苦参凝胶对大鼠胚胎和胎仔的发育毒性研究

张 飞 葛新宇 顾性初 蔡金娜 王歆玮 金春慧 张 杰*

［1 上海海天医药科技开发有限公司，上海 200032；2 美迪西普亚医药科技（上海）有限公司，上海 201203］

苦参具有清热燥湿、杀虫、利尿的功效，外治用于阴道炎［1］。苦参凝胶是国内首个阴道用的卡波姆凝胶制剂，已在临床使用多年，其主要成分苦参总碱由苦参提炼而来。苦参凝胶具有抗菌消炎的作用，临床上广泛用于宫颈糜烂、赤白带下、滴虫性阴道炎及阴道霉菌感染等妇科慢性炎症［2］。本研究根据国家食品药品监督管理总局（CFDA）《药物生殖毒性研究技术指导原则》（2006 年11 月）［3］，并遵守国家食品药品监督管理总局《药物非临床研究质量管理规范》（局令第2 号），采用SD 大鼠对苦参凝胶的胚胎-胎仔发育毒性进行评价，也为该药临床应用提供安全性依据。

1 材料与方法

1.1 受试药物 受试药物苦参凝胶（国药准字Z20050058），由贵阳新天药业股份有限公司生产，批号 140814；空白凝胶（基质），批号140901。

1.2 动物及饲养SPF 级SD 大鼠：60 只雄性，120 只雌性，购自北京维通利华试验动物技术有限公司，实验动物质量合格证号：11400700072834。

动物笼养在温度和相对湿度分别为20～26 ℃和40～70% 的SPF 级动物房内，动物房间的温度和相对湿度每天记录2 次。动物照明每天明暗交替约12 h，自由摄取SPF 大小鼠生长繁殖饲料和实验动物饮用水。

1.3 实验方法

1.3.1 实验分组SD 大鼠按雌雄1∶1 进行合笼，观察到阴栓或阴道涂片精子阳性的日期计为妊娠第0 天（d0）。将80 只孕鼠随机分为4 组，分别为苦参凝胶高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组（空白凝胶），每组20 只。

1.3.2 剂量设计 高剂量组动物2 次/d-1，1 mL·kg-1·次-1，约为临床人用等效剂量的25.6 倍（成人体质量以60 kg计）；中剂量组动物1 次/d，1 mL·kg-1·次-1，约为临床人用等效剂量的12.8 倍（成人体质量以60 kg 计）；低剂量组动物1 次/d，0.5 mL·kg-1·次-1，约为临床人用等效剂量的6.4 倍（成人体质量以60 kg 计）；对照组动物2 次/d，1 mL·kg-1·次-1。妊娠第6～15 天通过阴道途径给药，高剂量和对照组每天2 次，间隔约5 h，其余各组每天1 次。

1.4 指标观察 给药期间每天观察记录动物的一般情况，有无阴道流血、流产、死亡等。

1.4.1 摄食量 给药前1 次，给药后每周2 次记录大鼠24 h摄食量。

1.4.2 母鼠体质量测定 记录妊娠第0、5 天，给药期间（妊娠第6、7、8、9、10、11、12、13、14、15 天）及妊娠第20 天（解剖当天）雌鼠体质量。

1.4.3 母鼠大体解剖检查 在雌鼠妊娠第20 天，将雌鼠处死，进行大体尸解检查。各组肉眼观察发现异常的器官、组织与对照组一同进行固定保存，必要时进行组织病理学检查。

1.4.3.1 雌鼠剖腹产检查 依次检查胎盘情况、着床点数、活胎数、死胎数和吸收胎数，并在体视镜下检查卵巢黄体数。

1.4.3.2 胎仔外观检查 子宫连胎、胎仔、胎盘称重，辨性别，测量顶臀长、尾长并进行外观检查。

1.4.3.3 胎仔骨骼检查 每窝取约1/2 活胎进行骨骼检查。固定、染色、透明后进行骨骼检查，观察有无骨化延迟和骨骼变异或畸形。

1.4.3.4 胎仔脏器检查 每窝取约1/2 活胎进行脏器检查。徒手切片进行脏器检查。

2 结果

2.1 苦参凝胶各剂量组对孕鼠一般情况的影响 实验期间，苦参凝胶各剂量组和对照组雌鼠外观状态良好，行为活动基本正常，未出现与药物毒性相关的动物死亡。大体解剖检查，未发现与给药有关的雌鼠脏器病变。

2.2 苦参凝胶各剂量组对孕鼠摄食量的影响 各妊娠周期剂量组摄食量与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 苦参凝胶对孕鼠摄食量的影响 （±s，g）

表1 苦参凝胶对孕鼠摄食量的影响 （±s，g）

2.3 苦参凝胶各剂量组对母鼠胎盘的影响 苦参凝胶各剂量组净体质量、胎盘重、胎盘个数、胎盘个体重量与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 苦参凝胶对母鼠胎盘的影响 （±s）

表2 苦参凝胶对母鼠胎盘的影响 （±s）

2.4 苦参凝胶各剂量组对孕鼠体重的影响 妊娠第0、5天，给药期间（妊娠第6、7、8、9、10、11、12、13、14、15 天）及妊娠第20 天（解剖当天），苦参凝胶各剂量组孕鼠与对照组相比，体质量差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.5 苦参凝胶各剂量组对胚胎形成与胎仔体格发育的影响 苦参凝胶各剂量组着床数、黄体数、活胎数、吸收胎数、活胎率及着床前、后丢失率与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表3 苦参凝胶对妊娠雌鼠体质量的影响 （±s，g）

表3 苦参凝胶对妊娠雌鼠体质量的影响 （±s，g）

表4 苦参凝胶对胚胎形成的影响

苦参凝胶各剂量组与对照组相比，胎盘重、胎仔顶臂长、胎仔尾长差异均无统计学意义（P＞0.05）；苦参凝胶中、低剂量组与对照组相比，活胎仔重差异无统计学意义（P＞0.05），而高剂量组活胎仔重较对照组增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表5 苦参凝胶对胎仔体格发育的影响 （±s）

表5 苦参凝胶对胎仔体格发育的影响 （±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05

2.6 苦参凝胶各剂量组对胎仔外观的影响 胎仔外观畸形观察，各组部分胎仔发现头部异常、躯干血肿、四肢血肿、尾部血肿和无尾等异常，但异常发生率，苦参凝胶各剂量组与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），见表6。

表6 苦参凝胶对胎仔外观的影响

2.7 苦参凝胶各剂量组对胎仔骨骼发育的影响 妊娠第20天，每窝取约1/2 活胎行胎仔骨骼发育检查，苦参凝胶各组发现少量骨骼延迟和骨骼畸形，与对照组相比，骨骼延迟发生率和骨骼畸形发生率，供试品各剂量组与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），见表7。

表7 苦参凝胶对胎仔骨骼的影响

2.8 苦参凝胶对胎仔脏器的影响 妊娠第20 天，取剩余约1/2 胎仔进行内脏检查，结果显示各组少数胎仔发现肾盂腔异常、脑室异常和鼻腔异常，但畸形发生率，苦参凝胶各剂量组与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），见表8。

表8 苦参凝胶对胎仔脏器畸形的影响

3 讨论

苦参凝胶是苦参的有效成分（苦参总碱）与赋形剂（卡波姆）等辅料混合而成的阴道给药凝胶剂。苦参凝胶也是首个阴道用的卡波姆凝胶制剂，属于水溶性凝胶，主要用于治疗宫颈糜烂和滴虫性阴道炎、阴道霉菌感染等妇科慢性炎症。此外有很多研究［4-9］是在验证苦参凝胶治疗妇科炎症等疾病的临床疗效的同时，观察了其不良反应的发生情况，结果均表明苦参凝胶的临床不良反应发生率低，无明显毒副作用。

本研究结果显示，与对照组相比，苦参凝胶低、中、高剂量组未出现与给药有关的雌鼠摄食量改变。苦参凝胶各剂量组孕鼠的黄体数、胚胎着床数、着床前丢失率及着床后丢失率与对照组比较，均无显著性差异，说明苦参凝胶对于母体生殖机能无明显的影响；苦参凝胶各剂量组孕鼠的活胎数、死胎数、胎仔体体质量、平均胎盘质量与对照组比较均无显著性差异；苦参凝胶各剂量组胎仔的骨骼异常率及骨化程度均无明显改变，脏器畸形与变异率均无明显改变。上述结果提示，苦参凝胶高剂量对SD 大鼠无明显的母体毒性和胚胎-胎仔毒性，无致畸作用，对胎仔发育无不良反应。