2型糖尿病患者血小板参数及血小板表面相关膜糖蛋白和线粒体膜电位表达的临床意义*

2019-10-12余司文武强王艳华贺乐奇沈芳

贵州医科大学学报 2019年9期

余司文，武强，王艳华，贺乐奇，沈芳

(复旦大学附属上海市第五人民医院检验科，上海 200240)

随着生活水平的提高及生活习惯的改变，高热量食物摄入增加、人口老龄化加剧及运动量减少，2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病，type 2 diabetes mellitus，T2DM)已成为继心血管病、肿瘤后第3大流行非传染疾病[1-3]。目前研究显示，2型糖尿病的发病机制不仅与家族遗传、生活方式、内分泌干扰物、肠道菌群等因素有关，还可能与血小板异常有关[4-5]，但此方面研究较少。本研究拟通过检测T2DM患者血小板计数(blood platelet count，PLT)、血小板平均体积(mean platelet volume，MPV)、血小板压积(thrombocytocri，PCT)、血小板分布宽度(platelet distribution width，PDW)、血小板聚集功能(platelet aggregation tes，PAgT)、血小板表面相关膜糖蛋白(CD41b、CD61和CD62P)及线粒体膜电位(Δψm)的变化，探讨血小板异常对T2DM患者的临床意义及与T2DM发病机制的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月-2018年5月收治的符合中国2型糖尿病防治指南(2013 年版)糖尿病诊断及分型标准[6]的T2DM住院患者75例(男性45例，女性30例)，平均52.3岁；选取同期健康体检人群50例作为对照组，无高血压、糖尿病、心、肝、肾及血液等疾病(男性20例，女性30例)，平均45.6岁。所有参与者均签署知情同意书。

1.2 检测指标

所有被检测人员(T2DM患者和对照组)在受检前2周内均不能服用对血小板功能有影响的药物，保持正常饮食和生活规律，避免剧烈运动，空腹8 h[7]后于第2天清晨空腹抽取肘静脉血 2 mL、15%乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝，用日本Sysmex XN9000全自动血球分析仪检测PLT、MPV、PCT及PDW；(2)肘静脉血1.8 mL、3.2%枸橼酸钠抗凝，用Model 700型全血血小板聚集仪(Chrono-log公司)检测PAgT；(3)肘静脉血1.8 mL、3.2%枸橼酸钠抗凝，用FACSCalibur型流式细胞仪(美国BD公司)检测CD41b、CD61、CD62P和Δψm的荧光阳性百分率。所有检测指标均要求4 h内完成检测。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 PLT、MPV、PCT、PDW和PAgT

与对照组比较，T2DM组被检者PLT计数降低，但差异无统计学意义(P>0.05)；PDW及MPV 显著升高，差异有统计学意义(P<0.05) ; 两组被检者PCT比较，差异无统计学意义(P>0.05) ; 与对照组比较，T2DM组患者的PAgT升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组被检者 PLT、MPV、PCT、PDW及PAgT比较Tab.1 The PLT, MPV, PCT, PDW and PAgT of the two groups

2.2 Δψm和CD62P、CD41b和CD61

与对照组比较，T2DM组的CD62P、CD41b表达水平均升高，差异有统计学意义(P<0.05);Δψm的含量降低，差异有统计学意义(P<0.05);CD61的表达水平升高但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2，图1、2。

表2 两组被检者 CD41b、CD61、CD62P和Δψm比较Tab.2 Comparison of CD41b, CD61, CD62P and Δψm between the two groups

3 讨论

T2DM患者最具有特异性的并发症是微血管病变，这增加了缺血性心血管事件的风险[8]，因此及早发现、及时处理血管性病变，对延缓其并发症进程及改善预后显得尤为重要。目前，T2DM微血管病变在常规体检中难以发现，大部分患者都得不到及时、有效的处理[9]。因此，临床上对T2DM微血管病变的早期筛查，已成为一项迫在眉睫的难题。本研究结果表示，T2DM患者外周血中血小板Δψm降低(P<0.05)，PLT数量降低，PAgT、PDW、MPV水平升高(P<0.05)。有学者研究表明，血小板要避免不被激活、黏附、聚集，本身就要具有一定的能量，线粒体是血小板产生能量的最主要场所，而血小板线粒体膜电位的高低反映血小板能量储备力的大小[10]。有不少学者发现T2DM患者血小板MPV、PDW均大于对照组[8]，PLT数量下降[11]；Kroemer还发现血小板Δψm表达降低是细胞早期凋亡的重要反映指标[12]，MPV、PDW 的增高不仅与糖尿病密切相关，还是其微血管病变的一个高危因素[13]，PAgT含量越高，血小板更易发生黏附和聚集，血栓形成的可能性越大[14]。因此，本研究有理由认为，T2DM 患者可能长期处于内分泌紊乱的状态，导致血小板自身能量消耗(PLT减少)，血小板提早凋亡(Δψm减低)，刺激机体骨髓本身生产大血小板代偿(MPV和PDW升高)，血小板聚集功能加强(PAgT升高)，更易粘附，使血管形成微血栓。众所周知，血小板表面相关膜糖蛋白由质膜糖蛋白(GPⅡb-Ⅲa、GPⅠa-Ⅱa 和GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ等)和颗粒膜糖蛋白(CD62P和CD63)组成，参与血小板粘附、聚集和活化等一系列的反应，在血栓性疾病的发生与发展中起着重要作用[15]。其中CD62P是仅表达于静息血小板a颗粒膜表面的一种蛋白[16]，正常情况下不表达或低水平表达[17]，而CD41b、CD61是以活性状态存在于未被激活的血小板上，并不与黏附蛋白结合[18]。本研究结果显示，T2DM组CD41b和CD62P表达水平均高于与正常对照组(P<0.05)，但CD61表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，可以认为T2DM患者机体受到高糖刺激，血小板a颗粒内的Weibel-palade小体迅速与细胞膜融合，使CD62P在短时间内高表达，促使血小板活化[19]，诱导血小板内质膜释放增加及GPⅡb/Ⅲa (CD41b、CD61)复合物表达增加[20]。GPⅡb/Ⅲa 复合物表达增加介导血小板大量粘附在内皮细胞上，改变CD41b/CD61立体构型，促使GPIIb/IIIa与黏附蛋白结合，从而诱导血小板粘附、聚集和释放等活化功能增强，形成血栓[21]，但其具体机制有待于进一步研究。另外，本研究血小板参数均采用检测者的外周血，方便采集且检测时间较短，大大减少体外人为因素对血小板的激活，可以快速、准确地得到检测结果，因此建议临床上可以将PLT计数、MPV、PDW、PAgT、Δψm、CD41b及CD62P等指标作为评估T2DM患者血管并发症风险的早期指标，同时还可以对其病程进行及时的监控。