胆维他片对肝纤维化大鼠肝中抗氧化体系的影响

董朴 蔡福景 张东

摘要：目的  探讨胆维他片对肝纤维化大鼠肝中抗氧化体系的影响。方法  选取30只大鼠按照随机数字表法分为肝纤维化模型组、胆維他片组和正常对照组，每组10只。除正常对照组外，其余各组均要求制备大鼠肝纤维化模型。正常对照组和肝纤维化模型组不给药，胆维他片组于造模开始给予灌胃给药，其余组给予蒸馏水灌胃，于第12周测定肝中丙二醛（MDA）、抗氧化体系的过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH），同时采用Masson's染色肝组织胶原行纤维半定量评估纤维化的程度。结果  纤维化模型组和胆维他片组CAT、SOD、GSH低于正常对照组，MDA高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;胆维他片组CAT、SOD、GSH均高于纤维化模型组，MDA低于纤维化模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。纤维化模型组和胆维他片组肝纤维化分期高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;胆维他片组肝纤维化分期低于纤维化模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论  胆维他片能有效降低肝纤维化肝内的脂质过氧化，促进肝内氧化及抗氧化体系的恢复，具有减轻肝纤维化的作用。

关键词：胆维他片;肝纤维化;氧化及抗氧化体系

中图分类号：R575                                  文献标识码：A                                   DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.18.046

文章编号：1006-1959（2019）18-0138-02

Abstract：Objective  To investigate the effect of Danweita Tablet on the antioxidant system in the liver of rats with hepatic fibrosis.Methods  30 rats were randomly divided into the liver fibrosis model group， the biliary tablet group and the normal control group， with 10 rats in each group. Except the normal control group， the other groups were required to prepare a rat liver fibrosis model. The normal control group and the liver fibrosis model group were not administered. The bilisitis tablets group was administered with intragastric administration at the beginning of modeling， and the other groups were given distilled water for intragastric administration. The liver malondialdehyde （MDA） and anti-drug were measured at the 12th week. The oxidation system of catalase （CAT）， superoxide dismutase （SOD）， glutathione （GSH）， and Masson's stained liver tissue collagen fibers were used to semi-quantitatively assess the degree of fibrosis.Results  The CAT， SOD and GSH in the fibrosis model group and the bilisitis tablet group were lower than those in the normal control group， and the MDA was higher than the normal control group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The CAT， SOD and GSH in the biliary tablet group were all significant. Compared with the fibrosis model group， the MDA was lower than the fibrosis model group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The fibrosis model group and the gallbladder tablet group had higher liver fibrosis stage than the normal control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The gallbladder tablet group had lower liver fibrosis stage than the fibrosis model group，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion  Gallivir tablets can effectively reduce lipid peroxidation in liver fibrosis， promote liver oxidation and recovery of antioxidant system， and reduce liver fibrosis.

Key words：Gallbladder tablets;Liver fibrosis;Oxidation and antioxidant system

肝纤维化（liver fibrosis）是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经过程，肝星状细胞激活是肝纤维化发展的中心环节，不同肝病的发病机理有所不同，但肝内氧化及抗氧化体系的平衡在肝纤维化发生中发挥重要作用，其主要原因是氧自由基刺激肝星状细胞转化为肌成纤维细胞，激活巨噬细胞释放炎症介质导致肝纤维化形成[1]。胆维他片在维持细胞各种功能方面起重要作用，其分子中的巯基可以减轻或终止组织细胞的损伤，从而保护肝细胞作用[2]。本文主要探讨胆维他片对肝纤维化大鼠肝中抗氧化体系的影响，现报道如下。

1材料与方法

1.1材料  实验时间：2018年7月～2019年7月;实验动物：雄性Wistar大鼠30只，体重283.52～213.24 g，平均体重（240.22±10.13）g。实验动物购于温州医科大学动物中心。本研究经动物伦理会审批通过。

1.2药品和试剂  胆维他片购于成都国嘉制药有限公司（生产批号：H20180232，25 mg/片）。临用前用双蒸馏水配制所需药物浓度：丙二醛（MDA）、抗氧化体系的过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒，均购于南京建成生物公司。

1.3方法

1.3.1模型方法和分组给药  实验Wistar大鼠按随机数字表法分为三组：正常对照组、肝纤维化模型组、胆维他片组，每组10只。除正常对照组外，其余各组均要求制备大鼠肝纤维化模型。将花生油与四氯化碳（CCl4）按1∶9比例油剂，按0.6 ml/100 g腹腔内注射10% CCl4混溶液，2次/周，一共12周，进行大鼠损伤性肝纤维化造模。正常对照组和肝纤维化模型组不给药，胆维他片组于造模开始第1天给予灌胃给药，胆维他片组每只大鼠给予25 mg胆维他片溶于250 ml的蒸馏水中，灌胃给药3 ml药水，同时正常对照组和肝纤维化模型组每只大鼠给予3 ml蒸馏水灌胃，持续12周，各组均给普通饲料和自来水。第12周后处死动物放血，肝脏组织留取检测指标。

1.3.2肝脏匀浆液制备  取1 g肝组织加10 ml生理盐水放入匀浆器中进行匀浆，10000 r/min离心5 min分离上清液，置于-20℃冰箱保存待检。

1.3.3生化指标测定  取三组大鼠肝匀浆液，按照试剂说明书测定CAT、GSH、MDA和SOD指标。

1.3.4肝脏病理学检查  取出部分左叶肝组织用10%中性甲醛固定1 d，用石蜡包埋后组织切片，采用Masson's染色胶原，并进行半定量分析[3]：-：正常;+：汇管区和中央小叶静脉周边胶原增多;++：汇管区和中央小叶静脉胶原开始穿插、分隔成肝小叶;+++：胶原纤维已经分隔肝小叶;++++：胶原纤维隔继续增宽、增多。

1.4统计学方法  采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以（n）表示，采用？字2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1三组肝内氧化及抗氧化比较  纤维化模型组和胆维他片组CAT、SOD、GSH低于正常对照组，MDA高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;胆维他片组CAT、SOD、GSH均高于纤维化模型组，MDA低于纤维化模型组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2三组肝纤维化比较  纤维化模型组和胆维他片组肝纤维化分期高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;胆维他片组肝纤维化分期低于纤维化模型组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3讨论

肝纤维化的发生发展与肝内氧自由基的增加密切相关，它不仅直接导致肝细胞的损伤，同时刺激炎症因子的释放，因此，自由基、肝内氧化和抗氧化体系在肝纤维化形成和发展过程中起着重要的作用[4]。肝星状细胞是产生细胞外基质的主要来源细胞，肝内的自由基和脂质过氧化不仅可促进肝星状细胞的增殖，同时使肝星状细胞向肌成纤维细胞发生转化[5]。在肝内正常条件下，肝内的氧化和抗氧化体系非常复杂，还原型GSH主要在肝脏合成，广泛分布于机体各器官内，在维持细胞生物功能方面起重要作用。有研究发现[1]，GSH是肝细胞内的供氧体与解毒剂，同时还是氧自由基的清除剂，能保护蛋白的氧化损伤，为肝内主要的抗氧化物质、可与SOD一起作用，消除肝内的超氧阴离子保护肝细胞内的膜稳定。MDA目前公认为肝内自由基产生的一个间接指标[5]。胆维他片的药理作用表明，胆维他能明显增加肝内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶、GSH硫转移酶活性和GSH还原酶的活性，从而增强肝细胞的抗氧化能力。

本研究结果显示，纤维化模型组和胆维他片组CAT、SOD、GSH低于正常对照组，MDA高于正常对照组（P<0.05）;胆维他片组CAT、SOD、GSH均高于纤维化模型组，MDA低于纤维化模型组（P<0.05）。说明肝纤维化形成后，肝内MDA明显增加，而肝内抗氧化物CAT、SOD和GSH明显下降，胆维他片能显著升高肝脏抗氧化物，同时降低了氧自由基，提高了肝内抗氧化能力。纤维化模型组和胆维他片组肝纤维化分期高于正常对照组;胆维他片组肝纤维化分期低于纤维化模型组（P<0.05）。说明胆维他片具有抗肝纤维化的作用。

综上所述，胆维他片具有改善肝纤维化的作用，机理可能是通过胆维他片的抗氧化发挥抗肝纤维化的作用，为今后胆维他的应用肝纤维化治疗提供理论依据。

参考文献：

[1]Sánchez-Valle V，Chávez-Tapia NC，Uribe M，et al.Role of oxidative stress and molecular changes in liver fibrosis：a review[J].Curr Med Chem，2012，19（28）：4850-4860.

[2]许有信.复方阿嗪米特腸溶片与胆维他片治疗慢性胆囊炎合并腹胀的疗效比较[J].中国处方药，2015，13（5）：83-84.

[3]陶小红，邱皓，吕晓云.内质网应激相关蛋白在肾纤维化大鼠肾组织中的表达[J].甘肃科技，2019，35（6）：99-101.

[4]夏婷，张瑾，姚佳慧.氧化应激在酒精性肝病中作用机制的研究进展[J].中国药理学通报，2017，33（10）：1353-1356.

[5]Luangmonkong T，Suriguga S，Mutsaers HAM，et al.Targeting Oxidative Stress for the Treatment of Liver Fibrosis[J].Rev Physiol Biochem Pharmacol，2018（175）：71-102.

收稿日期：2019-8-2;修回日期：2019-8-12

编辑/杜帆