超声软指标联合无创DNA产前检测筛查胎儿染色体异常效果

何晓俊 马玉成 冷 培

华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)(430016)

产前筛查是降低染色体异常儿出生的有效手段，羊水染色体核型分析诊断胎儿非整倍体准确率较高[1]，是诊断胎儿染色体异常的金标准，但有创性操作可增加术后流产、羊水渗漏、宫内感染等风险[2]，且不适用于有羊水穿刺禁忌孕妇。超声产前诊断胎儿染色体异常有重要价值，但指标阳性机率增大，对指标阳性孕妇是否行羊水穿刺染色体核型分析尚存在较大争议[3]。孕妇外周血胎儿游离DNA无创产前检测大大提高了准确率，其检查敏感性、特异性可达99%，假阳性率为0.1%[4]。本院开展染色体异常儿筛查，通过超声初步筛查，再联合无创胎儿游离DNA检测技术，大大提高了筛查准确率，降低有创操作带来的风险。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性收集2015年2月—2017年3月本院妇产科门诊常规产检的孕妇2621例，超声软指标异常孕妇均定期配合产检，并接受随访至分娩。年龄(32.2±6.0)岁(19～39岁)，经产妇1268例，初产妇1353例。纳入标准：单胎妊娠，B超检查和实验室检查资料完整。排除标准：多胎妊娠，流产、早产、死胎等，妊娠期糖尿病、高血压等妊娠合并症或并发症孕妇，临床资料缺失，不配合检查孕妇。本研究获得本院伦理会批准，孕妇均签署知情同意书。

1.2 超声检测

GE Voluson E8型彩色超声诊断仪,探头频率3.5MHz。常规B超产前检查，扫查胸腹脏器、脊柱、颜面、头颅等实质性脏器，并测量胎心、羊水深度、胎心率、股骨、肱骨、腹围以及双顶径、头围等。超声软指标项目：①颈项透明(NT)增厚，妊娠11～13+6周超声检测NT大于第95百分位数[5]；②超声正中矢状切面鼻骨强回声提示鼻骨发育不良或缺失；③肠管强回声与骨组织强度相当为肠管回声增强；④单脐动脉；⑤脉络膜回声显示椭圆或圆形囊性结构区为脉络膜囊肿；⑥心室强回声光斑；⑦单侧或双侧侧脑室宽度达10～15mm提示侧脑室扩张；⑧肾盂分离；⑨股骨长径小于正常孕周两个标准差。

1.3 无创胎儿游离DNA产前检测

采集孕妇外周血10 ml于EDTA抗凝管充分混匀中，4℃分离血浆提取DNA，紫外分光光度法鉴定DNA纯度和完整性，运用高通量基因检测技术DNA测序。三体高风险诊断标准：Z=(待测染色体的比例-总体人群的比率)/对照组待测染色体的方差，Z值≥3为三体高危，Z值≤3为单体高危。

1.4 羊水染色体核型分析

常规消毒，超声引导下经腹壁穿刺子宫至羊膜腔抽取羊水20 ml离心取沉淀物加入羊水培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱8～12d，适当更换培养液，观察羊水细胞生长良好，加入秋水仙素，经37℃低渗、固定、制片、G显带、染色处理，计数和染色体核型分析。采用徕卡GSL-120扫描系统采集分裂相；CytoVision软件分析数据。核型描述按照ISCN2016进行。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 超声及DNA检测

超声检出软指标阳性胎儿共153例，检出率5.8%(153/2621)，其中NT增厚49例，鼻骨发育不良或缺失32例，肠管回声增强24例，单脐动脉15例，心室强回声光斑10例，侧脑室扩张8例，轻度肾盂分离9例，股骨短6例。对153例行无创胎儿游离DNA检测，发现8例高风险胎儿，检出率0.3%(8/2621)，其中6例21-三体异常，1例18-三体异常，1例13-三体异常。具体见表1。

表1 超声软指标与无创胎儿DNA检测结果分析(例)

2.2 DNA检测与羊水染色体核型分析及妊娠结局

胎儿DNA检测高危孕妇8例行羊水染色体核型分析结果一致，符合率100.00%，见表2。

表2 胎儿游离 DNA与羊水染色体核型分析对比

2.3 妊娠结局

对8例高危孕妇均行引产证实；138例低风险孕妇流产9例，129例顺利分娩，实验室诊断均为染色体正常。

3 讨论

我国每年约10万染色体异常儿出生，其中10%为遗传因素导致[6]， 21-三体、18-三体、13-三体是最常见的染色体异常类型[7]，发病率分别为1/1200-1/600、1/4000-1/5000、1/10000[8-9]，男性性染色体非整倍体发病率1/500，女性1/850[10]。产前筛查是降低染色体异常胎儿出生的主要诊断措施。传统产前诊断技术均为侵入性操作，且产前诊断周期长，受取材时间、样本质量、试剂等多种因素影响可出现试验失败现象，限制了其在临床的推广应用。长期以来医学界一直在寻找一种无创获得胎儿DNA的方法。

超声对胎儿器官结构异常诊断准确率较高，常规超声检查可发现结构畸形的染色体异常胎儿，随着彩色超声诊断技术不断提高，妊娠11周后超声检查可清晰显示胎儿全身器官结构，对脉络丛囊肿、心室强回声光斑、肠管回声增强、单脐动脉、侧脑室扩张等微小畸形能准确判断[11]。孕中早期超声软指标异常往往提示胎儿染色体异常，NT是孕11～13+6周常规进行超声软指标检测项目，对判断胎儿染色体核型异常有重要帮助[12]。另外，胎儿鼻骨异常或缺失等微小畸形均与胎儿染色体异常密切相关[13]。但是超声软指标阳性并不完全提示胎儿染色体变异，目前异常诊断准确率仅为70%～80%[14]，进一步提高胎儿染色体异常筛查的准确率是关键，因此有学者指出对单项超声软指标阳性的胎儿进行无创DNA检测，分析胎儿核型具有重要临床意义。

无创胎儿DNA技术是通过检测母体外周血中胎儿细胞数目，发现游离胎儿 DNA 片段并进行DNA分析，相比有创检测更加安全。Dan等人[15]采用高通量测序技术检测来自母体血浆中的胎儿游离DNA片段，成功检测到染色体异常，与有创检测结果符合率达100%。近年来，国内也开展了大量无创检测胎儿DNA的研究，均取得了较高的检测准确率[16]。本研究对超声软指标阳性胎儿孕妇采用高通量测序技术检测外周血中胎儿游离DNA片段，发现染色体异常胎儿与羊水穿刺染色体分析结果符合率100%，提示无创DNA检测技术对胎儿染色体异常筛查具有重要临床价值，可有效避免有创检测技术的风险和弊端。