白细胞分化抗原147、血管内皮生长因子蛋白表达与肺腺癌患者临床分期、淋巴结转移的关系

杨继岚 胡凤娣 谢琳

[摘要] 目的 探讨白细胞分化抗原147（CD147）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达与肺腺癌患者的临床分期、淋巴结转移的关系。 方法 选取昆明医科大学第三附属医院2015年10月～2018年10月肺腺癌患者78例，取其肺腺癌组织与相应癌旁正常肺组织标本，以免疫组织化学SP法检测患者肺腺癌组织和相应癌旁正常肺组织标本中CD147、VEGF蛋白表达，并分析CD147、VEGF蛋白表达和患者淋巴结转移、临床分期之间关系。 结果 肺腺癌组织中CD147、VEGF蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织，差异有统计学意义（P < 0.05）;有淋巴结转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌组织中CD147、VEGF蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移及临床分期Ⅰ～Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 肺腺癌组织中CD147、VEGF蛋白均呈高表达，且两者表达水平与淋巴结转移、临床分期相关，可将其作为肺腺癌诊断、恶性程度评估的重要指标。

[关键词] 肺腺癌;白细胞分化抗原147;血管内皮生长因子;临床分期;淋巴结转移

[中图分类号] R736.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）08（b）-0127-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of leukocyte differentiation antigen 147 （CD147） and vascular endothelial growth factor （VEGF） protein and clinical stage， lymph node metastasis in patients with lung adenocarcinoma. Methods A total of 78 patients with lung adenocarcinoma from October 2015 to October 2018 in the Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University were enrolled. The lung adenocarcinoma tissues and corresponding normal lung tissues were taken and the lung glands were detected by immunohistochemical SP method. The expressions of CD147 and VEGF protein in cancer tissues and corresponding normal lung tissues were analyzed， and the relationship between CD147， VEGF protein expression and lymph node metastasis and clinical stage was analyzed. Results The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues were higher than those in corresponding normal lung tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The positive expression rates of CD147 and VEGF protein in lung adenocarcinoma tissues with lymph node metastasis and clinical stage Ⅲ-Ⅳ were higher than those in non-lymph node metastasis and clinical stage Ⅰ-Ⅱ patients， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Conclusion The expressions of CD147 and VEGF in lung adenocarcinoma are highly expressed， and their expression levels are related to lymph node metastasis and clinical stage. They can be used as an important index for the diagnosis and malignant degree evaluation of lung adenocarcinoma.

[Key words] Lung adenocarcinoma; Leukocyte differentiation antigen 147; Vascular endothelial growth factor; Clinical stage; Lymph node metastasis

近年來，随大气污染情况与人口老龄化加剧、主动与被动吸烟人数增加等因素影响，肺癌发病率逐渐增高，每年肺癌发病人数占据全部癌症发病总人数的13%左右，且病死人数约占全部癌症病死总人数的18%，居各类型恶性肿瘤之首[1-3]。临床研究[4-5]报道，肺癌起病较隐匿，75%左右肺癌患者于疾病确诊时已进展中晚期，存在转移证据，致使治疗难度及患者病死率提升。故探寻一种肺癌早期诊断及病情评价的灵敏方法对指导临床采取及时准确治疗、延长患者生存周期均有重要意义。白细胞分化抗原147（CD147）为免疫球蛋白超家族中的一员，可刺激肿瘤附近间质纤维母细胞分泌大量基质金属蛋白酶，参与细胞外基质降解，与肿瘤转移侵袭密切相关[6]。血管内皮生长因子（VEGF）为一种正性血管生成调节因子，能促进肿瘤及组织新生血管生成，在肿瘤发生、进展、侵袭中起着重要作用[7-8]。此外，肺腺癌为肺癌重要类型之一，其在肺癌中占据着较大比例。本研究以免疫组织化学SP法测定患者肺腺癌组织和相应癌旁正常肺组织标本中CD147、VEGF蛋白表达，旨在分析其表达和患者临床分期、淋巴结转移等病理参数之间关系，为临床早期诊断、病情评估和靶向治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年10月～2018年10月昆明医科大学第三附属医院（以下简称“我院”）收治的肺腺癌患者78例，其中男46例，女32例;年龄35～79岁，平均（62.13±7.09）岁;肿瘤大体类型：周围型50例，中央型28例;肿瘤大小：>3 cm 41例，≤3 cm 37例;分化程度：低分化24例，高、中分化54例;淋巴结转移：有淋巴结转移37例，无淋巴结转移41例;临床分期：Ⅲ～Ⅳ期40例，Ⅰ～Ⅱ期38例。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准  ①符合《内科学》[9]中肺癌临床诊断标准，且经手术病理组织检查明确为肺腺癌，并取距原发肿瘤边缘>5 cm的癌旁正常肺组织标本（通过HE染色确认无肿瘤浸润）;②术前未采取放化疗及免疫治疗;③临床和病理资料完整;④患者对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准  ①合并其他类型恶性肿瘤者;②合并精神系统、血液系统、内分泌系统疾病者;③肝、肾、心等脏器存在器质性病变者;④妊娠、哺乳期女性。

1.3 方法

所有标本均采用多聚甲醛（4%）固定，采取石蜡包埋，制作4 μm厚度切片。

1.3.1 检测方法  以免疫组织化学SP法检测患者肺腺癌组织和相应癌旁正常肺组织标本中CD147（检测试剂盒购于北京中山金桥生物技术有限公司，生产批号：ZA-4055）、VEGF（检测试剂盒购于迈新生物技术有限公司，生产批号：18080824366）蛋白表达，有关操作均严格按照试剂盒说明书施行，均由同一组医师执行操作，以已知VEGF、CD147阳性肺腺癌组织与磷酸盐缓冲液替代一抗作为阳性及阴性对照。

1.3.2 结果判定  VEGF阳性信号定位于细胞浆内，CD147阳性信号定位于细胞浆和细胞膜;依据阳性细胞数与细胞染色强度应用半定量积分法施行结果判断，每张切片取高倍视野5个，观察不低于500个细胞，按照视野下阳性细胞所占百分比施行评分：阳性细胞数>75%计4分，>50%～75%计3分，>25%～50%计2分，>5%～25%计1分，≤5%计0分;并按照细胞染色强度施行评分：呈棕褐色计3分，棕黄色计2分，淡黃色为1分，未着色计0分，而后将两项积分相乘，最终得分5～12分判断为阳性，0～4分判断为阴性[10]。

1.4 观察指标

①比较患者肺腺癌组织和相应癌旁正常肺组织标本中CD147、VEGF蛋白表达;②分析CD147、VEGF蛋白表达和患者淋巴结转移、临床分期之间的关系。

1.5 统计学方法

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者肺腺癌组织和相应癌旁正常肺组织标本中CD147、VEGF蛋白表达比较

肺腺癌组织中CD147、VEGF蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。

2.2 CD147、VEGF蛋白表达与患者临床分期、淋巴结转移的关系

有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌组织中CD147、VEGF蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移及临床分期为Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义（均P < 0.05）。见表2。

3 讨论

肺腺癌属肺癌重要类型之一，病因与遗传、电离辐射、致癌物质长期接触史、肺部慢性感染史、吸烟、大气污染等多种因素有一定相关性，疾病早期检出率低，治疗难度大，易产生转移，远期生存率较低[11-13]。探寻一种疾病早期诊断和病情评价方法一直为临床研究重点。

临床研究[14]发现，肿瘤侵袭及转移为多种因素参与的一个复杂过程，包含原发肿瘤浸润、细胞外基质产生降解、肿瘤新生血管形成、肿瘤细胞向靶组织转移等环节。CD147是免疫球蛋白超家族成员之一，相对分子量为58 kDa左右，可调控单羧酸转运蛋白活性度、参与生殖及机体免疫应答等生理过程[15]。近年来，有研究[16]报道，CD147可诱导肿瘤间质纤维母细胞大量分泌基质金属蛋白酶，进而加速细胞外基质成分降解，为肿瘤浸润及转移提供有利条件。CD147还能直接上调肿瘤自身VEGF抑或间接经过基质金属蛋白酶上调肿瘤细胞和附近基质细胞内VEGF表达水平，进而加速新生血管形成，促进肿瘤细胞生长、增殖[17]。同时，相关研究[18]发现，在CD147表达水平增高时，可增强脱离原发病灶肿瘤细胞同间质、脉管之间黏附作用，使肿瘤细胞更易于散播。覃玲艳等[19]报道，CD147可经由转化因子通路途径加速上皮及间质转化，促使肿瘤细胞易于侵入到间质中，致使肿瘤细胞转移潜能增高。既往研究[20]发现，CD147在子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、前列腺癌等多种肿瘤中均呈高表达，其表达水平和肿瘤浸润及转移有一定相关性。但关于其在肺腺癌中的表达情况相关报道尚较少。本研究显示，CD147蛋白在肺腺癌组织中阳性表达率高于癌旁正常肺组织，且有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌组织中CD147蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移及临床分期为Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示CD147蛋白于肺腺癌组织中呈高表达，且其表达水平与淋巴结转移、临床分期密切相关。

VEGF为目前临床已知作用最强血管内皮生长因子之一，可对血管内皮细胞产生作用，加速血管内皮细胞大量增殖，促进新生血管形成，进而为肿瘤增殖及转移提供有利微环境[21-23]。同时，VEGF通过和其受体相结合，还可促进血管基底膜产生降解，提升血管通透性，促进肿瘤细胞脱落及转移[24]。相关研究[25-27]指出，正常组织中VEGF表达水平较低，而在恶性肿瘤患者癌组织及血清中，VEGF表达水平可显著增高，且增高幅度与肿瘤恶性程度有一定相关性。张冉等[28]研究显示，肺癌组织中VEGF阳性表达率显著高于正常组织。本研究肺腺癌组织中VEGF蛋白阳性表达率高于癌旁正常肺组织，且有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的肺腺癌组织中VEGF蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移及临床分期为Ⅰ～Ⅱ期患者（均P < 0.05）。提示肺腺癌组织中VEGF蛋白呈高表达，且其表达水平与淋巴结转移、临床分期密切相关。

综上，CD147、VEGF蛋白在肺腺癌组织中均呈现高表达，且其表达水平与淋巴结转移、临床分期具有密切关系，可将其作为肺腺癌诊断、恶性程度评估的重要指标，亦提示可通过阻断两者信号传导通过作为肺腺癌治疗新靶点。

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（收稿日期：2018-12-18  本文编辑：王   蕾）