固相萃取-三重四级杆气质联用法测定油桃中硝苯菌酯

景赞，刘超，刘晓碧

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

硝苯菌酯主要用于防治柑橘类、核果类、仁果类、瓜类蔬菜和观赏植物的红蜘蛛和白粉病，有良好的防治效果，同时还具有杀螨卵的作用，是从敌螨普中分离出来具有最高生物活性的异构体之一。目前，对于硝苯菌酯的研究主要集中在病虫害防治方面[1-5]。GB2763-2016 规定了敌螨普的临时限量，但缺少相应的检测方法，因此对于硝苯菌酯的风险评估很难开展[6]。随着近年来人们对食品安全的重视，农药残留问题不容忽视，相应的对检验检测手段也提出了更高的要求。当前质谱类仪器普及程度逐年加大，加之质谱类仪器有着定性、定量准确的优点，检验检测标准中应用到此类仪器的比例也在逐步提高[7-8]。有少量采用液质联用检测硝苯菌酯的报道，但缺少相应的国家标准，而且检测范围也未涉及到油桃。本研究结合工作实际，应用气质联用和固相萃取技术，建立了一种快速检测硝苯菌酯的方法，为硝苯菌酯标准检测方法的建立提供一定的数据支撑。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

油桃，购于超市。

硝苯菌酯标准品，100 μg/mL，购于坛墨质检科技有限公司；乙腈、丙酮等均为色谱纯，购于百灵威科技有限公司。

1.2 仪器与设备

气质联用仪，TQ-8030，岛津中国有限公司；高速均质器，T25，IKA 仪器设备有限公司；高速冷冻离心机，TGL16M，长沙湘智离心机仪器有限公司。CleanertS C18（2 g/12 mL），Cleanert PestiCarb/NH2（0.5 g/6 mL），均购于博纳艾杰尔科技有限公司。

1.3 硝苯菌酯标准溶液配制

取硝苯菌酯标准品1 支，准确移取1 mL，用丙酮稀释定容至10 mL，混匀，配制成浓度为10 μg/mL 的标准储备溶液，冷藏备用。按照样品制备方法，提取空白基质溶液，用于不同浓度标准系列工作溶液的配制。

1.4 样品提取液的制备

除去样品不可食用部分，用制样机打碎，准确称取20 g（精确至0.01 g），加入乙腈50 mL，高速均质2 min，加入7 g 氯化钠，再继续均质提取1 min，5 000 r/min 冷冻离心5 min，移取乙腈层提取液20 mL，待净化。

用10 mL 乙腈活化CleanertS C18 柱，移入上述20 mL 提取液，并用15 mL 乙腈洗脱，将收集的溶液在40 ℃水浴中旋转浓缩至1 mL 左右，在Cleanert PC/NH2柱中加入2 cm 高无水硫酸钠，加样前先用4 mL 乙腈+甲苯（3+1）预洗柱子，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，再用少量乙腈洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中，用25 mL 乙腈+甲苯（3+1）洗脱，收集所有流出液于鸡心瓶中，旋转浓缩近干，再加入5 mL丙酮于40 ℃水浴中旋转蒸发，进行溶剂交换2 次，最后使样液体积约为1 mL，过0.22 μm 滤膜上机分析[7]。

1.5 检测条件

进样口：250 ℃，不分流（高压进样）；毛细管柱：Rtx-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；柱温采用梯度升温：起始温度40 ℃（1 min），以25 ℃/min 升至130 ℃，再以10℃/min 升至260 ℃（15 min）；线速度：70 cm/sec；进样体积：1 μL；载气：高纯氦气。

溶剂延迟：5 min；离子源为电子电离源，温度220℃；MS 接口温度：260 ℃。

2 结果与分析

2.1 前处理及质谱条件的优化

乙腈对绝大多数农药残留都有比较好的提取效果[9]，所以本方法选择乙腈作为提取溶剂，加入氯化钠饱和水相，使水相与乙腈分层，同时在后期净化处理时，加入无水硫酸钠去除多余水分。油桃中存在比较多的糖分、色素、维生素等物质，如果不净化很容易干扰测定结果，选择CleanertS C18 柱和Cleanert PC/NH2柱可以去除绝大多数的干扰物质。

农药残留测定中基质效应是不可避免的，本研究将丙酮和空白基质溶液配制的标准溶液分别予以考量，在相同仪器条件下测定，结果表明空白基质溶液配制的标准点的峰面积要比丙酮配制的高20%左右。为减少基质效应，标准溶液采用空白基质溶液配制。硝苯菌酯在70 eV 电子轰击下产生的碎片离子如图1 所示（见下页），选择质荷比大、响应高的碎片离子进行二级碎裂，得到定性定量离子对，见表1（下页），以此建立气质联用方法。相比GB23200.8-2016，该方法扩大了使用范围，同时串极质谱方法较单极质谱，有更低的检出限和更好的抗干扰能力[10]。

图1 硝苯菌酯碎片离子质谱图Fig.1 The fragment ions of meptyldinocap

表1 保留时间和质谱参数Table 1 Retention time and MRM parameters

2.2 线性范围与检出限

将硝苯菌酯标准溶液用油桃空白基质提取液稀释成0、0.2、0.5、1、2、4 μg/mL 的标准系列工作溶液，以浓度与对应的定量离子色谱峰的峰面积绘制标准曲线。以3 倍的S/N 计算该方法的检出限，以10 倍的S/N 计算该方法的定量限，计算结果以全果计（下同），结果见表2。

表2 线性范围、检出限和定量限Table 2 Linear range,detection limit and quantitative limit

2.3 加标回收率

为验证方法准确性，向油桃空白样品中添加硝苯菌酯农药标准溶液，添加浓度为0.05、0.1、0.2 mg/kg 三个水平，依照样品提取方法制备提取液，平行测定3 次，结果见表3。空白样品色谱图见图2，加标样品色谱图见图3。

表3 加标回收率和相对标准偏差（n=3）Table 3 Recoveries and relative standard deviation (n=3)

分析表3 中数据可知，硝苯菌酯回收率在77.9%～85.3%，RSD 均低于5%，满足国家标准的有关要求。由图2、3 可以看出，硝苯菌酯保留时间附近无干扰物质，峰型对称，说明前处理净化效果较好，质谱串联技术的运用使得方法抗干扰能力更强，定性和定量更为准确。

图2 空白样品总离子流色谱图Fig.2 Total ion current chromatogram of blank sample

图3 加标样品总离子流色谱图Fig.3 Total ion current chromatogram of spiked sample

2.4 精密度

采用浓度为0.3 μg/mL 的基质标准溶液，平行测定6次，测定方法的精密度。该结果显示精密度RSD 为3.3%，精密度良好。

3 讨论

我国是农药生产和消费大国，农药滥用和残留超标现象比较普遍，带来的安全性问题不容忽视，因此对检验检测技术的要求也越来越高[11-12]。本研究采用乙腈提取，固相萃取柱净化，利用气相-串联质谱联用技术进行测定，考察了基质效应对测定结果的影响，建立了油桃中硝苯菌酯农药残留的快速检测方法。结果显示该方法具有较高灵敏度、准确度和精密度，线性关系良好，适合于油桃中硝苯菌酯的日常快速检测。