-HPV感染存在密切的关系，而HPV16、HPV52与CIN病变级别呈正相关性，且HPV16、HPV52亚型感染是患者出现高瘤变的危险因素。