鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验

荆丽珍

摘 要 本试验目的是采用6种常用抗菌药物进行药敏试验，再筛选出敏感药物，为预防和治疗大肠杆菌病提供理论依据并指导临床用药。方法是对送检的病死鸡和濒死鸡进行了剖检、病理学诊断和病原检测，无菌采取的病死鸡组织进行细菌的分离鉴定，并通过药敏纸片法对其纯化培养物进行药敏试验。

关键词 大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验

鸡大肠杆菌病是由某些致病性血清型大肠埃希菌引起的鸡的不同类型疾病的总称。大肠杆菌致病性菌株的致病因子是由侵袭力、感染力和致病性这三个主要特征决定。大肠杆菌主要有菌体抗原、荚膜抗原、鞭毛抗原三个病原类型，这三种抗原形成了众多的血清型。该菌对外界抵抗力比较弱，一般高压蒸汽灭菌锅121℃30min便可将其杀死，对一般消毒药的抵抗力也很弱，常用的消毒药水均能将其杀死。

本实验对海阳六合鸡场送检的濒临死亡的鸡只和病死鸡进行了解剖检查，并且进行了病理学诊断和病原检测，确诊该海阳鸡场发生了大肠杆菌病。通过做药敏试验，选择出几种药物，而这些药物通常是对此致病菌比较敏感的，然后進行药物治疗，以此达到控制疫情效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料及实验动物

所有病料来自海阳六合养殖场送检的疑似大肠杆菌病的病鸡、濒临死亡鸡40只，已经死亡鸡只的死亡时间不超过18h。实验动物为：20只健康小白鼠和20只7日龄健康雏鸡。

1.1.2 仪器与设备

恒温箱，光学显微镜，全自动高压灭菌器，超净工作台，美国微量移液器、剪刀、试管等。

1.1.3 培养基与试剂

伊红美兰琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通肉汤培养基、营养琼脂培养基。

卡那霉素、新霉素、庆大霉素、青霉素、链霉素和四环素等药敏片，硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管。

1.2 方法

1.2.1 外部观察和病理剖检

根据大肠杆菌病的流行病学特点，表现出来临床症状，以及对送检的40只病死鸡和濒临死亡的鸡只进行的病理临床剖检及相关病理症状观察，根据表现出来的相关剖检特征， 可以对大肠杆菌病作出初步诊断。

1.2.2 细菌分离培养

在无菌条件下采集濒临死亡鸡只的肝脏、肾脏、脾脏、心血等组织器官，分别接种在普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美兰琼脂平板及普通营养肉汤，放于恒温箱中37℃，24h后观察培养基的变化。

1.2.3 染色镜检

用接种环分别挑取具有代表性的麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂和普通营养琼脂平板上培养24h的菌落进行涂片，将涂片在火焰上方15-20cm处进行顺时针方向旋转固定，在火焰中穿过三次，等待涂片冷却后进行革兰氏染色。显微镜下观察并记录菌体形态。

1.2.4 生化试验

a. 糖发酵试验：用灭菌接种环取疑似菌，依次将其接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管内，置于温箱内37℃，24h，然后对观察到的现象进行记录。

b. MR试验和VP试验：用灭菌接种环取疑似菌，接种于葡萄糖蛋白胨水，置于温箱内37℃，24h之后分别加入MR和VP指示剂，然后观察并记录结果。

c. 吲哚试验：取蛋白胨水培养管，先往培养管内加入少量的乙醚，然后把橡胶塞密切塞上，来回摇动试管，充分混匀乙醚和培养液，最后在试管架上静置片刻，等到乙醚浮在液面上层的时候，沿着管壁加入2-3滴吲哚试剂，并观察其颜色变化。

2 结果与分析

2.1 外部观察及剖检结果

患病鸡只多精神状态差，羽毛松乱，不想进食，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色。有的病鸡肛门下方羽毛潮湿、污秽粘连，关节肿胀、跛行，眼睛颜色呈灰白色，角膜污浊不清；剖检病鸡肝脏肿大、质脆，有纤维素性坏死灶；脾脏出现肿大，肺脏有充血、淤血的现象；肾肿大，有尿酸盐附着；十二指肠有出血变化。

2.2 细菌分离培养结果

将接种细菌的普通营养琼脂平板，37℃培养20h，可见上面出现大小均等偏中间，高于琼脂板圆形，表面呈现光滑湿润的菌落，半透明状，偏灰色的菌落。在麦康凯琼脂平板上，表面呈中等大小，光滑湿润的粉红色菌落。在伊红美兰琼脂上长出黑色带金属光泽的菌落。在普通肉汤中平均散在其中呈浊状，在试管的最下面可见灰白色物质，用手扇一下闻到粪臭味。

2.3 细菌形态学观察结果

病死鸡只的肝脏、肾脏、脾脏等组织器官培养物经过涂片染色，显微镜下镜检，都可出现两端钝圆，多数呈散在排列，有的有2-3个连在一起的革兰氏阴性短杆菌，没有芽孢。

2.4 生化试验结果 结果详见表1.

3 讨论与小结

本次试验是主要从可疑病鸡及病死鸡体内分离得到的可疑菌，通过镜下及培养条件观察、生理生化试验分析鉴定，鉴定的结果为鸡大肠杆菌的感染。通过药敏试验的结果，得出卡那霉素、新霉素、庆大霉素等药物对大肠杆菌敏感度高，四环素药物为中度敏感的药物，青霉素、链霉素等药物具有耐药性。根据大肠杆菌抗原鉴定和扩增结果，由此更加断定我所分离得到的待测菌为大肠杆菌。由于不同菌株对药物的敏感性存在明显差异，一般在使用药物治疗病原菌时，应该增加对病原菌的耐药性检测，从而选择出对病原菌敏感的药物，为临床合理用药做出指导，用以减缓细菌耐药性的产生。加强饲养管理，疫苗免疫，合理选药、提高疗效。

参考文献：

[1]蔡宝祥.家畜传染病学[M].第四版.中国农业出版社，2005，50-51.

[2]戴建军.郑明球.等.不同来源鸡大肠杆菌致病性研究[J].畜牧与兽医，2001，33（2）：3-5.