血清miR-210及miR-155对先兆子痫早期诊断的临床价值

徐峰， 王莹

(南通市第一人民医院 妇产科， 江苏 南通 226001)

先兆子痫(pre-eclampsia，PE)是与高血压、蛋白尿、血小板减少或肾功能不全相关的妊娠特异性综合征，严重危害孕产妇的健康[1]。世界范围内孕产妇PE患病率为2%～5%，病死率超过10%[2]。目前，PE诊断主要依靠测量血压、分析血液和尿液标志物，但这些指标的特异性不强[3]。因此，筛选出PE早期诊断的特异性标志物对于该病的早期预防及治疗意义重大。微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是真核生物中广泛存在的长约21～23个核苷酸的RNA分子，可调节基因表达[4]。虽然有研究显示，miRNA表达的失调如miR-210和miR-155等与PE的发生发展密切相关，但因研究的样本人群过少(仅20例)， 其结果的代表性有待进一步确定[5-6]。因此，本研究通过选取PE孕妇和健康孕妇各60例，比较血清miR-210和miR-155的相对表达水平，以期为PE的早期诊断提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月-2018年12月就诊的PE孕妇和健康孕妇各60例，PE孕妇要求符合《妇产科学》第5版诊断标准[3]，即至少2次出现收缩压≥160 mmHg或(和)舒张压≥110 mmHg，且妊娠20～34周时伴有严重蛋白尿(≥2 g/24 h)，排除多胎妊娠或非自然受孕者；健康孕妇要求孕期无PE症状且临床资料完整，排除妊娠期间有其他并发症。

1.2 血液采集和指标测定

收集所有孕妇就诊(或孕检)时的清晨空腹血，将血样装于5 mL离心管中，室温静置1 h，3 000 r/min，4 ℃离心5 min，取上清液，置于-80 ℃冰箱中保存。此外，收集所有孕妇就诊(或孕检)时的临床资料，包括年龄、孕周、体质量指数(body mass index, BMI)、收缩压、舒张压、血红蛋白、尿素氮和肌酐，血压采用欧姆龙HEM-7071上臂式电子血压计(上海涵飞医疗器械有限公司)测量，取坐位右上臂肱动脉血压，测量2次记录平均值；血红蛋白选用XT-4000型全自动血液分析仪(日本希森美康株式会社)检测，尿素氮采用人尿素氮酶联免疫试剂盒(上海科顺生物科技有限公司)测定，肌酐采用AU5 800全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司)测定。

1.3 血液miR-210和miR-155表达

采用TaqMan®miRNA纯化试剂盒(赛默飞世尔科技中国有限公司)提取细胞总RNA。采用实时定量荧光PCR法检测血液miR-210、miR-155的表达。根据目标基因的mRNA 序列，按照引物设计的原则，用设计软件Primer express 3.0 设计并合成引物及探针，见表1。进行RNA反转录后，以反转录产物为模板，在ProFlexTM实时定量PCR仪(赛默飞世尔科技中国有限公司)上进行扩增，反应条件为85 ℃、 3 min，85 ℃、20 s，42 ℃ 、40 s，循环35次。采用2-ΔΔCT法计算miR-210和miR-155表达量。

表1 miR-210、miR-155及U6引物序列及产物Tab.1 The primer sequences used in this study

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料

两组孕妇的年龄、BMI指数、孕周、血红蛋白和尿素氮比较，差异无统计学意义(P>0.05)；但PE组孕妇的收缩压、舒张压和肌酐水平均明显高于对照组，差异有高度统计学意义(P<0.01)，提示除收缩压、舒张压以及肌酐水平外，PE组和对照组孕妇的一般资料均具有可比性。见表2。

表2 两组孕妇的一般资料比较Tab.2 Comparison of clinical information between two groups of pregnant women

2.2 血清miR-210和miR-155水平比较

PE组孕妇的血清miR-210和miR-155水平均高于对照组孕妇，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表3。

表3 两组孕妇血清miR-210和miR-155表达水平Tab.3 The impact of PE on relative expression levels of serum miR-210 and miR-155

2.3 血清miR-210和miR-155的ROC曲线分析

孕妇血清miR-210的ROC曲线下面积为0.904(95%CI为0.847～0.961，P<0.01)，miR-210相对表达量的临界值为3.46时，其预测PE的敏感度和特异性最佳，分别为85.3%和82.2%；孕妇血清miR-155的ROC曲线下面积为0.843(95%CI为0.766～0.920，P<0.01)，miR-155相对表达量的临界值为2.86时，其预测PE的敏感度和特异性最佳，分别为79.2%和74.9% 。见图1。

图1 孕妇血清miR-210、miR-155水平预测PE的ROC曲线Fig.1 ROC curves of serum miR-210 and miR-155 levels used for predicting PE

3 讨论

近年来，虽然已有多种潜在蛋白质标志物用于检测或预测PE，如妊娠相关蛋白、胎盘生长因子及其受体、内皮因子和胎盘蛋白13，然而诊断的敏感性和特异性有待确定[7]。与这些潜在蛋白质标志物相比，miRNA的主要优点是检测成本相对较低、通量高、灵敏度和特异性高[8]。有研究表明miR-210参与了人体内多种代谢的过程，包括氧化应激、细胞凋亡以及癌症的发生发展等[9]。PE孕妇妊娠过程中，由于滋养细胞重建母体血管，胎儿-母体界面的氧张力远低于健康妊娠[10],与此同时miR-210通过靶向与胎盘线粒体功能障碍相关的几种蛋白质，如铁硫簇支架蛋白(iron-sulfur cluster scaffold homolog,ISCU)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶1α亚复合体4、钾通道调节因子1(potassium channel modulatory factor 1，KCMF1)等，破坏线粒体的氧化还原反应，加重了胎儿-母体界面的缺氧状态[11]。已有研究表明Toll样受体3激活通过低氧诱导因子和核因子KB(nuclear factor-kappa B,NF-KB)p50亚基诱导胎盘miR-210上调，导致信号转导及转录激活蛋白6和白介素-4水平降低，提示缺氧/NF-kB/miR-210通路在PE的发病机制中发挥了重要作用[12]。此外，ISCU可以促进PE的发生，miR-210与ISCUmRNA 3′UTR结合可扰乱滋养细胞铁代谢，ISCU下调又与胎盘缺陷有关[11]；miR-210的异常过表达也会通过干扰人胎盘中KCMF1介导的信号传导，从而促成PE的发生[13]。本研究结果显示，PE孕妇血清miR-210水平比健康孕妇上调，与上述研究结果相符，提示血清miR-210指标可作为PE诊断的参考指标。

本研究结果还显示,PE孕妇血清miR-155较对照组孕妇上调，这可能是因为miR-155是内皮依赖性血管舒张的重要调节因子[14]，可通过下调富半胱氨酸61参与PE的发生发展[15]。已有研究证实，PE重症孕妇胎盘miR-155水平显著增加，内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)表达降低[16]。最新研究还表明miR-155涉及eNOS通路在PE的发病机制中的作用，miR-155可抑制滋养层细胞中的细胞侵袭，而eNOS的过表达时miR-155的抑制作用被抵消，揭示了miR-155通过负调节eNOS在减弱细胞迁移行为[17]。因此，本研究有理由认为，PE孕妇血清miR-155水平上调参与了PE的发展，血清miR-155水平也可作为PE诊断的参考指标。

此外，本研究ROC曲线结果表明，miR-210用作预测PE的ROC曲线下面积大于miR-155, 且临界值取最佳时，miR-210预测PE的敏感度和特异性均高于miR-155，表明miR-210用于预测PE的临床价值高于miR-155。

综上所述，本研究提示孕妇血清miR-210和miR-155表达上调与PE的发生发展有关，可作为PE诊断的潜在标志物，且miR-210用于预测PE的临床价值高于miR-155。临床上对于血清miR-210和miR-155表达过高的患者，应予以重视，预防PE的发生。