口蹄疫抗体检测试验的试验设计

汤天元，赵永虎

（1.甘肃省甘州区碱滩畜牧兽医工作站；2.甘肃省甘州区畜牧兽医工作站，甘肃张掖734000）

近年来由于活畜调运频繁，加大了疫病发生的风险。为了防止疫病的流行和发生，2018年农业农村部发布了2号公告，根据《中华人民共和国动物防疫法》（以下简称《动物防疫法》）等法律法规，为了减少畜禽长距离移动，降低动物疫病传播风险，维护养殖业生产安全和畜禽产品质量安全。并规定畜禽养殖场（户）出售或者运输畜禽前，应当按照《动物防疫法》《动物检疫管理办法》规定，向当地动物卫生监督机构申报检疫，提交动物检疫申报单和相关动物疫病实验室检测报告等申报材料。经检疫检测合格的，方可调运。各个省市区县也出台了相关的政策法规。还有的省市还出台了更为严格的政策法规，就给兽医实验室增加了许多责任和任务。

甘州区做为甘肃省的养殖大县，牛羊数量大，牲畜调运频繁。这样就增加了实验室人员的工作量，同时也增加了实验经费。以中国农业科学院兰州兽医研究所研制的抗体检测试剂盒为例，口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒原来是2400元，10块板，按试剂盒说明可检测100至200份血样。现在用改进型口蹄病毒O型液相阻断ELISA疫抗体检测试剂盒是1600元，5块板。按试剂盒说明可检测血样50至100份。通过近年来试验室工作，改进试验方法，重新设计试验步骤，我们实验室每块酶标板可做80份血样，每个试剂盒则可做400份样本。

1 实验材料与方法

1.1 以中国农业科学院兰州兽医研究所研制的改进型口蹄病毒O型液相阻断ELISA疫抗体检测试剂盒是为例。可检测50—100份血样。以牛羊血样检测为例。按照试剂盒说明书的样品布局图，有两种布局图，可检测样品50份、100份。

1.2 这种类型的试验布局是为了检测畜群的抗体效价水平能否达到保护水平。

1.3 此试验每份血样的检测成本为32-16元。

2 改进试验方法，重新设计试验步骤。

2.1 同样用中国农业科学院兰州兽医研究所研制的改进型口蹄病毒O型液相阻断EIISA疫抗体检测试剂盒。

2.2 江苏新康医疗器械有限公司生产的一次性反应板。

如图1所示，在每孔里面加入配制好的1：25的PBS液75ul，然后加入待检样品25ul.随后依次混匀稀释，每次提取25ul依次往下稀释三次，至26倍稀释。提取50ul加入酶标板。按图2所示的布局图加样

图1 96孔一次性反应板布局图

图2 96孔酶标板检测80份样品布局图

然后按试剂盒说明书操作完成实验。这样就可以每个酶标板就可以加样80份血样。

2.3 在2.2中提取50ul稀释完成的样本加到酶标板，还需要加入50ul的病毒抗原，这就达到1：128了。

2.4 根据试剂盒说明书判定试验结果。

2.5 此试验布局适用于对外调牲畜抗体水平检测，直接可根据结果确定群体保护率。每块酶标板可加样80份。

2.6 此试验每份血样的检测成本为4元。

3 讨论

根据试剂盒说明书，抗体效价≥1：128，保护率达99%以上，效价≤1：16不保护，效价在1：22～90之间，50%保护，这只说明了单个样本的保护，不能说明群体的保护。而改进后重新设计的试验方法测出的则为群体中有多少样本的保护在99%以上，就可直接算出群体保护率。这样就节约了成本。